ТЕМА: Идентификация вирусов. Серологическая идентификация. Серодиагностика. Генетические методы идентификации (молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция).

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: знать методы серологической и генетической идентификации вирусов (молекулярная гибридизация (МГ), полимеразная цепная реакция (ПЦР).

уметь учитывать и интерпретировать реакцию торможения гемагглютинации (РТГА), реакцию нейтрализации (РН) с учётом по цветной пробе, иммуноферментный анализ (ИФА), реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), радиоиммунный анализ (РИА). 1. Вопросы для самоподготовки:

1) Идентификация вирусов и ее виды

2) Идентификация вирусов по антигенному строению:

а) реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

б) реакция нейтрализации (РН)

в) реакция связывания комплемента (РСК)

г) иммуноферментный анализ (ИФА)

д) реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

е) радиоиммунный анализ (РИА)

3) Методы генетической идентификации вирусов

а) молекулярная гибридизация (МГ)

б) полимеразная цепная реакция (ПЦР)

2. Контрольные вопросы:

1) Перечислить ингредиенты для постановки ранней РТГА.

_____________________________________________________________________________Перечислить этапы постановки РН с учетом по цветной пробе

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2) Выписать ингредиенты ИФА _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3) Перечислить ингредиенты и выписать этапы постановки РИФ (прямого и непрямого вариантов)

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4) Перечислить ингредиенты РИА и этапы постановки_____________________________

_____________________________________________________________________________

5) Назвать механизм и перечислить ингредиенты МГ______________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

6) Назвать механизм и перечислить ингредиенты ПЦР ______________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

7. Заполнить таблицу «Методы идентификации вирусов».

Название реакции	Механизм действия
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
Реакция нейтрализации (РН)
Реакция связывания комплемента (РСК)
Иммуноферментный анализ, или метод (ИФА)
Реакция иммунофлюоресценции — РИФ (метод Кунса)
Радиоиммунный метод, или анализ (РИА)
Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
Молекулярная гибридизация (МГ)

Базовый текст

Иденификация вирусов и ее виды

Идентификация (определение вида, типа) вирусов осуществляется, в основном, с помощью иммунологических реакций, основанных на взаимодействии антигенов вирусов и соответствующих им антител.

1. При выделении вирусов от больного производят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т.е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические антитела. Это так называемая серологическая идентификация вирусов.

Для серологической идентификации вирусов (идентификация вирусов по антигенному строению) используют следующие наиболее распространенные реакции:

а) реакция торможения гемагглютинации (РТГА),

б) реакция нейтрализации (РН),

в) реакция связывания комплемента (РСК),

г) иммуноферментный анализ (ИФА),

д) реакция иммунофлюоресценции (РИФ),

е) радиоиммунный анализ (РИА)

2. Генетическая идентификация вирусов (идентификация по нуклеиновой кислоте)

а) молекулярная гибридизация (МГ),

б) полимеразная цепная реакция (ПЦР).

2. Идентификация вирусов по антигенному строению

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)

Реакция торможения гемагглютинацииоснована на блокаде, подавлении антигенов (гемагглютининов) вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты. РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.

 

РЕАКЦИЯ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ (РН)

Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать (блокировать) поверхностные рецепторы (антигены) вирусов, в результате чего вирусы теряют способность проникать в живые клетки.

Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген (вирус) - антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия вирусов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген — антитело.

 

Реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток: А - цитопатогенный эффект (ЦПЭ) в результате размножения вирусов; Б - ЦПЭ отсутствует в результате нейтрализации вирусов антителами.