Антитела. Основные классы иммуноглобулинов и их свойства. Строение молекул IgG, IgM, IgA.

Билет 1

Антибиотики. Определение. Классификация по спектру и типу антимикробного действия. Примеры антибиотиков.

А/б – химиотерапевтические средства биологического происхождения, их полусинтетические и синтетические аналоги, избирательно подавляющие жизнеспособность м/о или рост злокачественных опухолей. Обладают направленностью (действуют на микробные клетки-мишени и не действуют на клетки организма) и определенным спектром действия (эффективны против определенных видов и родов м/о).

По типу действия а/б делятся на микробостатические и микробоцидные (в зависимости от объекта – бактерио-, фунги-, протозоостатические или –цидные).
А/б со статическим действием подавляют рост и размножение м/о, но жизнедеятельность их восстанавливается при удалении а/б => защитные силы организма должны самостоятельно справиться с временно ослабленным возбудителем.
Микробоцидные а/б необратимо связываются с клетками-мишенями и вызывают их гибель.

По спектру а/микробного действия выделяют:

• а/бакт активность
  а/грибковая
  а/протозойная
• узкого спектра действия
  широкого спектра действия

• детализированное современное деление:
  - действующие на Гр+ бактерии и гр+ и гр- патогенные кокки (цефалоспорины 1 покол., пензинпенициллин, оксациллин, ванкомицин ЕТС.)
  - с преим. актривн. к гр- палочкам (цефалоспорины 3 покол., полимиксин, азтреонам)
  - а/б широкого спектра действия, ктривные к гр+ и гр- бактериям (цефалоспорины 2 поколения, аминогликозиды, тетрациклины, хлорамфеникол, полусинтетические а/б с шир. спектром действ.)
  - противотуберкулезные а/б(стрептомицин, рифампицин, флоримицин ЕТС.)
  - противогрибковые а/б (нистатин, леворин, амфотерицин В ЕТС.)

Серологические реакции, применение в инфекционной иммунологии. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Прямой и непрямой метод. Ингредиенты и механизмы. Применение. Значение для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний.

Иммунные реакции используют при диа­гностических и иммунологических исследо­ваниях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические методы, т. е. методы изучения антител и антигенов с помо­щью реакций антиген—антитело, определяе­мых в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.

Обнаружение в сыворотке крови боль­ного антител против антигенов возбудите­ля позволяет поставить диагноз болезни. Серологические исследования применяют также для идентификации антигенов микро­бов, различных биологически активных ве­ществ, групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, иммунных комплексов, рецепто­ров клеток и др.

При выделении микроба от больного про­водят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т. е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические ан­титела. Это так называемая серологическая идентификация микроорганизмов.

 

Иммунофлюоресцентный метод (РИФ, реакция иммунофлюоресценции, реакция Кунса) - метод выявления специфических Аг с помощью Ат, конъюгированных с флюорохромом. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью.

Применяется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний (идентификация возбудителя в исследуемом материале), а также для определения Ат и поверхностных рецепторов и маркеров лейкоцитов (иммунофенотипирование) и др. клеток.

Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфек­ционных материалах, тканях животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое применение в диагностической практике. Приготовление флюоресцирующих сывороток основано на спо­собности некоторых флюорохромов (например, изотиоцианата флюоресцеина) вступать в химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их иммунологической специфичности.

Различают три разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.
Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.

Механизм. На предметном стекле готовят мазок из исследуемого ма­териала, фиксируют на пламени и обрабатывают иммунной кроличьей сывороткой, содержащей антитела против антигенов возбудителя. Для образования комплекса антиген — антитело препарат помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С в течение 15 мин, после чего тщательно промывают изото­ническим раствором хлорида натрия для удаления не связавших­ся с антигеном антител. Затем на препарат наносят флюоресци­рующую антиглобулиновую сыворотку против глобулинов кро­лика, выдерживают в течение 15 мин при 37 °С, а затем препарат тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия. В результате связывания флюоресцирующей антиглобулиновой сыворотки с фиксированными на антигене специфическими анти телами образуются светящиеся комплексы антиген — антитело, которые обнаруживаются при люминесцентной микроскопии.

Билет 2

Билет 3

Микробиология как наука.

