Занятие 3. Сравнительная морфология микроорганизмов.

 

ЦЕЛЬ:

1. Освоить сложный метод окраски бактерий по Цилю-Нильсену.

2. Изучить сравнительную морфологию групп микроорганизмов: простейших, грибов, бактерий, спирохет, риккетсий, вирусов.

 

ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:

1. Понятие о сложных методах окраски бактерий и их назначение. Механизм окраски по Цилю-Нильсену.

2. Основные группы микроорганизмов и их взаиморасположение в природе.

3. Связь формы и содержания, морфологии и функции на примере морфологии отдельных групп микроорганизмов.

4. Сравнительная морфология простейших, грибов, бактерий, спирохет, риккетсий, микоплазм, хламидий, вирусов.

 

ПЛАН САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1.Сложные методы окраски - метод Циля-Нильсена. Окрасить по методу Циля-Нильсена препарат их кислотоустойчивых и некислотоустойчивых бактерий (Работа 1).

2.Морфология микроорганизмов (Работа 2)

а) определить в готовых препаратах кокковидные и палочковидные формы бактерий;

б) рассмотреть лептоспиры в темнопольном микроскопе;

в) рассмотреть риккетсии в препарате из чистой культуры;

г) рассмотреть вирионы в препарате, обработанном по методу Морозова.

 

задания для самостоятельной работы во внеучебное время

Заполнить таблицу.

Отличительные признаки основных групп микроорганизмов.

 

	Место в системе организмов	Ядро	Оболочка
Простейшие
Спирохеты
Грибы
Бактерии
Риккетсии
Вирусы
Хламидии
Микоплазмы

 

МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Занятие 1. Методы изучения морфологии микроорганизмов

ЦЕЛЬ:

1. Ознакомиться с методами изучения морфологии микроорганизмов.

2.Овладеть методами приготовления микропрепаратов и иммерсионной микроскопии.

Задание 1

Цель: Ознакомиться с различными методами микроскопии.

Методика.

Рассмотреть демонстрационный препарат: «раздавленная» капля из дрожжей,- при иммерсионной и фазово-контрастной микроскопии. Рассмотреть окрашенный флюорохромом препарат из дрожжей под люминесцентным микроскопом. Необходимо обратить внимание на качество изображения объектов. Сравнить способы микроскопии.

Протокол исследования:

Цель:

Исследуемый материал (материала для приготовления мазка)	Микроскопический метод исследования
Иммерсионная микроскопия (рис.)	Фазово-контрастная микроскопия (рис.)	Флуоресцентная микроскопия (рис.)

Вывод: (ответить на вопросы: 1. Какие преимущества имеет метод флуоресцентной микроскопии? 2. Какой принцип лежит в основе фазово-контрастной микроскопии?

Задание 2

Цель: Овладеть методом приготовления, простой окраски и иммерсионной микроскопии микропрепаратов из чистой культуры бактерий.

Методика.

I. Приготовление препарата из агаровой культуры

Для приготовления мазка необходимо взять чистое обезжиренное стекло. На предметном стекле обозначают стеклографом место нанесения материала. На обратную сторону стекла от обозначенного места наносят петлей каплю физиологического раствора. В левую руку берут пробирку с агаровой культурой, а в правую - петлю за петледержатель. Петлю обжигают на пламени горелки. Пробку прижимают к ладони 4 и 5 пальцами и медленными вращающими движениями извлекают из пробирки. Край пробирки обжигают. Петлю вводят в пробирку и остужают о стенки. Скользящим движением петлей берут материал и осторожно, не задевая о стенки, извлекают. Пробирку снова обжигают и закрывают пробкой.

В каплю физиологического раствора вносят исследуемую культуру и смешивают петлей до образования слегка мутноватой взвеси. Полученную взвесь равномерно распределяют на поверхности стекла, чтобы диаметр мазка был 1 – 1,5 см. Препарат высушивают на воздухе и фиксируют, для этого проводят стекло над пламенем горелки три раза, при этом мазок должен быть сверху. Препарат окрашивают фуксином (1-2 мин) или метиленовой синькой (3-5 мин).

Для окраски негативным способом на стекло наносят каплю взвеси дрожжей в физиологическом растворе и смешивают с каплей туши. Препарат высушивают.

Окрашенные препараты рассматривают под микроскопом с использованием масляной иммерсии.

Подготовка микроскопа для работы: поднять конденсор до уровня предметного столика, полностью открыть диафрагму, поставить плоское (при естественном освещении) или вогнутое (при искусственном освещении) зеркало. Осветить поле зрения под контролем объектива х 8.

Нанести на препарат каплю масла, положить препарат на столик микроскопа и закрепить зажимами. Установить иммерсионный объектив. Под контролем зрения (смотреть на объектив сбоку!) медленно опустить объектив макровинтом до погружения в масло. Затем, глядя в окуляр, медленно поднимать объектив до появления объекта. Провести окончательную фокусировку препарата микрометрическим винтом, медленно вращая его только в пределах одного оборота.

 

Протокол исследования:

Цель:

Позитивный метод окраски	Негативный метод окраски тушью (рис.)
Фуксином (рис.)	Метиленовым синим (рис.)

Вывод: ответ на вопросы:

1. Какие красители наиболее часто используются для позитивной окраски микроорганизмов?

2. В чем преимущества негативной окраски микроорганизмов?

3. Почему в микробиологических исследованиях используется метод иммерсионной микроскопии (преимущества метода)?

МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