Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Обьекты, методы исследований, приборы, оборудованиеСодержание книги
Поиск на нашем сайте
2.1 Наночастицы, используемые в экспериментах in vitro 2.1.1 Характеристика наночастиц серебра Для проведения исследований использованы наночастицы серебра производства фирмы Aldrich, содержание наночастиц серебра 99,5% (следовые количества металлов), размер частиц <100 нм. Частицы имеют органическое покрытие для дисперсии в полярном растворителе.
2.2 Культуры клеток, используемые для изучения токсичности in vitro 2.2.1 Культура клеток карциномы легкого человека (А549). Клетки культивируют в среде ДМЕМ с добавлением 10%-ой инактивированной телячьей эмбриональной сыворотки (FBS), 45 ЕД/мл пенициллина и 45 мг/мл стрептомицина в 5%-ой CO2 среде при 37 °C в CO2-инкубаторе (рисунок 2).
Рисунок 4 – Культура клеток А549
2.2.2 Культура клеток амниона человека, сублиния FL. Морфология: эпителиоподобная. Способ культивирования: монослойный. Условия культивирования: среда - 199 или ЕМЕМ, сыворотка - КРС 10% (199); эмбриональная бычья10% (ЕМЕМ). Процедура пересева - cнятие клеток, используя версен 0,02% c химопсином 0,1 мг/мл, кратность рассева 1:4 - 1:10, оптимальная плотность 0,5-1,0х105 клеток/мл. Кариология: 2n=46, пределы изменчивости по числу хромосом 47-66, модальное число хромосом 60, количество маркеров 9, из которых 3 - специфичны для клеток НеLa (N 1,2,3, G диски). Изоэнзимы Г6ФДГ, А.16. Чувствительность к интерферону человека. Область применения: вирусология, канцерогенез, клеточная биология. 2.2.3 Культура лимфоцитов человека. Культура лимфоцитов человека является одной из обязательных тест-систем при оценке влияния мутагенных факторов окружающей среды. Одним из достоинств этой тест-системы является то, что по наблюдаемым типам аберраций можно достаточно определенно идентифицировать тип мутагенного воздействия. Культивирование лимфоцитов. Кровь отбирают из локтевой вены, помещают в стерильную пробирку, содержащую раствор гепарина (200 ЕД/мл крови). В стерильных условиях образцы крови переливают по 0,8 мл в приготовленные для культивирования флаконы Карреля с культуральной средой. Состав культуральной среды: 6,16 мл среды МЕМ; 1,6 мл инактивированной телячьей сыворотки; 0,08 мл L-глютамина; 0,08 мл р-ра антибиотика; 0,15 мл фитогемагглютинина. Флаконы помещают в термостат при 37°С для инкубации клеток в течение 48 ч. Для блокирования митоза на стадии метафазы за 2 ч до окончания инкубации во флаконы добавляют раствор демеколцина в концентрации 0,2 мкг/мл среды. Гипотонизация клеток. После окончания культивирования культуру клеток переливают в центрифужные пробирки и центрифугируют при 10007 об./мин в течение 15 мин для осаждения клеток. Надосадочную жидкость удаляют с помощью водоструйного насоса, добавляют предварительно подогретый до 37°С гипотонический раствор (0,75 М KCl) и ресуспендируют в нем осадок. Далее пробирки с культурой клеток выдерживают на водяной бане (37°С) 10-12 мин. По окончании гипотонизации вновь центрифугируют при тех же условиях с последующим удалением надосадочной жидкости. Фиксация клеток. Для фиксации клеток осадок ресуспендируют в 1-1,5 мл свежеприготовленного фиксатора (смесь метилового спирта и ледяной уксусной кислоты в пропорции 3:1) на шейкере и доводят его объем до 10 мл. Смену фиксатора с последующим центрифугированием производят трижды. 2.2.4 Культура кардиомиоцитов крыс линии SHR Исходный материал для первичной культуры кардиомиоцитов крыс получают путем дезагрегации 0,25%-ным раствором трипсина при 37ºС в течение 30 мин сердечной ткани 12–14-суточных эмбрионов крысы. После удаления трипсина осадок суспендируют в ростовой среде (90% среды Игла, 10% эмбриональной сыворотки телят с добавлением антибиотиков). Суспензию пропускают через капроновый фильтр (ячейка 0,3 х 0,3 мм). После подсчета в камере Горяева клетки высевают в 96-луночные планшеты и культивируют в ростовой среде DMEM.
|
||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-12-13; просмотров: 320; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.191.9.9 (0.007 с.) |