Микробиология — наука, изучающая строение, жизнедеятельность и экологию микроорганизмов — мельчайших форм жизни растительного или животного проис­хождения, не видимых невооруженным глазом. Микробиология изучает всех представителей микромира (бактерии, грибы, про­стейшие, вирусы). По своей сути микробиология является био­логической фундаментальной наукой. Для изучения микроорга­низмов она использует методы других наук, прежде всего фи­зики, биологии, биоорганической химии, молекулярной биоло­гии, генетики, цитологии, иммунологии. Как и всякая наука, микробиология подразделяется на общую и частную. Общая мик­робиология изучает закономерности строения и жизнедеятель­ности микроорганизмов на всех уровнях — молекулярном, кле­точном, популяционном; генетику и взаимоотношения их с ок­ружающей средой. Предметом изучения частной микробиологии являются отдельные представители микромира в зависимости от проявления и влияния их на окружающую среду, живую при­роду, в том числе человека. К частным разделам микробиоло­гии относятся: медицинская, ветеринарная, сельскохозяйствен­ная, техническая (раздел биотехнологии), морская, космическая микробиология.

 

Многочисленные открытия в области микробиологии, изуче­ние взаимоотношений между макро- и микроорганизмами во второй половине XIX в. способствовали началу бурного разви­тия иммунологии. Вначале иммунология рассматривалась как наука о невосприимчивости организма к инфекционным болез­ням. В настоящее время она стала общемедицинской и общеби­ологической наукой. Доказано, что иммунная система служит для защиты организма не только от микробных агентов, но и от любых генетически чужеродных организму веществ с целью со­хранения постоянства внутренней среды организма, т.е. гомеостаза.

 

Современная медицинская микробиология и иммуно­логия достигли больших успехов и играют огромную роль в ди­агностике, профилактике и лечении инфекционных и многих не инфекционных болезней, связанных с нарушением иммунной системы (онкологические, аутоиммунные болезни, транспланта­ция органов и тканей и др.).

Билет 4

Билет 5

1) Свойства вирусов. Репродукция. Особенности репродукции. +РНК и -РНК.

Репродукция вирусов в клетке - продуктивная инфекция – единый процесс, условно подразделяемый на несколько этапов:
1.адсорбция вирионов на летке
2. Проникновение вирусов в клетку
3. Депротеинизация вириона и освобождение его нуклеиновой кислоты (генома)
4. Экспрессия вирусного генома, синтез компонентов вириона (транскрипция, трансляция, репликация)
5. формирование вирионов
6. Выход нового поколения вирионов из клетки

Первые 3 этапа – подготовительные. Собственно репродукция – с 4 этапа.

1. Адсорбция вирионов на клетке – осуществляется при наличии специфических рецепторов. У простых вирусов – поверхностные прикрепительные белки, у сложных – прикрепительных белков роль играют гликопротеины, образующие шипики на суперкапсиде.
Рецепторы на поверхности клеточной мембраны могут иметь различную природу, их количество достигает 10⁴ и более на клетку. Адсорбция начинается как неспецифическая, а продолжается как специфическая (вирус «узнается» и связывается комплементарным рецептором). Тропизм вирусов – избирательное поражение клеток и тканей у определенных видов организмов (наличие комплементарных рецепторов на них).

2. Проникновение вирионов в клетку

- Путем рецепторного эндоцитоза (виропексиса) – в месте адсорбции вируса образуется эндосома (впячивание), содержащая вирус. Она объединяется с клеточной лизосомой и вакуолью, образует рецептосому (проникают и простые и ложные вирусы этим путем).
- путем слияния мембран суперкапсида вируса и клетки. Осуществляется белками слияния. Нуклеокапсид оказывается в цитоплазме клетки. Характерно для сложных вирусов, обладающих F-белками слияния или другими гликопротеинами (например, гемагглютинин вируса гриппа).
- Возможно сочетание.

 

3. депротеинизация вирусов («раздевание»). Цель- освобождение нуклеиновой кислоты для индукции репродукции вируса.
Вирусы, проникшие в клетку рецепторным эндоцитозом, покидают рецептосому путем слияния мембран (сложные вирусы) или при участии капсидных поверхностных белков (простые вирусы). При этом лизосомальными ферментами и ферментами мембраны рецептосомы проводится частичная депротеинизация. Продолжается «раздевание» в цитоплазме протеазами и другими клеточными ферментами.
Если вирус проникает в клетку способом слияния мембран, депротеинизация начинается при уже при проникновении с помощью ферментов клеточной мембраны. Продолжается в цитоплазме.

