Первые программы вакцинации от ВИЧ

 

"Маргарет Хеклер в апреле 1984 года пообещала вакцину в течение двух лет. По прошествии этого времени знания о вирусе увеличились. Его способность мутировать удивила исследователей. Это также чрезвычайно затруднило разработку вакцины. Даже в этом аспекте Роберт Галло занял лидирующую позицию. Он был назначен главой HIVAC (вакцины против ВИЧ), международной группы по вакцинации, имеющей связи в 10 странах. Вместе с ВОЗ они выступили за Африку как экспериментальную базу для этих рискованных проектов."[3.3]

 

"... в 1984 году в рамках крупнейшей финансируемой США программы исследований в области СПИДа, в Киншасе был запущен проект SIDA, изначально под Робин Райдера и Джонатана Манна, который стал более известным последующие годы, как глава Глобальной программы по СПИДу ВОЗ. В течение следующих семи лет, вплоть до своего закрытия после беспорядков в Киншасе в 1991 году, проект SIDA был крупным игроком в исследованиях ВИЧ в Африке.[48]

 

Другие важные исследования по СПИДу были проведены в финансируемом Францией Национальном институте биомедицинских исследований (INRB), также в Киншасе, и это включало некоторые спорные работы французского врача Даниэля Загури. В 1986 году, к удивлению и шоку многих своих коллег, Загури объявил, что он уже ввел себе, некоторым своим коллегам и неопределенному числу конголезских “добровольцев” генно-инженерную вакцину против СПИДа. (Эта вакцина состояла из вируса оспы, который используется в качестве носителя вакцины против оспы, а также части оболочки или внешней оболочки ВИЧ-1.) Это было первое в мире испытание вакцины против СПИДа на людях. Хотя Загури не хотел отвечать на вопросы об этом испытании, [49] в другом месте сообщалось, что добровольцами были около тысячи конголезских солдат и французский коллега, который ранее случайно укололся ВИЧ-инфицированной иглой[50]. Загури опубликовал краткие отчеты о части этой работы в письме и статье, опубликованных в 1987 и 1988 годах [51]; в них он утверждал, что испытание было санкционировано Министерством здравоохранения Заира. Одним из его сотрудников и последним автором статьи 1988 года был Роберт Галло.

 

Много лет спустя концепция и проведение испытания были исследованы и подвергнуты суровой критике в докладе, опубликованном Управлением по защите от исследовательских рисков (OPRR) Национального института здравоохранения.[52] среди прочего, было обнаружено, что вакцинный вирус первоначально был предоставлен учеными NIH и что в испытаниях использовалась и французская версия вакцины. Кроме того, выяснилось, что “добровольцы” на самом деле включали восемнадцать ВИЧ-отрицательных конголезских детей в возрасте от двух до восемнадцати лет. Добровольцами, как утверждал Загури, были их матери, все больные СПИДом, которые настоятельно просили, чтобы их дети были включены в эксперимент. Никакой независимой проверки последующего состояния здоровья детей не проводилось. В докладе также задокументировано дальнейшее испытание вакцины с участием " примерно 30 ВИЧ-серонегативных взрослых, включая военных добровольцев.” Результаты этого исследования так и не были опубликованы, хотя, в очередной раз, Загури сообщил исследователям, что испытуемые остались здоровы. Впоследствии OPRR ввела ограничения на исследовательскую деятельность Роберта Галло с участием людей и запретила Загури проводить любые дальнейшие исследования с использованием предоставленных США материалов или технологий.

