Основные методы исследования морфологии микроорганизмов. Простые и сложные методы окраски. Протравы и дифференцирующие вещества. Окраска по Граму.

это исследование нативных препаратов и исследование фиксированных окрашенных препаратов.

нативные препараты = живые. исследуются в форме "раздавленной" и "висячей" капель. "раздавленная" капля - капля м/о в жидкости, нанесенная на предметное стекло и покрытая покровным стеклом. "висячая" капля - капля жидкости с м/о, нанесенная на покровное стекло и погруженная в лунку на специальном предметсом стекле.

исследуются нативные препараты 3 способами микроскопии: микроскопия затемненного поля, темнопольная микроскопия, фазово-контрастная микроскопия, электронная микроскопия, люминисцентная(=флюоресцентная) микроскопия.

микроскопия затемненного поля: заключается в микроскопировании препарата в поле не интенсивной освещенности. в результате получаются малоконтрастные изображения. Позволяет выявить движение м/о, микроскопировать простейшие и грибы

темнопольня микроскопия: препарат освещается косыми лучами, не попадающими в объектив, но отражающимися от м/о и частиц в поле зрения. отраженный свет попадает в объектив и становятся видны котуры светящихся м/о (с неразличимыми внутренними структурами). Этот метод позволяет увеличить разрешающую способность микроскопа примерно в 10 раз. Позволяет изучать спирохет и выявлять подвжность м/о.

Фазово-контрастная микроскопия: универсальный метод изучения нативных препаратов. для этого метода используют обычный микроскоп, фазово-контрастное устройство и специальные осветители. используется для изучения некоторых анатом. структур и выявления подвижности м/о; изучения L-форм бактерий и микоплазм.

электронная микроскопия - позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа (0,2 мкм). Используется для изучения вирусов, тонкого строения различных м/о, макромолекулярных структур и других субмикроскопических объектов.

люминисцентная(флюоресцентная) микроскопия - основаня на явлении фотолюминисценции. Люминисценция - свечение объектов после воздействия на них к.-л. источников энергии - световых/электронных лучей, иониирующего излучения. Фотолюминесценция - свечение объекта под влиянием световых лучей.

простые методы окраски - одноэтапные с использованием 1 красителя. препарат фиксируют в пламени горелки, проведя предм. стекло 3 раза через него, окрашивают бумажкой с красителем (добавляя на нее воду и оставляя на 3-5 мин), промывают, высушивают, микроскопируют в иммерсионной системе. красители: фуксин, эозин, метиленовый синий, генцианвиолет.

сложные методы окраски - осуществляются в неск. этапов, препарат красится неск. красителями, используют протравы и диффиренцирующие вещества.

протравы - хим. и физические вещества, повышающие окрашиваемость м/о. Уплотняют цитопл. и делают окраску более прочной, либо разрыхляют клеточную стенку и способствуют проникновению краски в клетку. (р-р люголя в мет. Гр., HCl в мет.Ожешко, фенол и выс. темп-ра в мет. Циля-Нильсена)

дифференцирующие в-ва: избирательно обесвечивают один вид м/о или опред. анат. структуру. (спирт в мет. Гр., серн.к-та в мет. Циля-Нильсена и Ожешко)

Сложные методы окраски подразделяются на дифференциальные(позв. отличить один вид м/о от другого - ме. Гр. и Циля-Нильсена) и методы, позволяющие выявить анат. структ. м/о (споры - Ожешко, клет. ст. - мет. Пешкова, капс. - мет. Бурри-Гинса, зерна волютина - Нейссера мет.)

Метод Грама: диффененциальный мет. окр., позволяет отличить Гр+ от Гр- м/о.

Красители: генциалнвиолет и фуксин; протрава - р-р Люголя; дифф. в-во - этил.спирт.

1. препарат фиксируют в пламени горелки

2. окрашивают генцианвиолетом на фильтровал.бумажке (3-5мин)

3. доб. р-р Люголя (1 мин)

4. промыв. в спирте (30 сек)

5. промыв. водой

6. красят фуксином на фильтровал. бумажке (3-5 мин.)

7. промыв. водой, сушат, микроскопируют в иммерс. среде

в поле зрения видны красные Гр- м/о и синие Гр+ м/о.