Освобождение генома может быть полным, а может неплным (остаются внутренние белки или капсидные, которые в дальнейшем защищают нуклеиновую кислоту от нуклеаз цитоплазмы).

 

4. экспрессия вирусного генома. Иногда требует транспортировки в ядро.

А) транскрипция – образование на матрице генома комплементарных и-РНК

Б) трансляция – перевод генетической информации с и-РНК в последовательность аминокислот. Проводится и-РНК на клеточных рибосомах с подавлением синтеза клеточных белков. Вирусные белки могут формироваться: с коротких моноцистронных и-РНК (отдельные белки, на рибосомах), с длинных полицистронных и-РНК (гигантский полипептид, на полисомах, впоследствие нарезается на отдельные белки).

Особенности:
- вирусы с двунитевой ДНК: геномная ДНК -> транскрипция -> и-РНК -> трансляция -> белок (сперва ранние неструктурные, потом поздние структурные)

Осуществляется в ядре (у большинства вирусов) – клеточная транскриптаза, в цитоплазме – вирусная транскриптаза.

- +РНК – геномная РНК одновременно и-РНК: геномная +РНК > трансляция > белок (гигантский полипептид, который нарезается протеазами)
- минус-РНК: геномная –РНК > транскрипция > и-РНК > трансляция > белок
осуществляется собственными транскриптазами

- ретровирусы (онкогенные вирусы и возбудители ВИЧ-инфекции) – диплоидный геном из двух идентичных однонитевых +РНК и ревертазой (обратной транскриптазой) (такой же путь передачи возможно у вируса гепатита В и клещевого энцефалита: геномная РНК > провирус (комплементарная ДНК) > транскрипция > и-РНК > трансляция > белок

 

Репликация: синтез на матрице исходного генома вируса множества идентичных копий. В ядре (у большинства) и в цитоплазме. Процесс начинается после накопления неструктурных ранних белков. Осуществляется вирусными клеточными полимеразами. Осуществляется сразу полностью.

- у двунитевых ДНК-геномов – с помощью репликазы по полуконсервативному типу, подобно клеточным ДНК

- Однонитевые +РНК геном - с помощью вирус-индуцированной РНК-полимеразы. На исходной +РНК формируется –РНК (двунитевый промежуточный репликативный комплекс), которая отщепляется, на ней формируется +РНК, идентичная исходной. происходит накопление множества копий генома.

- однонитевые –РНК геном – с помощью РНК-зависимой РНК-полимеразы, тоже через двунитевый промежуточный репликативный комплекс

- у ретровирусов – те же стадии, что и при транскрипции, с обязательной репликацией провирусной ДНК в хромосому клетки. На матрице провирусной ДНК реплицируются копии однонитевых +РНК.
Для ретровирусов характерно сочетание интегративной и продуктивной инфекции (при преобладании интегративной наблюдается персистенция вируса).

 

В результате экспрессии в клетке накапливаются копии вирусных геномов и структурные белки. Эти процессы происходят в разных частях клетки, и такой способ репродукции называется разобщенным (дизъюнктивным).

 

5. Формирование вирионов из компонентов вируса. В цитоплазме.

Простые вирусы: пустеем самосборки, капсид по спиральному или кубическому типу формируется. Получается нуклеокапсид.

Сложные вирусы формируются в несколько этапов. Образуется нуклеокапсид, затем они взаимодействуют с модифицированными мембранами клетки, одеваются суперкапсидной оболочкой, у некоторых вирусов под суперкапсидом формируется М-слой.

 

6. Выход вирионов из клетки

- при лизисе клетки («по взрувному типу», характерен для простых вирусов)

- путем почкования (сложные вирусы, одновременно приобретают суперкапсид). Клетка погибает не сразу, успевает выделить новые поколения вирусов до истощения ее ресурсов.

Билет 6

Плазмиды.

Плазмиды — дополнительные факторы наследственности, расположенные в клетках вне хромосом и представляющие собой кольцевые (замкнутые) или линейные молекулы ДНК.