 

Кэрол Левин, в 1991 году, рассказывая об испытании вакцины на детях, заметила: “этот пример показывает, как легко этические соображения могут быть отброшены в сторону под рубрикой "гуманизм" или "сострадание". Дети избежали перинатальной передачи инфекции; они не подвергались риску случайного контакта со своими матерями. Фактически, существовал еще один, возможно, даже более важный вопрос: не могли ли другие члены сообщества также подвергнуться риску из-за введения нового — и потенциально передающегося-вирусного агента. В испытаниях Загури это была живая вакцина, содержащая жизнеспособную часть оболочки ВИЧ. Полный смысл этого благонамеренного, но потенциально очень опасного эксперимента стал очевиден только в девяностых годах, когда молекулярные биологи начали обнаруживать сверхъестественную способность лентивирусов к рекомбинации и передаче генетической информации от одного к другому. Например, в 1995 году Пол Шарп и его коллеги завершили свою работу “межвидовая передача и рекомбинация вирусов AIDS “следующим комментарием:”рекомбинация дает возможность для "эволюционного скачка", поскольку генетические изменения гораздо более радикальны, чем постепенное накопление индивидуальных мутаций, и поэтому будущий гибридный вирус может значительно изменить биологические (и патогенные) свойства [54]". [3.2 стр. 100-101]

 

Во время встречи с Э.Хупером в 1990 г.:

"Галло сказал, что он снабжает Загури некоторыми очищенными белками и “некоторым интеллектуальным вкладом.”" [3.2 стр. 111]

 

"Некоторые из участников умерли из-за прививок. Галло участвовал в судебных процессах по делу Загури, а также власти США отреагировали на неоднократное игнорирование этических норм, которое продемонстрировал Галло. (Олдхаус -91, Дорозинский -91)." [3.3]

 

Ложноположительные тесты

 

"Галло приказал своим сотрудникам собрать образцы крови из Африки, и в одной из своих первых публикаций Нахмиас и Галло показали, что в старых образцах крови из Заира с 1959 года 90% были положительными на антитела к ВИЧ. Этот отчет был выпущен в массы с огромным эффектом. Когда вскоре после этого было обнаружено, что старые образцы крови давали ложные положительные результаты из-за ненадежных методов тестирования, с научной точки зрения было справедливо опровергнуть их первое сообщение.

 

Но Галло и Нахмиас продолжили дальнейшие исследования образцов заирской крови 1959 года. Они также включали образцы 1967 и 1980 годов. Всего у них было 1213 образцов. Благодаря улучшенным методам тестирования они обнаружили, что 1212 человек оказались ВИЧ-отрицательными. Один был положительным. Однако личность, предложившая кровь, не установлена. Но в заголовке отчета они заявили: ДОКАЗАТЕЛЬСТВА ИНФЕКЦИИ ЧЕЛОВЕКА ВИРУСОМ, ПОДОБНЫМ HTLV III / LAV В ЦЕНТРАЛЬНОЙ АФРИКЕ, 1959 г. (Nahmias -86). Этот заголовок стал источником тысяч статей в газетах, в которых фраза «СПИД в Африке уже 1959 год» должна была укорениться в общественном мнении.

 

Еще быстрее и беспечнее были Галло вместе с Флосси Вонг-Стаал, когда они в статьях в журналах Nature и Blood опубликовали карты распространения СПИДа в Африке. (Вонг-Стаал -85). В то время, согласно официальной статистике ВОЗ, на всем африканском континенте было зарегистрировано всего 3000 случаев СПИДа. Возможно, Галло уже знал, что СПИД будет быстро распространяться примерно в 10-12 из 53 стран Африки? «Высокоэндемичные» районы на карте были похожи на области другой публикации, представленной в 1972 году. Тогда компания Lippencott представила карту, на которой показано расположение проектов в рамках IARC (Международного агентства исследований рака). NCI Галло был партнером этого агентства." [3.3]

 

"Можно утверждать, что эти сомнительные результаты не принесли реального ущерба, за исключением, возможно, стран, которые были определены как ранние хозяева ВИЧ и СПИДа. Однако аналогичные документы, касающиеся Восточной Африки, имели серьезные и длительные последствия в отношениях правительств и населения к СПИДу и исследователям СПИДа. Вероятно, самым печально известным было исследование, опубликованное в 1985 году Карлом Саксингером и его боссом Робертом Галло из лаборатории биологии опухолевых клеток Национального института рака в Бетесде.[16] ретроспективно было установлено, что две трети небольшой группы детей, у которых взяли кровь в период с 1972 по 1973 год в угандийском районе Западного Нила, были положительными на ВИЧ. Средний возраст этой когорты составил 6,4 года, и на момент взятия они были клинически здоровы. Но в руках Саксингера пятьдесят пять из семидесяти пяти детей дали положительный результат на антитела к ВИЧ на ИФА, и пятьдесят из этих положительных результатов были затем подтверждены “недавно разработанным... повышенным чувствительным... иммуноблотом", который обнаружил несколько типичных белков ВИЧ. К сожалению, теперь кажется несомненным, что чувствительность была настолько повышена, что она дала ложноположительные результаты для отрицательных сывороток.

