Принцип работы электрофотоколориметра

Свет от лампы накаливания через ряд оптических систем направляется на светофильтр. Полученный монохроматический свет направляется в кюветы с раствором и растворителем, в них часть света поглощается. Прошедший через оптические системы

свет попадает на фотоэлементы. Величина возникающего тока пропорциональна величине падающего света. Очевидно, что через растворитель проходит света больше, чем через раствор; в системе возникает оптическое неравновесие, которое регистрируется отклонением стрелки гальванометра или расширением темного клина индикаторной лампы. На пути пучка света, проходящего через растворитель, поставлена диафрагма, связанная с отсчетным устройством фотоколориметра. Вращением отсчетно-

го барабана уменьшают диафрагму и добиваются равновесия оптических плотностей и возвращения стрелки гальванометра на нулевую отметку. Отсчет на барабане равен оптической плотности.

 

Вопрос№ 34

Рефрактометрические методы

Рефрактометрические методы определения общего белка сыворотки основаны на способности растворов белка к преломлению светового потока. При температуре 17,5 °С показатель преломления воды равен 1,3332, при той же температуре показатель преломления сыворотки колеблется в пределах 1,3480–1,3505. В связи с тем, что концентрация электролитов и небелковых органических соединений, влияющих на ее преломляющую способность, невелика и достаточно постоянна в сыворотке здорового человека, величина показателя преломления сыворотки крови зависит в первую очередь от содержания в ней белков. Калибровку прибора проводят сывороткой с известной концентрацией белка. Простота делает рефрактометрию удобным методом для определения содержания общего белка в сыворотке крови, хотя при ряде заболеваний, в частности, при сахарном диабете, хронической почечной недостаточности его использование может приводить к существенной ошибке.

Вопрос № 35

Осаждение белков — процесс снятия гидратной оболочки и заряда.

 

Два вида реакций осаждения:

 

1)высаливание белков — обратимый процесс; снимается только гидратная оболочка, белок сохраняет структуру и нативные свойства;

белковые частицы образуют крупные агрегаты и впадают в осадок под действием силы тяжести (седиментируют).

-высаливание белков сульфатом аммония

-высаливание белков хлористым натрием

2)необратимый процесс

поверхность нативной белковой молекулы всегда мозаична, имеет место чередование гидрофильных и гидрофобных групп аминокислотных остатков. При необратимом осаждении белков нарушается нативная конформация, теряется мозаичность, а значит способность выполнять функции. Этот процесс называется денатурацией

-осаждение белков солями тяжелых металлов (CuSO4 и Pb(CH3COO)2)

-осаждение белков концентрированными минеральными кислотами (HNO3 конц. и H2SO4 конц.

- осаждение белков органическими кислотами (CCl3COOH и сульфоцилсалициловая кислоты)

 

Вопрос № 36

Высаливание – это обрати мое осаждение белков из растворов с помощью высоких концентраций нейтральных солей: сульфата аммония, сульфата магния, хлорида натрия. Механизм высаливания заключается в дегидратации белковой молекулы и снятии заряда. На процесс высаливания влияют: степень гидрофильности белка, его заряд, молекулярная масса. Поэтому для высаливания разных белков требуется различная концентрация одних и тех же солей, разные условия рН среды. Высаливающее действие ионов зависит от из дегидратирующей способности, которая характеризуется положением в лиотропном ряду Гофмейстера:

F-> Cl-> Br-> NO3-> I-> CNS-

 

Li+> Na+> К+> Rb+> Cs+> Mg2+> Ca2+> Sr2+> Ba2+

 

Высаливание широко используется как метод разделения белков, выделения индивидуальных белков, получения белков в чистом виде

Разделением белков плазмы крови на фракции по методу Кона часто пользуются для получения отдельных фракций крови, используемых в качестве кровозаменителей

37.