Определение чистоты выделенной культуры.

Чистота выделенной культуры микроорганизмов должны быть тщательно проверена. Это осуществляется обычно несколькими способами -визуальным, микроскопическим контролем и высевом на ряд питательных сред. При визуальном контроле просматривается рост микроорганизмов по штриху на поверхности скошенной плотной среды. Если рост по штриху неоднороден, культура загрязнена. Такой контроль возможен только для культур, способных расти на поверхности плотных сред. Чистоту культуры микроорганизмов обязательно нужно контролировать под микроскопом. Для этого следует приготовить препарат фиксированных окрашенных клеток и просмотреть его с иммерсионной системой или препарат живых клеток и просмотреть его, используя фазово-контрастное устройство. Чистая культура микроорганизмов, как правило, морфологически однородна, допустимо лишь незначительное варьирование размеров клеток. Однако необходимо помнить, что клетки некоторых бактерий (например, микобактерий, нокардий и др.) очень полиморфны, поэтому определение чистоты таких культур при микроскопировании вызывает некоторые затруднения.

Чистоту культур микроорганизмов обязательно проверять высевом на питательные среды. Прежде всего, выделенную культуру высевают на плотную среду, благоприятную для ее роста. Однородность выросших колоний - свидетельство чистоты культуры, Обязателен посев на мясо-пептонный агар (МПА) - среду, которая обеспечивает рост многих хемогетеротрофов. Критерием чистоты культуры является однородность выросших колоний или, напротив, отсутствие роста, если данные микроорганизмы на мясо-пептонном агаре не развиваются. Следует иметь в виду, что заключение о чистоте некоторых культур нельзя сделать только по результатам высева на MIA. Особенно это касается автотрофных микроорганизмов, а также представителей гетеротрофов, склонных развиваться с одним или несколькими спутниками. Чистоту таких культур микроорганизмов проверяют высевом на ряд сред, состав которых определяется особенностями метаболизма выделенных микроорганизмов, а также их возможных спутников.

Рост и размножение микроорганизмов. Различают: 1/ рост микробов с равномерным помутнением среды; 2/ придонный рост; 3/ пристеночный рост; 4/ поверхностный рост. Характеризуя рост в жидкой среде, отмечают: степень помутнения -слабая, умеренная, сильная; особенности пленки при поверхностном росте - тонкая или толстая, плотная или рыхлая, гладкая или складчатая (морщинистая), бесцветная или окрашенная (указывают цвет), сухая или влажная; при образовании осадка указывают - скудный он или обильный, плотный или рыхлый, слизистый или хлопьевидный. Нередко рост микроорганизмов сопровождается пигментацией среды, выделением газа, появлением специфического запаха, что отмечается отдельно при характеристике роста.

Для культивирования микроорганизмов необходимо наличие жизнеспособной посевной культуры (инокулята), питательной среды, содержащей все необходимые элементы питания (источник энергии, углерода, макро- и микроэлементов и, в случае потребности, факторы роста), отсутствие в среде разного рода ингибиторов роста. Необходимо также поддержание оптимальных для роста микроорганизмов физико-химических условий окружающей среды (температура, рН, давление, условия аэрации, источники света и др.).

Автотрофы (автотрофия) – организмы, способные использовать углекислоту в качестве единственного или главного источника углерода и обладающие системой ферментов для ее ассимиляции, а также способные синтезировать все компоненты клетки. Некоторые А. могут нуждаться в экзогенных (поступающих извне) витаминах и факторах роста (ауксотрофы). В зависимости от источника энергии, используемого А. для восстановления СО2, различают фотоавтотрофы (наземные зеленые растения; водоросли; цианобактерии, способные к оксигенному фотосинтезу; фототрофные бактерии, осуществляющие аноксигенный фотосинтез) и хемоавтотрофы, получающие энергию за счет окисления неорганических соединений и осуществляющие хемосинтез. Большинство А. ассимилируют углекислоту через восстановительный пентозофосфатный путь (цикл Кальвина). А. – продуценты органического вещества в биосфере, образующие первый трофический уровень в сообществах.

Гетеротрофы – организмы, использующие для питания органические вещества; в узком смысле слова – организмы, использующие органические соединения в качестве источника углерода.

Фотогетеротрофы, фотоорганогетеротрофы – организмы, использующие в качестве источника энергии свет, а в качестве донора электронов и источника углерода – органические соединения. К Ф. относят пурпурные бактерии, гелиобактерии, зеленые нитчатые бактерии.

Хеми…, Хемо… – составная часть сложных слов, указывающая на отношение к химии или хим. процессам.

Лекция 2.3 Типы микробных культур. Кривая роста, особенности отдельных фаз и определение параметров роста. Периодическое и непрерывное культивирование, хемостат и турбидостат

 

 

СЛАЙД 1

Название темы лекции

……………………………………………………………………………………

СЛАЙД 2

Рассматриваемые вопросы:

1.Классификация способов и систем культивирования микроорганизмов.

2. Кривая роста, особенности отдельных фаз.

3.Определение параметров роста.

4.Периодическое и непрерывное культивирование (хемостат и турбидостат).

…………………………………………………………………………………………

 

СЛАЙД 3

 

Культивирование - это выращивание микроорганизмов на питательных средах в определённых условиях, а развивающийся при этом организм называют культурой.

Для осуществления любого процесса мик­робного синтеза необходимы культура микроорганизмов, питатель­ная среда, аппаратура для выращивания и проведения вспомогатель­ных операций, средства контроля и управления.

……………………………………………………………………………………….

 

Культивирование или выращивание микроорганизмов является основной стадией технологического процесса и во многом определяет количественные и качественные характеристики производства микробных препаратов.

На стадии культивирования осуществляется накопление, как са­мой биомассы, так и продуктов метаболизма (жизнедеятельности) микроорганизмов.

Иногда (например, при производстве бактериальных препаратов) целевым продуктом является сама биомасса, в других случаях - про­дукты, синтезируемые клеткой (антибиотики, ферменты, аминокис­лоты). При этом синтезируемый продукт может накапливаться как внутри клеток, так и выделяться в культуральную жидкость.

Необходимые полезные свойства целевых продуктов (клеток или продуктов метаболизма) создаются, в основном, на этапе культиви­рования.

Основная задача на последующих этапах к примеру в технологии состоит в том, чтобы при выделении, сушке и других операциях максимально со­хранить и стабилизировать эти полезные свойства.

………………………………………………………………………………….

 

СЛАЙД 4