Плазмиды способны удваиваться (реплицироваться) автономно, но при этом они эксплуатируют репликационную систему клетки хозяина. Большинство плазмид кодирует специальные белки — инициаторы репликации. Эти белки начинают процесс репликации, который затем подхватывается и продолжается репликационной системой клетки. Существует несколько систем классификации плазмид, базирующихся на:

• топологии (линейные или кольцевые),
• механизмах репликации (см. выше),
• маркерных генах, содержащихся на плазмидах (например: устойчивость к антибиотикам, гены биодеградации ксенобиотиков, системы рестрикции — модификации, гены синтеза бактериоцинов и т. д. — или полному отсутствию оных — криптические плазмиды),
• круге хозяев,
• копийности,
• совместимости,
• конъюгативные (способные к переносу в другие клетки)/неконъюгативные.

Вне зависимости от типа, все плазмиды содержат точку инициации репликации (ori V).

Плазмиды широко используются в генной инженерии для переноса генетической информации и генетических манипуляций. Для этого создаются искусственные плазмиды — векторы, состоящие из частей, взятых из разных генетических источников, а также из искусственно созданных фрагментов ДНК.

Присутствие плазмид в клетках может быть объяснено преимуществами, которые дают плазмидные гены клетке-хозяину (возможность расти в присутствии антибиотика, использование более широкого круга субстратов, защита от бактериофагов, устранение конкурентов путем синтеза бактериоцинов) или же теорией эгоистичной ДНК, как в случае криптических плазмид (т. е. плазмида поддерживается благодаря своей приспособленности к условиям внутри клетки). Некоторые плазмиды, содержащие так называемые островки патогенности, придают бактериям патогенные свойства.

Билет 7

Билет 8

Серологические реакции. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Иммунные реакции используют при диа­гностических и иммунологических исследо­ваниях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические методы, т. е. методы изучения антител и антигенов с помо­щью реакций антиген—антитело, определяе­мых в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.

Обнаружение в сыворотке крови боль­ного антител против антигенов возбудите­ля позволяет поставить диагноз болезни. Серологические исследования применяют также для идентификации антигенов микро­бов, различных биологически активных ве­ществ, групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, иммунных комплексов, рецепто­ров клеток и др.

При выделении микроба от больного про­водят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т. е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические ан­титела. Это так называемая серологическая идентификация микроорганизмов.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА) основана на использова­нии эритроцитов (или латекса) с адсорбиро­ванными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соот­ветствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеива­ние и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка.

Компоненты. Для постанов­ки РНГА могут быть использованы эритроциты барана, лошади, кролика, курицы, мыши, человека и другие, которые заготавли­вают впрок, обрабатывая формалином или глютаральдегидом. Ад­сорбционная емкость эритроцитов увеличивается при обработке их растворами танина или хлорида хрома.

Антигенами в РНГА могут служить полисахаридные АГ микро­организмов, экстракты бактериальных вакцин, АГ вирусов и риккетсий, а также другие вещества.

Эритроциты, сенсибилизированные АГ, называются эритроцитарными диагностикумами. Для приготовления эритроцитарного диагностикума чаще всего используют эритроциты барана, обла­дающие высокой адсорбирующей активностью.

Применение. РНГА применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гор­мона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительнос­ти к лекарственным препаратам, гормонам и в некоторых других случаях.

Механизм. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) отличается значительно более высокой чувствительностью и специфич­ностью, чем реакция агглютинации. Ее используют для иденти­фикации возбудителя по его антигенной структуре или для индикации и идентификации бактериальных продуктов — токси­нов в исследуемом патологическом материале. Соответственно используют стандартные (коммерческие) эритроцитарные анти­тельные диагностикумы, полученные путем адсорбции специфи­ческих антител на поверхности танизированных (обработанных танином) эритроцитов. В лунках пластмассовых пластин готовят последовательные разведения исследуемого материала. Затем в каждую лунку вносят одинаковый объем 3 % суспензии на­груженных антителами эритроцитов. При необходимости реакцию ставят параллельно в нескольких рядах лунок с эритроцитами, нагруженными антителами разной групповой специфичности.

Через 2 ч инкубации при 37 °С учитывают результаты, оценивая внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания): при отри­цательной реакции появляется осадок в виде компактного диска или кольца на дне лунки, при положительной реакции — харак­терный кружевной осадок эритроцитов, тонкая пленка с неров­ными краями.

Билет 9

Билет 10

Билет 11

Билет 12

Типы симметрии.