 

Авторы постулировали, что, возможно, причина, по которой высокие уровни ВИЧ-инфекции оставались незамеченными так долго, заключалась в том, что африканское население подвергалось воздействию вируса в течение длительного периода, и что современные инфицированные проявляли только субклинические инфекции (те, которые не вызывают болезни). Однако в другой статье, появившейся пять месяцев спустя, наблюдалось некоторое отступление [17]. Реактивность сыворотки теперь описывалась как представляющая " уникальный паттерн”; и было добавлено, что " антительный статус этой группы не был похож ни на одну нормальную или приобретенную группу риска синдрома иммунодефицита, ранее проверенную.” Также впервые было упомянуто об "относительно низких титрах" - или слабой реактивности. Тем не менее Саксингер и Галло продолжали предполагать, что они обнаружили “родственника или предшественника [ВИЧ]” или “самого[ВИЧ], но в популяции, акклиматизированной к его присутствию.” Более того, они добавили, что их исследования "предполагают вероятное африканское происхождение [ВИЧ]".

 

В аналогичном письме 1984 года из лаборатории Галло, на этот раз с Бобом Биггаром в качестве ведущего автора, сообщалось, что 12,4 процента сывороток от внешне здоровых амбулаторных пациентов в отдаленной сельской больнице в регионе Киву на востоке Конго дали положительный результат на ВИЧ на ИФА, [18] с “отличным " подтверждением той же повышенной чувствительности Вестерн-блота [19]. В более поздней работе Биггара и Галло сообщалось об очень высоком уровне заражения ВИЧ среди кенийцев, включая более 50 процентов девяноста девяти человек из Турканы, протестированных в период с 1980 по 1984 год в отдаленном северо-западном регионе.[20] опять же эти результаты были основаны на тестах ELISA, при этом результаты " подтверждаются Вестерн-Блот-анализом подмножества сывороток.”

 

Включение Стива Александера из Biotech Ltd. Роквилла, штат Мэриленд, в качестве соавтора, предполагает, что это (и ранее упомянутые работы), возможно, использовало его повышенную чувствительность к авидину-биотину Вестерн-Блот, который позже был ответственен за ложноположительные результаты, обнаруженные в исследовании Джеймса Мура о наркоманах Лексингтона в 1971/2. [21]

 

1985 году доктор Джеймс Мур из Национального института злоупотребления наркотиками организовал тестирование на ВИЧ более одиннадцати сотен хранимых сывороток от наркоманов, проведенное в 1971 и 1972 годах в исследовательском центре Национального института психического здоровья в Лексингтоне, штат Кентукки. (В те дни осужденных наркоманов отправляли в Лексингтон, а не в тюрьму.) Он отправил образцы Стиву Александру из Biotech Research, Inc. - компании, которая, по словам доктора Мура, была тесно связана с лабораторией Роберта Галло.. Три из этих сывороток оказались повторно положительными в двух разных анализах ELISA и вестерн-блоттинге, хотя название письма, которое исследователи написали в New England Journal of Medicine, свидетельствует об их осторожности: «Серопозитивность на HTLV-III в 1971 году. -1972 Лица, злоупотребляющие парентеральными наркотиками - случай ложноположительных результатов или заражения вирусами?»44

 

