производных гамма-оксимасляной кислоты методом ГЖХ

К лекарственным веществам ноотропного действия можно отнести натриевую и кальциевую соли гамма-оксимасляной кислоты (ГОМК).

Известно, что в присутствии сильных кислот и температур свыше 105 ^оС соли ГОМК циклизуются в g-бутиролактон. Поэтому количественное определение нейробутала проводили по циклической их форме - по g - бутиролактону.

Разработку методики количественного определения нейробутала авторы осуществляли методом ГЖХ на чистых образцах          g-бутиролактона и субстанции нейробутала. Для этого использовали газовый хроматограф фирмы "Varian aerograph" серии 2860 (США) с пламенно-ионизационным детектором. 

Для хроматографирования образцов g-бутиролактона с различным его содержанием (20;40;60;80;100 мкг/мл), последние растворяли в органических растворителях и в объёме 3 мкл вводили в испаритель хроматографической системы.

В качестве неподвижных жидких фаз использовались следующие типы фаз на различных носителях: 0,325% адипината этиленгликоля на хромосорбе G-AV (80-100 меш); 1% OV-17 на хромосорбе G (80-100 меш); 3% поли-А-101 А на газохроме Q (100-200 меш); фенилдиэтаноламиносукцинат; FFAP; OV - 225, а также 20% DEGS и 10% ПЭГС на хромосорбе W (80-100 меш).

Анализ g-бутиролактона оптимально проводить на полярной фазе - 10% ПЭГС на хромосорбе W, при температуре колонки     105 ^оС.

Оптимальное значение скорости газа - азота для используемой колонки составило 48 мл/мин.

В качестве оптимального растворителя для образцов            g-бутиролактона использовали хлороформ.

В качестве внутренних стандартов использовались: триметин (3,5,5-триметилоксазолидиндион-2,4), близкое по структуре соединение с g-бутиролактоном, который по времени удерживания выходил после исследуемого лекарственного средства.

Тем самым, оптимальными условиями хроматографирования для g-бутиролактона являлись: использование газового хромато-графа с пламенно-ионизационным детектором и стеклянной колон-кой размером 150х2 мм; заполненной 10% полиэтилен-гликольсукцинатом на хромосорбе W (80-100 меш). 

Температура колонки – 105 ^оС, температура испарителя – 140 ^оС, температура детектора – 180 ^оС. Расход газа - носителя азота высокой чистоты - 48 мл/мин.; водорода - 40 мл/мин.; воздуха -          300 мл/мин. Предварительно колонку следует кондиционировать в течение 28 ч при 170 С в потоке азота. Время удерживания g-бутиролактона - 6 мин 30 с., триметина - 7 мин.

Пороговая чувствительность метода при определении g-бути-ролактона составила - 0,1 мкг/мл. Для проверки воспроизводимости и точности анализировались растворы g-бутиролактона в концентрациях 20, 40 и 60 мкг/мл.

Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются требования теста "Оценка пригодности хроматографической системы".

1. Время удерживания пика g-бутиролактона должно откло-няться не больше чем на 2% от среднего результата, т.е. в пределах от 6 мин 17 с до 6 мин 43 с.   

2. Фактор асимметричности пика (Т) для g-бутиролактона, рассчитанный на расстоянии 5% от высоты должен быть от 0,7 до 0,9.

                                      W_0,05

                                   T = ———       (22),  

                                        2 × f

где W_0,05 - ширина пика на расстоянии 5% от высоты;

  f - расстояние от начала пика на расстоянии 5% от высоты до перпендикуляра проведённого из его вершины, в мм.

3. Коэффициент разделения Ki между g-бутиролактоном и триметином должен быть 1,67 - 2,22.

Ki = (t_Ri - t₀ ) / t₀ (23), 

где t_Ri - время удерживания g-бутиролактона, мин;

    t₀ - время удерживания триметина, мин.

4. Число теоретических тарелок g-бутиролактона от 800 до 1350.

                                                   t

N = 16 (—) ² (24), 

                                                  W

где t - время удерживания пика g-бутиролактона, мм;

W - расстояние на базовой линии, между касательными крутым склонам пиков, мм.

