Оценка состояния кожи при изучении местного раздражающего действия веществ

I. Оценка степени эритемы
Интенсивность эритемы визуально	Оценка в баллах
Отсутствие эритемы
Слабая (розовый тон)
Умеренно выраженная (розово-красный тон)
Выраженная (красный тон)
Резко выраженная (ярко-красный тон)
II. Оценка отека кожи животных
Интенсивность отека (нарастание толщины кожной складки животных по сравнению с фоном, мм)	Оценка отека в баллах
градация интенсивности	экспериментальные животные
кролики	морские свинки, белые крысы
Отсутствие реакции	0–0,09	0–0,09
Слабая реакция	0,1–0,59	0,1–0,39
Умеренная реакция	0,6–1,0	0,4–0,69
Выраженная реакция	1,1–2,01	0,7–1,01
Резко выраженная реакция	>2,1	>1,1

Выразив интенсивность эритемы и отека в баллах, рассчитывают средний общесуммарный балл кожно-раздражающего действия по формуле:

, (3.4)

где КР — средний общесуммарный балл кожно-раздражающего действия;
R — выраженность эритематозной реакции в баллах через 24 часа после последней аппликации на опытном (о) и контрольном (к) участках; Т — выраженность отека в баллах на опытном (о) и контрольном (к) участках; 1, 2, …, n — порядковый номер животного; n — количество животных в группе.

Если при повторных аппликациях вытяжки отмечаются клинические симптомы интоксикации, а средний общесуммарный балл кожно-раздража-ющего действия отличный от 0 баллов, делают вывод о том, что данный вид изделия представляет опасность местно-раздражающего действия и не соответствует гигиеническим требованиям. Дальнейшие испытания прекращают.

Пример расчета.

При проведении исследований кожно-раздражающего действия водных вытяжек из носочно-чулочного изделия на 6 белых крысах были получены следующие результаты. На опытном участке у первых 2 животных наблюдалась слабо выраженная эритема, у остальных животных и на контрольном участке у всех животных эритема отсутствует (эритема на всех участках до аппликаций не наблюдалась). Разность в толщине кожной складки до аппликаций и через 24 часа после последней аппликации (опытный и контрольный участки соответственно): 1 животное — 0,05 и 0,04 мм; 2 животное — 0,06 и 0,03 мм; 3 животное — 0,07 и 0,07 мм; 4 животное — 0,13 и 0,12 мм; 5 животное — 0,11 и 0,05 мм; 6 животное — 0,02 и 0,02 мм. Оцените результаты эксперимента.

Решение. Необходимо рассчитать средний общесуммарный балл кожно-раздражаю-щего действия, для чего требуется выразить степень выраженности эритемы и отека на опытном и контрольном участках кожи у всех животных, взятых в эксперимент. Эритема на опытном участке у первых 2 животных оценивается в 1 балл, на других участках у всех животных — 0 баллов. Выраженность отека (опытный и контрольный участки соответственно): 1, 2, 3, 6 животные — по 0 баллов; 4 животное — по 1 баллу; 5 животное — 1 балл, 0 баллов.

В соответствии с формулой (3.4) рассчитывается средний общесуммарный балл кожно-раздражающего действия вытяжки:

Ответ: исследованный образец носочно-чулочного изделия обладает слабо выраженным кожно-раздражающим действием, что не соответствует гигиеническим требованиям, изложенным в Инструкции 1.1.10–12–96–2005.

 

Для изучения ирритативного действия берут не менее 3 кроликов светлой масти, в нижний конъюнктивальный свод правых глаз которых однократно вносят водную вытяжку из изделия в количестве 50 мкл, левый глаз при этом служит в качестве контроля (закапывается аналогичный объем дистиллированной воды). По изменению функционального состояния слизистых оболочек глаз лабораторных животных (проявление симптомов раздражения — гиперемии, отека, слезотечения) судят о наличии и выраженности ирритативного (раздражающего слизистые оболочки) действия. Количественную оценку степени индукции эритемы, отека и выделений из глаза выражают в баллах согласно
табл. 5.

Таблица 5

Оценка раздражающего действия водных вытяжек из одежды
на слизистые оболочки глаз кроликов

Симптомы повреждения	Характеристика выраженности симптомов	Оценка в баллах
А	Гиперемия конъюнктивы	Отсутствие гиперемии
Сосуды инъецированы
Отдельные сосуды трудно различить
Глубокое диффузное покраснение
Б	Отек век	Отсутствие отека
Слабый отек
Выраженный отек с частичным выворачиванием век
В результате отека глаз закрыт наполовину
В результате отека глаз закрыт полностью
В	Выделения из глаза	Отсутствие выделений
Минимальное количество в углу глаза
Количество выделений увлажняет веки
Количество выделений увлажняет веки и окружающие ткани

 

Вычисляют средний общесуммарный балл ирритативного действия по формуле:

, (3.5)

где ИД — средний общесуммарный балл ирритативного действия; А — выраженность гиперемии реакции в баллах; Б — выраженность отека в баллах;
В — выраженность выделений в баллах; о — результаты суммарной оценки состояния слизистой опытного глаза; к — результаты суммарной оценки состояния слизистой контрольного глаза; 1, 2, …, n — порядковый номер животного; n — количество животных в группе.

Если средняя общесуммарная степень выраженности раздражающего действия вытяжек равна 0 баллов, делают вывод о том, что данный вид изделия соответствует гигиеническим нормам. Если при однократном воздействии вытяжки из исследуемого изделия отмечаются признаки раздражения слизистых оболочек глаз, дальнейшие исследования прекращают.