Несколько лет спустя их сомнения подтвердились, когда группе под руководством Роберта Ланге удалось отследить восемь из десяти наркоманов, чья кровь с начала семидесятых дала положительные результаты вестерн-блоттинга: семеро были живы и здоровы, восьмой погиб в автомобильной катастрофе в 1985 году.45 Дополнительные пробы крови были также взяты у двух бывших наркоманов, которые предоставили наиболее реактивные сыворотки 1971 года, и эти последние пробы оказались отрицательными на ВИЧ. Ланге пришел к выводу, что первоначальные результаты были ложноположительными, добавив, что это «возможно» было вызвано техникой повышения чувствительности, используемой Biotech для анализа вестерн-блоттинга. Ланге также пришел к выводу, что, учитывая размер и географическое распространение когорты наркоманов, маловероятно, что ВИЧ присутствовал в американском сообществе IVDU в 1972 году [ ссылка ]. [По ссылке указано, что 9 из 10 наркоманов, получивших ложноположительный диагноз, были неграми].

 

Вскоре после этого Боб Биггар и его коллеги написали еще одну статью для журнала "Ланцет"., сообщая, что антитела к ВИЧ, обнаруженные с помощью анализа ELISA, используемого в его исследованиях в Киву, “сильно коррелировали с уровнями антител против Plasmodium falciparum”, малярийного паразита [22]. Он предложил множество гипотез для объяснения необычной реактивности, включая возможность того, что ВИЧ может передаваться комарами или что могут быть задействованы другие, до сих пор не обнаруженные ретровирусы. Год спустя он отказался от большинства этих объяснений, о чем свидетельствует письмо, написанное им в New England Journal of Medicine, в котором он признал, что пациенты с рецидивирующей малярией могут показывать ложноположительные реакции в тестах на ВИЧ, “подготовленных таким образом, чтобы повысить чувствительность за счет специфичности” [23].

 

Это осторожное опровержение было заслугой Биггара, но потребовались другие исследователи, чтобы показать, что результаты Саксингера и Галло 1972/3 из Западного Нила были крайне маловероятны. Во-первых, группу под Джей Леви в Сан-Франциско опубликовал документ 1986 года, что свидетельствует, что ни одна сыворотка от 199 детей и взрослых полученная в 1968 году в Западном Ниле не была ВИЧ-положительной[24]. Также в 1986 году, Карсуэлл Уилсон Блед исследовал семьдесят шесть здоровых взрослых людей, которые были жителями Западного Нила. Используя конкурентный метод ИФА, который гораздо более специфичен, чем прямой ИФА, который использовался в лаборатории Галло, он обнаружил, что только одна сыворотка была ВИЧ-положительной. Напротив, он обнаружил, что 15,4 процента здоровых взрослых жителей Западного Нила, проживающих в главном городе Уганды Кампале, были ВИЧ-позитивными, что было типично для здоровых взрослых жителей города. Другими словами, ВИЧ вряд ли был эндемичен в Западном Ниле, и жители Западного Нила не были врожденно склонны к ВИЧ-инфекции, хотя, как и другие, они становились сильно инфицированными, когда переезжали в городской центр высокого риска.

 

Несмотря на сообщения Биггара о малярийных антителах, вызывающих ложноположительные результаты, и о потенциальных последствиях для результатов Киву, ни он, ни Саксингер, ни Галло никогда официально не признавали, что данные по Кении и Западному Нилу также должны были содержать ложноположительные результаты, или специально отказывались от этих работ. И никто из них никогда не пытался объяснить, как они могли обнаружить антитела к малярийному паразиту, а не к ВИЧ, не только в одном анализе, но и в двух совершенно разных." [3.2 стр. 106-107]

 