1.Спиральный. Нуклеиновая кислота расположена винтообразно. Вокруг нее по спирали располагаются структурные белковые субъединицы овоидной формы (протомеры), надежно закрывающие нуклеиновую кислоту вируса. Расходуется много белка, но структура – прочная.
Форма нуклеокапсида полочковидная или нитевидная.
Простые вирусы со спиральным типом симметрии - в основном вирусы растений (вирус табачной мозаики – палочковидный, бактериофаги – нитевидные). Среди поражающих человека простых вирусов - таких не встречается.
Сложные вирусы со спиральным типом симметрии (орто-, пара-, миксовирусы) имеют нуклеокапсид, представляющий собой длинный тяж, упакованный в виде клубка или плотной спирали, который покрыт суперкапсидом, благодаря чему вирион имеет сферическую форму.

2. Кубический тип симметрии. Большинство вирусов посмотрены по этому типу, форма – икосаэдра (20-гранник). Капсид построен из морфологических единиц – капсомеров, имеющих шаровидную, иногда призматическую форму. Каждый капсомер состоит из 5 (пентомер) или 6 (секстомер) структурных белковых единиц. В основе кубической симметрии – комбинации равносторонних треугольников, образуемых капсомерами, что ведет к формированию замкнутой сферической поверхности с полостью внутри.
Белка затрачивается меньше, чем при спиральном типе симметрии. Менее прочен и ненадежно закрывает нуклеиновую кислоту.

Капсиды разных вирусов состоят из различного, но строго определенного для данной таксономической группы, для каждого типа, вида вирусов, количества капсомеров (у вируса полиомиелита – 32 капсомера, у вируса гепатита В – 180 капсомеров).

Билет 13

Билет 14

Билет 15

Билет 16

Билет 17

Билет 18

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Иммуноферментный анализ или метод — выявление ан­тигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интен­сивность окраски прямо пропорциональна количеству свя­завшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных бо­лезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепати­та В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекар­ственных препаратов и других биологически активных ве­ществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях (10¹⁰-10¹² г/л).

Твердофазный ИФА — вариант теста, когда один из компо­нентов иммунной реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или анти­генов. При положительном результате изменяется цвет хромоге­на. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем промывания,

I. При определении антител (левый рисунок) в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сы­воротку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, ме­ченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента.

II. При определении антигена (правый рисунок) в лунки с сорби­рованными антителами вносят антиген (напр., сыворотку кро­ви с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыво­ротку против него и вторичные антитела (против диагностиче­ской сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хро­моген для фермента.

Конкурентный ИФА для определения антигенов: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки.

Другой тест - Конкурентный ИФА для определения антител: искомые анти­тела и меченные ферментом антитела конкурируют друг с дру­гом за антигены, сорбированные на твердой фазе.

 

Билет 19

Билет 20

Билет 21

Реакция агглютинации.

Реакция агглютинации — простая по постановке реакция, при которой происходит связыва­ние антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других клеток, нерастворимых частиц с адсорбированными на них антигенами, а также макромолекулярных агрегатов). Она протекает при наличии электролитов, например при добавлении изо­тонического раствора натрия хлорида.

Применяются различные варианты реакции агглютинации: развернутая, ориентировоч­ная, непрямая и др. Реакция агглютинации проявляется образованием хлопьев или осад­ка (клетки, «склеенные» антителами, име ющими два или более антигенсвязывающих центра — рис. 13.1). РА используют для:

1) определения антител в сыворотке крови боль­ных, например, при бруцеллезе (реакции Райта, Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (реак­ция Видаля) и других инфекционных болезнях;

2) определения возбудителя, выделенного от больного;

3) определения групп крови с использова­нием моноклональных антител против алло-антигенов эритроцитов.

Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации: к разве­дениям сыворотки крови больного добавля­ют диагностикум (взвесь убитых микробов,) и через несколько часов инкубации при 37 ˚С отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т. е. образовался осадок.

Характер и скорость агглютинации зави­сят от вида антигена и антител. Примером являются особенности взаимодействия диагностикумов (О- и H-антигенов) со специ­фическими антителами. Реакция агглютина­ции с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие термостабильный О-антиген) происходит в виде мелкозернис­той агглютинации. Реакция агглютинации с Н-диагностикумом (бактерии, убитые фор­малином, сохранившие термолабильный жгу­тиковый Н-антиген) — крупнохлопчатая и протекает быстрее.

Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентиро­вочную реакцию агглютинации, применяя диа­гностические антитела (агглютинирующую сыворотку), т. е. проводят серотипирование возбудителя. Ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле. К капле диа­гностической агглютинирующей сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больно­го. Рядом ставят контроль: вместо сыворотки наносят каплю раствора натрия хлорида. При появлении в капле с сывороткой и микроба­ми хлопьевидного осадка ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с увели­чивающимися разведениями агглютинирую­щей сыворотки, к которым добавляют по 2—3 капли взвеси возбудителя. Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени просветления жидкости. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмеча­ется в разведении, близком к титру диагнос­тической сыворотки. Одновременно учитыва­ют контроли: сыворотка, разведенная изото­ническим раствором натрия хлорида, должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе — равномерно мутной, без осадка.

Разные родственные бактерии могут агглю­тинироваться одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, что затрудня­ет их идентификацию. Поэтому пользуются адсорбированными агглютинирующими сыво­ротками, из которых удалены перекрестно реагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактериями. В таких сыво­ротках сохраняются антитела, специфичные только к данной бактерии.

Билет 22

Билет 23

Билет 24

Иммунитет

Врожденный	Приобретенный
· Появляется при рождении · Более древний филогенетически · Реакция возникает в первые минуты контакта с чужеродным агентом (воспалительная реакция) · Распознает и уничтожает чужеродные агенты · Распознает молекулы, характерные для определенных возбудителей · Есть рецепторы PAMP	· Появляется в течение жизни · Возникает у позвоночных ~на стадии хрящевых рыб · На реакцию требуется несколько дней · Распознает и уничтожает чужеродные агенты · Распознает чужеродные агенты при помощи специальной АГ-распознающей системы (распознает специфические АГ на поверхности чужеродного агента при помощи рецепторов) · Есть клетки памяти
Клетки
Моноциты\макрофаги, дендритные клетки (ДК), гранулоциты, NK-клетки, тучные клетки, NKT-клетки Все миелоидные+NK	T-, B-лимфоциты α,β-Т-лимфоциты
Гуморальные факторы
Система комплементов Противомикробные пептиды Белки острой фазы воспаления Противовоспалительные цитокины	АТ
В основе
Преимущественно реакция воспаления	Иммунный ответ: Первичный: при первой встрече с АГ Вторичный: при повторной встрече с АГ

Билет 25

Билет 26

1) Клеточная стенка бактерий. Строение Гр+ и Гр- бактерий. Функции клеточной стенки. L-формы.

поверхностная структура бат. кл., располагается над цитоплазматической мембр. (ЦПМ). Защищает клетку от мехаических, физических воздействий окр. ср. защищает от осмотич. лизиса. определ. форму и антигенную специфичность клетки.

отсутсвует у микоплазм.

кл.стенка Гр+ бактерий состоит в основном из пептидогликана (N-ацтилглюкозамин и N-ацетимурамовая к-ты), расположенного в 40 слоев; составляет до 90% массы клет. стенки. Пептидогликан "прошит" ковалентно связанными с ним тейхоевой (продольно) и липотейхоевой (поперечно) кислотами.

кл. ст. Гр- м/о - 1-2 слоя пептидогликана, расп. кнаружи от ЦПМ, с ним посредством липополисахарида связ. наружная мембрана, сходная по строению с ЦПМ, но внутр. сл. образован фосфолипидами, а наружный - липополисахарид (ЛПС).

L-формы м/о - это м/о, полностью или частично утратившие кл.ст., но сохранившие сп-ть в размножению. Устойчивые L-ф. - м/о полностью утратившие кл.ст. и не способные ее восстановить. Неустойчивые L-ф. - м/о, частично утратившие кл. ст. и способные восст-ть ее. Являются осмотически неустойчивыми и исследуются при помощи фазово-контрастной микроскопии.

Клеточная стенка выявляется методом Пешкова:

1. препарат фиксируют жидкостью Карнуа 15 мин.

2. промыв. водой

3. протравливают р-ром танина 6-8 мин

4. промывают водой

5. окраш. водн. р-ром фуксина 30-60сек

6. не промывают, высушивают, микроскопируют

в поле зрения видны клетки с розовой цитоплазмой, окруженные красной клет. стенкой

Билет 27

Билет 28

Билет 28

Билет 30

1) Клеточная стенка бактерий. Строение Гр+ и Гр- клеток. Функции стенки. L-формы.