Пример расчета.

Спустя 24 часов после инсцилляции 50 мкл водной вытяжки из женского купального костюма производства компании «Х» в правый глаз кролика у 2 животных из 3, взятых в эксперимент, наблюдали инъецированность сосудов, выраженный отек с выворачиванием век. У 1 из животных в левом глазу, куда инсциллировали 50 мкл дистиллированной воды, отмечены инъецированность сосудов, минимальное количество выделений в углу глаза. Оцените способность изделия раздражать слизистые оболочки.

Решение. Для оценки способности изделия к раздражающему слизистые оболочки действию необходимо рассчитать средний общесуммарный балл выраженности ирритативного действия, предварительно оценив в баллах степень выраженности изменений состояния слизистой оболочки обоих глаз у всех кроликов (соответственно опытный и контрольный глаза): гиперемия конъюнктивы — 1 животное (по 1 баллу), 2 животное (1 балл, 0 баллов), 3 животное (по 0 баллов); отек век — 1 животное (2 балла, 1 балл), 2 животное (2 балла, 0 баллов), 3 животное (по 0 баллов). Средний общесуммарный балл выраженности ирритативного действия в соответствии с формулой (3.5) равен:

Ответ: Исследованный образец женского купального костюма производства компании «Х» обладает слабыми раздражающими слизистые оболочки свойствами. По данному показателю образец не соответствует требованиям гигиенической безопасности, приведенным в Инструкции 1.1.10–12–96–2005.

Оценку сенсибилизирующей способности проводят на волонтерах старше 18 лет, изъявивших желание участвовать в исследованиях и не имеющих противопоказаний по состоянию здоровья. Формируют группы в количестве не менее 3 человек. Испытания проводят с применением закрытой эпикутанной «лоскутной» пробы, которая включает первичную сенсибилизирующую и вторичную провокационную аппликации. Первичную аппликационную пробу выполняют наложением на кожу внутренней поверхности предплечья или плеча волонтера (после обработки этиловым спиртом) марлевого тампона размером 1 ´ 1 см, пропитанного водной вытяжкой из изделия. Тампон покрывают полиэтиленовой накладкой и фиксируют к коже полосками лейкопластыря. Контрольную пробу с дистиллированной водой выполняют аналогично опытной. Первичную аппликацию через сутки снимают, смывают остатки вытяжки с кожи опытного и контрольного участков струей теплой воды и через 1 час регистрируют функциональное состояние кожи (по эритематозной реакции) на месте воздействия пробы.

При возникновении у волонтера в период аппликационной экспозиции негативных клинических симптомов раздражения (ощущение зуда, жжения, болезненности) даже слабой (переносимой) интенсивности со стороны опытного участка кожи, пробу немедленно снимают. В этом случае, а также при определении на опытном участке кожи эритемы после первичного нанесения (при отсутствии таковой на контрольном), первичную аппликацию у конкретного волонтера повторяют на другом участке кожи, снизив концентрацию вытяжки, не менее чем в 2 раза. В случае появления в процессе и после завершения повторной первичной аппликации субъективных симптомов раздражения и (или) эритематозной реакции кожи только у одного волонтера (с повышенной чувствительностью к данному изделию), его исключают из дальнейших исследований. При регистрации негативных проявлений у 2 и более лиц дальнейшие испытания не проводят и делают вывод о том, что изделие обладает раздражающим действием на кожу (условное обозначение I_{cut. v .} = 1 балл).

При отсутствии субъективных симптомов или объективных признаков раздражения после первичной аппликации аналогично рядом (на расстоянии не менее 2 см) на «чистый» участок кожи ставят на сутки вторичную аппликацию с той же вытяжкой, а также контрольную пробу с дистиллированной водой (на том же первичном участке кожи). Возникновение хотя бы у одного волонтера в период проведения вторичной аппликации клинических симптомов зуда, жжения, болезненности, в том числе на кожных участках первичной аппликации, свидетельствует о развитии немедленного типа гиперчувствительности — опыт с испытуемым образцом немедленно прекращают. Учитывают результаты по выраженности клинических симптомов и дальнейшие испытания не проводят. Через 1, 24 и 48 часов после суточной экспозиции одновременно на участках вторичной и первичной аппликаций вытяжки из изделия и контрольной пробы визуально регистрируют функциональное состояние кожи (интенсивность эритематозной реакции, наличие первичных высыпаний), а также учитывают негативные субъективные клинические симптомы (зуд, жжение, болезненность) и их выраженность. При отсутствии видимых изменений кожи и субъективных клинических симптомов делают вывод о том, что данный вид изделия не обладает сенсибилизирующим действием и не является аллергоопасным при контакте с кожными покровами.

Для изучения перехода красителей на кожные покровычеловека из изделий вырезают куски ткани размером 2 ´ 2 см различного цвета, смачивают в дистиллированной воде, слегка отжимают, складывают в четыре сложения, накладывают на кожу предплечья волонтера на расстоянии не менее чем через 2 см, каждый покрывают полиэтиленовой накладкой размером 2 ´ 2 см и фиксируют полосками лейкопластыря. Аппликацию через 4 часа снимают и учитывают изменение окраски кожи. Переход красителей на кожные покровы не допускается.

ВЫДАЧА ЗАКЛЮЧЕНИЯ

 

Одежда, обувь, материалы для их изготовления признаются безопасными в гигиеническом отношении, если в эксперименте получены результаты, приведенные в табл. 6.

Таблица 6