"Я спросил Галло, почему Биггар и Саксингер никогда не писали письма в соответствующие журналы, чтобы отозвать свои ошибочные результаты о распространенности ВИЧ, и в ответ он сказал две очень интересные вещи. Во — первых, он со смехом усомнился в компетентности одного из двух ученых, о которых идет речь, — я не скажу, какого именно, - сказав, что он всегда был немного неуклюжим, или что-то в этом роде. И во-вторых, он сказал, что его собственный вклад в различные ошибочные документы был минимальным, если вообще был. Он объяснил, что как руководитель лаборатории его имя просто автоматически появляется на бумаге. Однако только много лет спустя я понял всю историю. Ибо, хотя имя Роберта Галло фигурирует в четырех из пяти публикаций, которые ошибочно утверждали, что в Африке существуют высокие уровни HTLV-III(ВИЧ)-позитивности, оно отсутствует как в статьях, так и в письме, в котором Боб Биггар признал, что, возможно, произошла какая-то ошибка. Именно тогда я начал подозревать, что, когда я кричал на Биггара, я на самом деле кричал не на того человека." [3.2 стр. 111]

 

"В 1986 году профессор Ханс-Дитер Бреде, немецкий микробиолог из больницы Тайгерберг недалеко от Кейптауна, по-видимому, сообщил на конференции по СПИДу в Стамбуле, что он обнаружил, что несколько архивных южноафриканских сывороток оказались ВИЧ-положительными, самая старая из которых датирована 1963 годом. Д-р Бреде также заявил, что ему известно о нескольких случаях быстро смертельных заболеваний, подобных СПИДу, таких как агрессивный сарказм, пневмония и менингит, которые произошли в период с 1959 по 1974 год среди рабочих-мигрантов из Центральной Африки.

 

Однако в действительности все обстоит иначе. Когда я брал интервью у него по телефону и в письме несколько лет спустя, доктор Бреде отрицал, что говорил что-либо о ВИЧ-положительной сыворотке 1963 года, а позже согласился, что, вероятно, имел в виду сыворотку 1959 года из Бельгийского Конго, исследованную Нахмиасом. Что касается потенциальных архивных случаев СПИДа, он сказал, что в шестидесятые годы его коллеги по внутренней медицине и дерматологии познакомили его со многими случаями странных болезней у рабочих-мигрантов из Уганды и Малави. Он сказал мне, что от трех до шести таких пациентов ежегодно поступали с агрессивными формами СК, ПЦП и атипичной формой туберкулеза, и что в Южноафриканском медицинском журнале есть литература об этих случаях. «Ретроспективно, - добавил он, - совершенно очевидно, что это были случаи ВИЧ [инфекции]»

 

Тем не менее, тщательный обзор указанного журнала за эти годы показывает только одно краткое упоминание о случае саркомы Капоши и ТБ, а также два других отчета о случаях распространенного СК (без дополнительных оппортунистических инфекций). Хотя любой из этих трех смертельных случаев может возможно, это был СПИД, отчеты содержат слишком мало подтверждающих доказательств, чтобы такой диагноз можно было поставить с уверенностью. Также нет случаев пневмонии, менингита или атипичных микобактерий, указывающих на СПИД. Короче говоря, ничто не подтверждает уверенность профессора Бреде в том, что в пятидесятые и шестидесятые годы в Южной Африке были зарегистрированы десятки случаев СПИДа.

 

Ранние сероэпидемиологические исследования также не подтверждают гипотезу профессора. В исследовании 1987 года более 2500 сывороток, собранных между 1970 и 1974 годами у шахтеров, происходящих в основном из Мозамбика и Малави, а также из Лесото, Ботсваны, Анголы, Свазиленда и самой Южной Африки, только две сыворотки, при тестировании на ВИЧ, дали положительный результат на двух (заведомо неспецифичных) системах тестирования и отрицательный на двух других. Авторы заключают: “При тестировании сыворотки крови африканцев, которая хранилась замороженной, можно ожидать ложноположительных результатов и отсутствия единообразия в результатах различных методов. Результаты настоящего исследования не дают убедительных доказательств ВИЧ-инфекции в Южной Африке в начале 1970-х годов”. [9]

 

Несколько других заявлений о ранней ВИЧ-позитивности относятся к Западной Африке. Наиболее известный отчет включает сыворотки, которые первоначально были взяты у 144 детей из западноафриканской страны Верхняя Вольта (ныне Буркина-Фасо) во время испытания вакцинации против кори и оспы, проведенного Гарри Мейером в 1963 году. Управление по контролю за продуктами и лекарствами (FDA), включая Мейера, сообщило,что две из этих сывороток были повторно протестированы и оказались положительными на антитела к ВИЧ [11], и пришло к выводу, что “эти результаты подтверждают гипотезу о том, что вирус, антигенно связанный с [ВИЧ], мог присутствовать в Западной Африке до эпидемии СПИДа”, утверждение, которое часто повторялось в последующих книгах и статьях [12].

