Методы получения и оценка качества спермы

Методы получения спермы. метод получения спермы должен отвечать след-м основным треб-ям: 1) позвол получ весь эякулят без потерь; 2) не снижает кол-ва и жизнеспособности спермиев; 3) гарантирует здоровье производителей от травм и особенно от инфекционных болезней; 4) прост технически, выполним в производственных условиях без сложного оборудования; 5) обеспечивает стерильность получения спермы. Все методы получения спермы можно разделить на: 1) уретральные (непосредственно из уретры самца), 2) влагалищные, (собирание спермы из влагалища самки после ее естественного осеменения). Уретральные методы получения спермы. Сущность его заключается в применении искусственной вагины и получении полноценного эякулята. Исскуственная вагина это прибор состоящий из цилиндра металлического с резиной в просвет которой вставлена эластичная резиновая трубка. Один конец вагины остается открытым на другой закрепляют спермоприемником. У животных метод искусственной вагины позволяет получать сперму двумя путями: 1) на самку, самца или кастрата и 2) на чучело(подвижное и неподвижное) Сперму на животное получают в обстановке, обычно создаваемой при естественном осеменении. Его лучше помещать в станок. В момент садки техник держит подготовленную вагину справа на уровне таза животного на уровне тазобедренного сустава. У крс и мрс вагина должна иметь уклон 45 градусов по отношению к горизон. плоскости. слишком большие уклоны травмируют половой член. Нельзя подставлять вагину к головке полового члена преждевременно или, наоборот, поздно, так как это обусловливает торможение эякуляции. Ее следует подставлять в тот момент, когда половой член производителя приближается к крупу манекена. Затем спермоприемник отделяют от вагины и немедленно передают его в лабораторию, а вагину - в моечную. Правила получения спермы. Получают сперму от производителей в условиях теплого, светлого, просторного манежа и идеальной чистоты. За 1,5-2 ч до получения спермы в манеже и лаборатории включают бактерицидные лампы, что уменьшает микробную и грибковую загрязненность спермы. Производителей, чучело или животное, на которое берут сперму, тщательно чистят, используют поролоновые накладки на искусственную вагину. При чистке производителей особое внимание обращают на нижнюю¹ часть живота, область препуциального отверстия, которую обмывают теплым 2%-ным раствором соды, фурацилином 1:5000. В теплое время года быков, хряков и жеребцов моют под душем. Искусственную вагину для получения спермы у производителей необходимо правильно собрать и подготовить. Новую камеру тщательно моют горячим 3 %-ным раствором двууглекислой соды, чтобы удалить сернистые соединения, и обильно ополаскивают чистой водой. После высушивания камеру натягивают на цилиндр так, чтобы гладкая ее поверхность была обращена внутрь, а шероховатая - к цилиндру. Внутренняя трубка искусственной вагины должна быть равномерно натянута на основной цилиндр. Для заполнения вагины готовят воду, подогретую до 60-70 °С. Перед использованием вагины температуру проверяют химическим термометром, вводимым в просвет внутренней трубки. Постоянную температуру в подготовленной искусственной вагине удобно поддерживать помещением ее в шкаф-термостат. При получении спермы температура вагины должна быть в пределах 40-42 град. для вагины быка и барана оптимальной температурой является 41-42 °С. Для смазывания внутренней стенки вагины используют простерилизованный на водяной бане чистый белый или желтый вазелин. Фистульный метод получения спермы. При этом методе значительно упрощается вся работа по подготовке и получению спермы, а самое главное, удается получать идеально чистую, стерильную сперму, обладающую высокой переживаемостью. При использовании такой спермы достигается повышенная оплодотворяемость. Производителей с уретральной фистулой можно использовать долгие годы. Для получения спермы через фистулу проводят промежностную уретростомию. Получение спермы методом мастурбации -путем механического раздражения головки полового члена трением о нее препуциального мешка. Этот метод дает хороший эффект у собак. Получение спермы методом массажа. Массаж ампул семяпроводов.