Питательные среды. Методы выделения чистых культур бактерий

Цель:    

    – знать питательные среды, методы выделе­ния чистых культур

        аэробных и анаэробных бактерий, методы стерилизации;

    – уметь сделать посев для изолирова­ния колоний аэробных и для

       культивирования анаэробных микроорганизмов.

 

Изучение разнообразных свойств бактерий может производиться в лаборатории только в условиях, когда микро­бам обеспечена возможность размножаться и проявлять свою жизнедеятельность. Одним из главных условий культивирования является применение соответствующих питательных сред. Питательные среды готовят из есте­ственных продуктов животного и растительного происхождения (мяса, молока, яиц, сыворотки крови, овощей, дрожжей, казеина и др.), из искусственно полученных из этих продуктов веществ (пептона, аминопептида, дрожжевого экстракта, кукуруз­ного экстракта и др.), или из химически чистых соединений с точно известным составом (аминокислот, углеводов, витаминов, минеральных солей).

В микробиологической промышленности существует много самых разнообразных питательных сред. В зависимости от их свойств, состава и назначения питательные среды делятся на несколько групп:

По происхождению:

· естественные (молоко, желатин, картофель);

· искусственные (приготовлены из специально подо­бранных природных компонентов, например: мясопептонные среды содержат мясной перевар, пептон и определенные концентрации солей);

· синтетические (состоят из химических солей, амино­кислот, углеводов, витаминов и т.д.).

По консистенции:

(в зависимости от процентного содержа­ния агар-агара)	- твердые (3-5% агар-агара);
	- полужидкие (0,3%, 0,5% и 0,7% агар-агара);
	- жидкие (0 % агар-агара).

По составу:

§ простые (мясопептонный агар – МПА, мясопептонный бульон – МПБ, пептонная вода);

§ сложные (мясопептонная основа и различные добавки, напри­мер: кровяной агар, сывороточный агар, полужидкие углеводные среды Гисса, сахарный бульон и др.).

По назначению:

© общего назначения – для культивирования боль­шинства бактерий (МПА, МПБ, кровяной агар и др.);

© специального назначения – для особых целей.

Среди них выделяют элективные и дифференциально-диагностические среды:

- желточно-солевой агар для стафилококков,

- щелочная пептонная вода для холерного вибриона;

- дифференциально-диагностические среды для энтеробактерий –  

среды Эндо, Левина, Плоскирева.

 

Требования к питательным средам

 

1. Питательность (содержание всех необходимых питательных веществ).

2. Изотоничность (обеспечивает осмотическое равновесие меж­ду клеткой и средой, облегчает процессы осмоса и диффузии питательных веществ и продуктов метаболизма).

3. Определенная рН (обеспечивает функционирование фермен­тов бактерий).

4. Определенный Н-потенциал (обеспечивает окислительно-восстановитель­ные процессы в клетке бактерий; разный для аэробов и анаэробов).

5. Стерильность (позволяет правильно учесть результаты).

6. Прозрачность (позволяет увидеть рост бактерий).

 

Самостоятельная работа студента

На практическом занятии

1. Приготовление чашек Петри с мясопептонным агаром.

2. Приготовление скошенного мясопептонного агара.

3. Посев культуры стафилококка на скошенный агар и в мясопептонный бульон.

4. Просмотр демонстрации, оформление и подпись протоко­лов.

5. Произвести посев смеси бактерий на чашку с питательной средой, обосновать цель высева.

Методические указания

 

Работа 1

Для приготовления скошенного агара пробирки с 3-4 мл расплавленного мясопептонного агара оставьте до полного за­стывания в наклонном положении. Угол наклона 25-30° достигается путем подкладывания под пробирки рейки.

Работа 2

Для приготовления чашек Петри с агаром фламбируйте над горелкой горлышко колбы с расплавленным мясопептонным агаром и разлейте в стерильные чашки Петри расплавленный агар. Толщина слоя агара 0,5-0,7 см.

Работа 3

При пересеве культуры на жидкие и плотные питательные среды необходимо соблюдать стерильность. В левую руку возь­мите обе пробирки (с ростом культуры и питательной средой), поместите их на 2 пальца левой руки в полугоризонтальном по­ложении и придерживайте их большим пальцем так, чтобы все манипуляции осуществлять под контролем глаза. Прокалите петлю на пламени горелки перед взятием культуры. Затем тремя пальца­ми правой руки (как писчее перо) возьмите бактериологическую петлю, а мизинцем над пламенем выньте пробки из пробирок.

1. При посеве культуры на скошенный агар пробирку со средой держите в руке скошенной поверхностью вверх. Простерилизованной и охлажденной петлей возьмите материал для по­сева (в данном случае культуру стафилококка) и осторожно вве­дите петлю в конденсационную жидкость скошенного агара. За­тем скользящим движением по скошенной поверхности среды нанесите штрихи от одной стенки пробирки к другой снизу вверх; после посева прокалите петлю.

2. Посев культуры в агаровый столбик (уколом) про­изводят в плотную среду (МПА) при помощи бактерио­логической петли. Для этого прокаленной и остуженной петлей прикасаются к культуре микроба и вносят ее в пробирку с питательной сре­дой. Посев производят уколом в столбик среды до дна пробирки.

3 При посеве культуры бактерий в жидкие питательные среды необходимо учесть следующее: не допускать, чтобы жидкая среда выливалась и смачивала пробку при полугоризонтальном положении пробирки.