 

Фактически, одна сыворотка оказалась положительной только на один белок (p28) на Вестерн-блоттинге; другой продемонстрировал присутствие четырех белков, которые намного более типичны для HTLV-1, чем для ВИЧ.[13] Таким образом, данные свидетельствуют о том, что группа FDA идентифицировала не тот ретровирус.

 

Еще одно аномальное сообщение было сделано в 1989 году группой, возглавляемой Татьяной Френкль. Эта команда обнаружила, что более 5 процентов (21 из 404) образцов крови, взятых у трех ганских племен в разные годы в течение шестидесятых годов, начиная с 1960 года, были положительными на белки оболочки ВИЧ-1 на EIA. Френкль утверждает, что “этот анализ показал высокую специфичность и чувствительность.” Однако очевидная неспособность подтвердить неожиданные результаты с помощью других анализов и отсутствие корреляции с более поздними данными из Ганы, которые показывают, что ни одна из 896 хранящихся сывороток 1977 года не была ВИЧ-положительной, не вселяет уверенности в выводы доктора Френкля [15]."[3.2 стр 105]

 

"Чиримууты затем обратили внимание на несколько исследований, которые не выявили каких-либо признаков ВИЧ в Африке до 1980 года. Самое крупное такое исследование было проведено Аланом Флемингом и его немецкими коллегами, которые показали, что из примерно шести тысяч образцов крови, взятых в период с 1976 по 1984 год — в основном из Западной Африки, но включая почти шестьсот, собранных в районах, близких к столицам Кении и Уганды [40]. — самая ранняя положительная проба HIV-1 датировалась 1981 [41] годом. Еще одно такое исследование сообщило о нулевой распространенности ВИЧ среди 340 пигмеев Ака, которые были обескровлены в период с 1975 по 1978 год в Конго-Браззавиле и Центральноафриканской Республике;[42] результат был интересен тем, что пигмеи являются охотниками-собирателями и имеют прямой контакт с широким разнообразием лесных обезьян.[43] К сожалению, Чиримуут затем перешёл к серологическим обследованиям Нахмиаса, который обнаружил ВИЧ-положительный образец из Леопольдвилля/ Киншасы в 1959 году [44] и предположил, что единичный ВИЧ-положительный результат, подобный этому, также может быть вызван человеческой ошибкой или загрязнением." [3.2 стр 112]

 

"Одно из моих первых интервью для этой книги было с первым ученым, который заявил, что он обнаружил положительный образец ВИЧ в 1959 году: Андре Нахмайас, профессор эпидемиологии и иммунологии из Университета Эмори, Атланта. <..> К сожалению, он не смог предоставить никаких дополнительных подробностей о доноре образца L70, за исключением того, что он был неопознанным мужчиной-банту из Леопольдвилля в Конго. Но он дал мне подробный отчет о процедурах тестирования. В 1985 году он приобрел несколько сотен образцов Конго у своего коллеги из Эмори, Мозеса Шенфилда, и, безуспешно пытаясь привлечь к тестированию ЦКЗ, Нахмиас решил взяться за работу в своих собственных лабораториях. Он и его техники начали с использования теста ELISA от Abbott Laboratories, который оказался далеко не специфичным: согласно первому раунду результатов, более 90 процентов сывороток 1959 года были антитело-положительными для ВИЧ! Позже сыворотки были отправлены в Гарвард, где Макс Эссекс и Филлис Канки сократили число до трех положительных результатов с помощью ИФА, метода флуоресцентных антител, а затем Вестерн-блота. Один из этих трех положительных образцов, L70, также был положительно протестирован RIPA, и эти положительные показания позже были подтверждены двумя другими лабораториями. Примечательно, что L70 дал положительный результат на ВИЧ, но отрицательный на SIV, который как раз тогда были обнаружены у азиатских макак в американских центрах приматов." [3.2 стр 129]