предложил Миллер. Ректально производят массаж в течении 2-3минут- выделение спермы без эрекции полового члена. Влагалищные методы получения спермы. -получение в спермособиратели. Используют у баранов, хряков. Быков. Спермособиратель-это слепой мешок из тонкой резины, с двумя кольцами. Стерилизуют тампоном смоченным спиртом 70% изнутри наружу, кипячение 10 мин. в воде. Орошение теплым стерильным раствором соответствующим сперме животных(например жеребец-глюкоза, баран-гидрокарбонат натрия).спермособиратель рас-полаг в полов путях самки. Этот метод позволяет полностью собрать эякулят, сперма не перемешивается с содержимым влагалища, предупреждает распространение инфекционных заболеваний. -губочный метод- от быков, баранов, жеребцов. Сейчас не применяется. Суть:губку после обработки помещают во влагалище самки находящейся в охоте, допускают коитус, затем извлекают губку и отжимают эякулят.- Влагалищный зеркальный метод- собирание спермы сразу после коитуса влагалищным зеркалом. Влагалищные методы сейчас не используются. Так как сперма теряется в складках слизистой оболочки влагалища, эякулят загрязняется влагалищной слизью которая отрицательн оболочки о влияет на спермии. Метод электроэякуляции -вводят ибанитовую палочку в прямую кишку подается минимального напряжения по 20 сек. Бык, 30 сек. Баран. Включить и выключить. Примерно 3-6 импульсов. Оценка качества спермы: -это важный технологический процесс,который определяет оплодотворяемость самки. Включает в себя: 1.визуальную оценку. 2.определение густоты и активности. 3.опред-е резистентности. 4.опр-е количества живых и мертвых спермиев путем их дифференц. характеристики. 5.дегидрогенаная активность (по Мергину). 6.определение абсо-лютн показателя переживаемости. 7.определение концентрации. Каждый эякулят подвергают исследованию. Визуальная оценка - по внешним признаком без оборудования. Позволяет определить необходимость дальнейших исследований. Обращают внимание на примесь в ней гноя, мочи и т.д. объем спермы выражают в мл, в технологии племпредприятий 1мл=1г. Сперму от хряка фильтруют от секрета луковичных желез. Измерительный прибор нагревают до 30 градусов. У жеребцов фильтруют через 3 слоя марли от секрета пузерковидных желез. Объем спермы зависит от кормления, содержания и генома клеток. У барана в среднем 1 -1,5 мл, бык 4-5 мл(15), хряк 250мл, жеребец 60-80 мл, кобель 9мл. Олигосперматизм-мало спермы по сравнению с ее физиологической нормой(воспал.процессы, бо-лезн-ть поясницы, суставов, конечностей, задержка эякуляции. Асперматизм-отсутствие спермы (хр.протекающие болезни рахит, эпидимит). Цвет: у быка белая, у барана белая с желтоватым оттенком, кобель, жеребец.,хряк- серо-белая. Розовый оттенок- разрыв капилляров мочеполового канала. Присутствие хлопьев серого. белого цвета воспаление пузырьковидной железы-везикулит. Запах: у барана- запах жиропота, у быка-порного молока, жеребец и другие-запах сырого погреба. Если сперма имеет гнилостный запах – то она выбраковывается. Уточнение: раствор Тимол-блау. На предметное стекло каплю полученной спермы + реактив, мешают теплой стеклянной палочкой. Через 20-30 мин. если цвет интенсивно желтый- в половой системе воспаление. Консистенция:у баранов-сметано-образная, быки-сливкообразная, кобель, хряк, жеребец- водянистая. Густота и активность глазомерная оценка. В отстаившей разбавленной сперме опредеяют только активность. Каплю спермы помещают на предметное стекло подогретое на обогреваемом столике, накрывают покровным стеклом. И исследуют под малым увеличением в затемненном поле. Густота – это косвенный показатель концентрации спермы половыми клетками. Различают Г – густую, завихрения в движении спермий, в поле зрения промежутки между спермиями отсутствуют. У быка в 1мл 1 млрд. клеток, у барана 2 млрд., у хряка 0,2млрд., жеребец 0,25 млрд. С-средняя- в сперме промежтки между отдельными спермиями не превышает длины одного спермия.у быка в 1мл 0,6млрд., у жеребца 0,15..