Для превращения нейробутала в g-бутиролактон необходимо введение циклизующего агента при температурах 100-105 С, роль которого выполняют различные минеральные кислоты, в качестве которых нами использовались концентрированные кислоты: серная и хлористоводородная. Предварительно готовили образцы водных растворов нейробутала с различным содержанием (от 20 до 100 мкг/мл) нейробутала. К 0,5 мл водного раствора нейробутала добавляли 0,25 мл кислоты серной или хлористоводородной и 0,25 мл внутреннего стандарта - триметина в концентрации (18 мкг/мл). Затем пробы нагревали на водяной бане в течение 60 мин и охлаждали. К полученным пробам добавляли 0,5 мл хлороформа. Смесь интенсивно встряхивали в течение 15 мин и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 мин. После разделения слоёв отбирали органическую фазу и по 3 мкл вводили в испаритель хроматографической системы. Условия хроматографирования приведены выше.

Для определения степени превращения нейробутала в g-бути-ролактон предварительно строили калибровочные кривые стандартных растворов g-бутиролактона и растворов g-бутиролактона, полученных в процессе циклизации нейробутала вышеуказанными кислотами. Степень превращения нейробутала в g-бутиролактон рассчитывали по формуле 18.

ЛИТЕРАТУРА

Обязательная

1. Беликов В. Г. Фармацевтическая химия. М., 2007. - 354 с.

2. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии: учеб. пособие /Э.Н. Аксенова и др.; под ред. А.П. Арзамасцева.-3-е изд., перераб. - М: Медицина, 2001. - 384 с.

Дополнительная

1. Березкин, В.Г., Лапин А.Б., Газовая хроматография на капиллярных колонках со сверхтолстыми пленками неподвижнойжидкой фазы: неравновесная газовая хроматография. // Доклады Академии Наук, 2002. - Т. 382. №1. - С.78-81.

2. Васянина С.А. Идентификация кислородсодержащих компонентов методом ГЖХ в напитках // Тезисы докладов I Всероссийской конференции студентов и аспирантов: Пищевые продукты и здоровье человека. В 2-х частях. - Кемерово, 2008. -Ч. 2. - С. 192-194.

3. Васянина С.А., Мирошников A.M. Разделение кислород-содержащих продуктов брожения методом ГЖХ на модифицированных полиэтилендиолах // Сб. материалов V всероссийской научн.-практ. конференции: Инновационные технологии обеспечения безопасности питания и окружающей среды. - Оренбург, 2007 - С. 67-69.

4. Винарский, B.A. Хроматография. Газовая хроматография / В.А. Винарский // Минск: Издательский центр БГУ, 2003. - 170 с.

5. Жерносек А.К., Талуть И.Е. Аналитическая химия для будущих провизоров. Часть 1. Учебное пособие / А.К. Жерносек, И.Е. Талуть; Под ред. А.И. Жебентяева. – Витебск, ВГМУ, 2003. – 362 с.

6. Лапин, А.Б., Березкин, В.Г., Некоторые закономерности изменения селективности разделения в газо-жидкостной хроматографии с программированием температуры. // Заводская лаборатория, 2003. - №4, 69. – С. 7-12.

7. Новые направления в газохроматографическом анализе фармацевтических препаратов / Рос.хим. ж. - Ж. Рос. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева, 2003. т. XLVII. №1. С. 18-32.

8. Царев, Н.И. Практическая газовая хроматография: Учебно-методическое пособие для студентов химического факультета по спецкурсу «Газохроматографические методы анализа» / Н.И. Царев, В.И. Царев, И.Б. Катраков. — Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2000. - 156 с.

9. Barry, E.F., Columns: packed and capillary; columns selection in gas chromatography, In: Grob, R.L., Barry, E.F. (Eds), Modern Practice of Gas Chromatography, N.Y.: Willey, 2004, 65-191.

10. Barry, E.F., Grob, R.L., Columns for gas chromatography, performance and selection. Wiley-Interscience, New Jersey, 2007, 298 p.

11. Barry, E.F., Grob, R.L., Columns for Gas Chromatography, Performance and Selection, John Wiley & Sons, Hoboken, New Jersey, 2007, 298p.

12. Berezkin V.G., Lapin, А.В., Lipsky, J.B., Investigation of a new field in gas chromatography: Capillary columns with a super-thick layer of stationary liquid phase II J. Chromatogr., 2005, 1084, 18-23.

13. Berezkin, V.G., Viktorova, E.N., Changes in the basic experimental parameters of capillary gas chromatography in the 20th century. // J. Chromatogr. A., 2003, 985, 3-10.

14. Igor G. Zenkevich Hydroxy Compounds: Derivatization for GC Analysis // Encyclopedia of Chromatography. June, 2005. - P. 35.