 

Якоб Сигал [3.1 стр. 95-99]:

"Если бы в 1959 г. в Киншасе было 90,5% инфицированных сероконверсией, то есть инфицированных СПИДом людей, к 1961 г. были бы тысячи больных СПИДом, а к 1963 г. тысячи смертей от СПИДа. К 1980 году почти все миллионы жителей Киншасы вымерли бы. То же самое можно сказать и о 75 детях Саксинджера и других подобных открытиях. Это может быть причиной того, что Брун-Везинет был склонны полагать, что эти невероятные результаты были результатом ошибок в используемых иммунологических методах. В частности, широко используемый тест ELISA, как известно, во многих случаях дает «ложноположительные» результаты.

 

Прежде чем мы приступим к интерпретации этих запутанных результатов, мы должны отметить еще один любопытный факт. Похоже, что чем старше сыворотки, тем выше доля положительных реакций. Нахмайас исследовал 25-летние сыворотки и обнаружили среди них 90,5% положительных, 66% сывороток были положительными по Саксинджер, и этим сывороткам было 12 лет. В образцах сыворотки 1980 г. Брун-Везинета «Менее одного процента», и эта неточная цифра предполагает, что значения на пределе обнаружения были очень слабыми. Хансмен обнаружил нулевой процент серопозитивных сывороток 1981 года. Была ли в 1959 году в Центральной Африке огромная эпидемия СПИДа, которая была полностью прекращена к 1980 году, или положительные реакции возникли просто потому, что сыворотки не выдерживали длительного хранения?

 

Проблема сывороточных антител, которые теряли свою специфичность из-за длительного или нецелесообразного хранения и вызывали ложные реакции, была хорошо известна нам из многолетней работы (Segal, L. and Segal, J., 1974). Эпитопы - группы определенной структуры, на которых основаны специфические иммунные реакции, - чаще всего возникают в результате агломерации гидрофобных групп с низкой энергией связи. Если такие связи разрываются под воздействием тепла, щелочей, потери гидратационной воды или длительного хранения, возникают новые структуры, новые эпитопы. Реакция становится гораздо менее специфичной и в то же время намного более слабой.

 

Приведённая ниже схема иллюстрирует эти взаимосвязи, которые необходимо учитывать при изучении старых сывороток африканцев. Каждый взрослый человек переносил инфекционные заболевания и имеет в сыворотке крови антитела против возбудителей болезней. В Африке, если следовать данным Эссекса, многие люди инфицированы непатогенным обезьяньим вирусом (STLV, теперь SIV).

На схеме: Иммунные реакции в свежей и частично денатурированной сыворотке. Кривые указывают на специфичность антител. Квадратные скобки соответствуют ширине реакции теста ELISA и Western blot.

A.) свежая сыворотка с антителами против LAV (ВИЧ) и других антигенов, в том числе с STLV (SIV). LAV сильно реагирует с ELISA и Western Blot.

B.) cвежая сыворотка с антителами против STLV, но без антител против LAV. Никакой реакции с ELISA или Western Blot.

C.) та же сыворотка, что и в B, но частично денатурированная длительным хранением. Слабая реакция с ELISA, иногда и с Western Blot.

D.) сыворотка здорового с антителами к чужеродным антигенам. Никакой реакции с ELISA или Western Blot.

E.) та же сыворотка, но слегка денатурированная теплом. Слабая реакция с ИФА. в большинстве случаев никакой реакции с Вестерн-блот.