Билет 31

Билет 32

1) Врожденный и приобретенный противовирусный иммунитет. Факторы иммунитета. Биологические свойства интерферонов.

Билет 33

Билет 34

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Реакция обратной непрямой гемагглютинации (РОНГА). Реакция нейтрализации антител (РНАТ).

Билет 35

Билет 36

Дисбактериоз.

Дисбактериоз=дисбиоз – это клинико-лабораторный синдром, характеризующийся количественным и качественным изменением нормофлоры определенного биотопа, а так же транслокацией некоторых представителей в несвойственные биотопы с последующими метаболическими и иммунными нарушениями.
Результат дисбиотических изменений: снижение колонизационной резистентности, угнетение функций иммунной системы=>повышение восприимчивости к инфекционным заболеваниям, возможно нарушение обменных процессов.
При бактериальном исследовании наблюдается снижение количества/элиминация одного или нескольких видов индигенной м/о, прежде всего лактобацилл и бифидобактерий с одновременым увеличением коичества условно-патогенной микрофлоры.

Причины:
- длительная антибиотико-, химио-, гормонотерапия;
- воздействие жесткого гамма-излучния (облучение, лучевая терапия);
- заболевания ЖКТ инфекционной и неинфекционной этиологии, другие длительные заболевания, иммуно-дефицитные состояния;
- неправильное питание, гипо- и авитаминоз, неблагоприятная экологическая обстановка;
- стрессовые и экстремальные ситуации;
- длительное пребывание в стационарах (госпитальные инфеции) и в замкнутых пространствах (подводные лодки, космические станции);
- у детей раннего возраста: недоношенность, пороки развития, инфицирование условно-патогенной микрофлорой (особо стафилококками) в родильном доме, наличие дисбактериоза у матери, нарушение режима и качества питания ребенка.

Стадии=степени дисбиоза:
1 стадия – компенсированная форма. Снижение кол-ва одного вида индигенных м/о. Это латентная стадия, без клинических проявлений, выявляется лабораторным исследованием. Коррекция: рациональная диета с использованием функциональных продуктов питания.
2 стадия – субклиническая стадия. Элиминация или снижение количества отдельных представителей нормофлоры (бифидо/лактобактерий) с увеличением количества условно-патогенных м/о. Расстройство функций кишечника, местные воспалительные процессы. Диета, функциональное питание, пробиотики и пребиотики.
3 стадия – декомпенсировання форма. Условно-патогенные м/о доминируют, их отдельные представители распространяются в нехарактерные биотопы (например, Е.coli – в желчные пути, Candida - в моче). Выражены патологические изменения, чаще – воспалительные, вплоть до тяжелых септических форм. Коррекция -> «селективная деконтаминация»: антибиотики группы фторхинолонов, монобактамов, аминогликозидов (per.os) – у них избирательная активность к энтеробактериям (они не нарушают колонизационную резистентность). Завершается коррекция использованием пребиотиков, пробиотиков, диеты.

Коррекция дисбиозов:
Комлексная, с учетом основного заболевания и причин дисбиоза.
1. Устраняют причину дисбиоза
2. Проводят коррекцию питания с учетом возраста больного и состояния ЖКТ:
- диеты с кисломолочными продуктами, растительные продукты питания; Детям раннего возраста: адаптированные смеси, обогащенные представителями микрофлоры (Малютка, Бифидок, Бифилакт)
- функциональное питание: пищевые продукты с добавлением биопрепаратов, каратиноидов, антиоксидантов, пищевых волокон. Детям в неонатальном периоде – лиофилизированное грудное молоко, обогащенное B.bifidum.
- При необходимости назначить ферментные препараты, энтеросорбенты, поливитамины с минеральными добавками.
3. Восстановить нормальную микрофлору пре-, про-, синбиотиками.
4. При тяжелой форме дисбактероза: селективная деконтаминация или препараты бактериофагов.

Клинически здоровые дети 1,5-2 лет при обнаружении транзиторной микрофлоры с должным уровнем бифидобактерий не требуют активного лечения (т.к. усл.-патогенные м/о элиминируются под влиянием созревающего адаптивного иммунитета).

 

Билет 37

Билет 38

Применение культур клеток в диагностике вирусной инфекции. Цитопатическое действие вирусов (ЦПД), формы проявления.

Билет 39

Билет 40

Билет 41

1) Капсула бактерий, ее условия образования и химическая природа. Значение и методы выявлени