Р-редкая – промежутки между спермиями превышают длину одного спермия. Олигоспермия – в поле зрения 10 половых клеток. Аспермия – в эякуляте нет пол.клеток. Некроспермия-отсутствие движения спермиев. Тератоспермия-патолоогические формы спермиев выше допустимой нормы. Допускается к разбавлению густая у баранов и густая и средняя у быков. Активность оценивают по 10бальной системе. 1.прямо-линейное поступательное движение спермиев (ППД). 2.манежное движение- свойственно для спермиев малок. У млекопитающих пограничное состояние между жизнью и смертью. 3. колебательные движения – конвульсивное вздрагивание, для вывода из этого состояния добавляют изотонический раствор и тепло. В поле зрения микроскопа считают сколько движется прямолинейно. Например 8 из 10 движется ППД. 10 – 100; 8 – х; Х= 80 à 8 балов. Определение резистентности спермиев резистентность спермиев-это устойчивость к воздействию теплого NaCl, которое требуется прилить к 0,02 мл свежеполученной спермы. Что бы прекратилось поступательное движение на 100%. Есть методы по мелованову и короткову. Суть по Мелованову- нужно взять сперму 0.02 и приливать к нему по 10 мл 1%р-ра NaCl затем суммируют мл раствора и делят на объем спермы. По Короткову берут 4 пеницилиновых флакончика в №1 вносят 10мл теплого NaCl. №2 0,5 №30,25 №4 12мл. Во флакон №1 10мл спермы. Из фл№1 во фл.№2. перемешивают. Определяют активность.если активность прекратилась то резистентность 1000у.е.. если нет то из 2 в 3 флакона.если отсутствует акт-ть то 2000у.е. Из 3 в 4 по 0,5мл считают количество внесений. Умножают 2 на колличество внесений и прибавляют 2000 (резистентность при работе с 3 флаконом. У барана и быка – 10-40 тыс.у.е. У хряка 2-5 тыс.у.е. Жеребец 5000у.е. Определение процента живых и мертвых спермиев путем их дифференциальной окраски: основано на том что оболочка цитоплазмы жизнеспособных половых клеток не пропускает через себя красящее вещество, а те которые погибли окрашиваются. Сутьна концевую часть предметного стекла наносят каплю спирта(стекло д/б обезжиренно). И 2 – 3 капли эозина. Стеклянной палочкой перемешивают и делают мазок. Затем микроскопируют - подсчитывают 500 клеток в поле зрения. Для определения живых спермий у жеребца применяют краску Конго-рот. Затем живые спермии умножают на 100 и делят на 500 клеток и получают процент жизнеспособных клеток. Определение дегидрогеназной активности по Ширгину. Дегидрогеназы-это ферменты отщипляющие атом водорода от одного субстрата и переносят на другой. Происходит восстановление метиленовой сини до лейкометиловой синьки (обесцвечивание раствора). Основана на восстановлении мителеновой синьки в анаэробных усл. По скорости обесцвечивания судят о качестве спермы. На теплое предметное стекло наносят каплю спермы и митиленовой сини капли смешивают м/д собой мелоранжем. Длина столбика д/б 2см, не д/б пузырьков воздуха. Мелоранж располагают на белой бумаге и засекают время. У барана хорошая сперма 3 – 7 минут, средняя до 12мин, у быка 5 – 10 мин. Средняя до 30мин. Определение рН с помощью лакмусовой бумажки. У быка 6,7 у жеребца 7,23 и т.д. Абсолютный показатель переживаемости клеток - это один из качественных показателей спермы который говорит о сроке сохранения активности половыми клетками в более или менее благоприятных условиях. Зависит от запаса энергетического материала в клетке, интенсивности обменных процессов м/д спермиями и плазмой спермы, от скорости обезвреживания токсических продуктов метаболизма. По показателю можно сказать о качестве приготовленной искусственной среды об оптимуме и максимуме разбавления. У жвачных s=1400у.е. Хряки 900, жеребцы 400.определение активности ведут до тех пор пока она не будет ниже 1.