<...>

Такие реакции, конечно, должны быть слабыми, обычно около одной десятой от нормального титра реакции и часто близки к пределу обнаружения. Знаменитая сыворотка Саксингера показала средний титр 601, что близко к пределу необнаруживаемости в его методе измерения. Родригес и др. обнаружили титр 120 в старых сыворотках, тогда как по их методике измерения титр у реальных вирусоносителей составляет 2560. Нахмайас обнаружил 591 положительный результат среди 672 образцов, но со значением ELISA от 1 до 3, в то время как только реакции от 7 и выше считаются подтвержденными. У Биггара все измеренные значения с использованием той же методики были ниже 7, а в основном даже в пределах диапазона неопределенности.

 

В этом контексте мы должны упомянуть любопытную статью, опубликованную группой, работающей под эгидой Эссекса (Kitchen et al., 1984). Эта работа появилась за год до того, как Эссекс начал рассказ о зеленой обезьяне; Насколько нам известно, впоследствии она никогда не цитировалась, хотя и была опубликована в уважаемом журнале Nature. Это две группы сывороток, взятых у больных гемофилией в Соединенных Штатах. Одина была 1954 года, другая была «еще старше» (без точных данных). 94 процента сывороток 1954 года показали положительную реакцию на антитела к ВИЧ, более старые - 53 процента.

 

Вряд ли можно предположить, что почти все население Соединенных Штатов было инфицировано СПИДом 30 лет назад, и что сероконверсии упали с 94 процентов к 1985 году до 0,25 процента, обнаруженных в то время. Можно только сделать вывод, что мы также имеем дело с «ложноположительными» реакциями из-за длительного хранения. В сыворотках 1959 г. Нахмайаса 90,4% ложноположительных реакций, с сыворотками 1954 г. - 95%. И чем старше сыворотки, тем слабее реакция. В самой старшей группе он был настолько слабым, что только 53 процента превышали порог обнаружения [т.е. в самых старых сыворотках количество ложноположительных вновь уменьшается по сравнению с взятыми в 50-х].

 

То, что было в случае с американской сывороткой, должно быть верно и в отношении африканской сыворотки. Если с 1985 года Эссекс игнорировал свою собственную работу и подчеркивал африканское происхождение СПИДа, то это было только для того, чтобы ввести всех нас в заблуждение, потому что эта работа явно опровергала работы доказывающие африканское происхождение СПИДа.

 

Наши интерпретации ложно-положительных реакций, денатурированных долгой консервацией сывороток, антител, было, незавимсимо от нас, экспериментально доказано Аккером(1985). Они исследовали сыворотки 15 здоровых сотрудников в своей лаборатории, используя иммуноферментный иммуноферментный анализ Abbott HTLV-III, тест ELISA, одобренный американскими органами здравоохранения, наиболее распространенный метод в то время, который также использовался в большинстве исследований Африканских сывороток. Все 15 сывороток оказались отрицательными. Однако затем тест был повторен после того, как сыворотки были нагреты до 56 ° C в течение 30 минут. Эта процедура рекомендована ВОЗ, поскольку она инактивирует вирусы СПИДа и, таким образом, делает выполнение теста менее опасным для персонала. На этот раз все 15 сывороток показали положительную реакцию на антитела против ВИЧ. На ранее приведённой схеме D показаны условия для свежей сыворотки. Антитела, возникшие в результате предыдущих инфекций, не реагировали ни на тест ELISA, ни на вестерн-блоттинг. Но после нагревания, что эквивалентно длительному хранению с точки зрения его денатурационного эффекта, диапазон специфичности таких антител расширяется таким образом, что они проникают в диапазон реакции теста ELISA, но еще не в диапазон реакции вестерн-блоттинга (рис E).

 

Эксперимент ван ден Аккера привлек заслуженное внимание. Нагревание сывороток было введено в официальный контроль тестов на СПИД во многих странах. Обзор почти всех процедур тестирования, которые тогда были коммерчески доступны, был проведен в 1986 году Министерством здравоохранения и социального обеспечения Великобритании. В программу также входил подогрев сывороток. Представители компаний Behring, Travenol и Dupont отказались от этого контроля для продаваемых ими тестов. А в официальном журнале мы читаем, что результаты тепловых тестов продуктов Abbott и Labsystems были удалены из файла, потому что их результаты были бы «ненормальными».