Введение и эксперессия рекомбинантных молекул днк в клетки прокариот.

Введение рекомбинантных молекул ДНК в клетки прокариот осуществляется на основе природных явлений таких как трансформация, трансдукция и конъюгация.

Трансформация – перенос нужного исследователю гена в клетки реципиента, при помощи изолированной молекулы ДНК (плазмидный вектор).

Трансдукция – перенос нужного нсследователю гена в клетки реципиента с помощью бактериофага(фагового вектора или плазмидно- фагового вектора).

Конъюгация -процесс переноса нужного исследователю гена в составе плазмидного вектора, в результате тесного контакта двух клеток, причем одна из которых бактериальная, способная к половому процессу.

Для повышения эффективности этих природных методов разработаны дополнительные способы. К ним относятся: электропорафия- это обработка клеток- реципиента с помощью тока низкой частоты, для образования брешей. Метод обработки хлоридом кальция также для возникновения бреши.

Метод получения сферопластов. Производит разрушение клеточной стенки бактерий и сохранение только мембраны. Упаковка векторной системы в липосомы, или перед введением в бактериальные клетки лишенные клеточной стенки. Липосомы представляют собой сферические образования, оболочки которых состоят из фосфолипидов, они создаются искусственно путем встряхивания или обработки ультразвуком эмульсий фосфолипидов.

15. Введение и экспрессия рекомбинантных молекул ДНК в клетки эукариот. В кл-ки Р-ий рекомбинантные молекулы ДНК вводятся с помощью методов, кот. разделены на 3 группы: 1) м-ды прямого переноса генов (м-д трансформации протопластов; микро инъекции; м-д электропорации; м-д упаковки в липосомы), 2) разработана для кл-к двудольных Р-ий – м-д кокультивации с агробактерией, 3) м-д биобаллистики (биобаллистической трансформации) разработан для кл-к однодольных Р-ий. В кл-ки Ж-ых рекомбинантная ДНК вводится путем микроинъекции в 1 из ядер (мужское или женское) оплодотворенной яйцеклетки. Наиболее активно применяемым м-дом прямого переноса генов явл. сп-б генет. трансформации Р-ий, называемый биобаллистической трансформацией (чаще для злаковых). Суть м-да заключ. в том, что на микрочастицы-носители из химически инертного металла (золото, вольфрам, платина или лёд), размером 0,6-1,2 мкм, осаждается ДНК, а затем они с помощью порохового заряда, сжатого гелия или электрического поля разгоняются до высоких скоростей (1000 м/сек) и поток частиц кратковременно направляют на поверхность кл-к. Некот. из них проникают внутрь кл-к и попадают в ядро, где могут включиться в хромосомы Р-ия. Следует отметить, что число копий вводимого гена на растительный геном при бомбардировке достаточно неопределённо, причём многие из этих копий представлены в виде неполных последовательностей, что может приводить к нежелательным последствиям, в том числе и к «молчанию» генов. Ещё одним недостатком баллистического метода явл. ограничение размера вводимых генетических конструкций. Как правило, удаётся перенести ДНК размером не более 10 тысяч пар оснований. Плазмиды большего размера плохо закрепляются на металлических частицах или разрушаются при «бомбардировке». Несмотря на недостатки, м-д баллистической трансформации в настоящее время считается наиболее эффективным для злаковых Р-ий. Агробактериальная трансформация. Использование Agrobacterium tumefaciens имеет преимущества перед биолистическим м-дом, поскольку увеличивает пропорцию стабильных низкокопийных событий трансформации, может доставлять сегменты ДНК больших размеров и не требует специальных баллистических установок. В естественных условиях агробактерия вызывает в Р-иях-хозяевах опухоли с названием «корончатые галлы». Корончатые галлы возникают из-за нарушений гормонального баланса, их кл-ки неограниченно растут даже в отсутствие растительных гормонов и сохраняют свои св-ва при элиминации бактерии. Эти отклонения обусловлены наличием в кл-ке бактерии так называемых Ti-плазмид.

 

16. Проблемы экспрессии чужеродных генов в клетках различных организмов и пути их преодоления. Нерешенные проблемы генетической инженерии. Проблемы экспрессии чужеродных генов: 1. При получении белкового продукта, контролтруемого эукариотическим геном в клетках прокариот – важным является знание экзон-интронной структуры гена, т.к. ген прокариот состоит только из экзонов, то при введении эукариотического гена необходимо избавить его от интронов. 2. Существует проблема введение в клетки рецепиента генов большого размера. Преодолевается это путем разрабатывания векторов с большой емкостью. 3. Трансген, внесенный в к-ку животных организмов не всегда интегрируются в их геном до начала клеточных делений зиготы. Вследствие получаются животные-мозаики, часть к-к которых содержит трансген, другая часть – его не имеют. Проблема мозаицизма среди животных 15% преодолена. Не удается ее преодолеть. 4. Трансген, введенный в к-ку реципиента может ч/з некоторое время выключиться и не экспрессироваться.

Нерешенные проблемы генетической инженерии: 1. Перенос более одного трансгена в клетки реципиента; 2. Придание или улучшение у трансгенных растений количественных признаков; 3. Экспрессия эукариотических генов в прокариотических организмах, и наоборот; 4. Проблема создания векторов для трансформации клеток животных; 5. Замолкаемость трансгенов в трансгенном геноме через некоторое время.

17. Технология получения трансгенных микроорганизмов, их практическое использование. В основе достижений ген. инженерии лежит 1 из особенностей строения генома бактерий – наличие у них небольших, отличных от хромосомы, кольцевых молекул ДНК – плазмид, кот. широко распространены в природе и встречаются у подавляющего числа прокариот-их орг-ов, а также у низших эукариот – дрожжей. Важное св-во плазмид - их способность размножаться вместе с ДНК к-ки хозяина. Основная масса исследований, кот. привели к развитию ген. инженерии, проводилась на кишечной палочке Escherichia coli. С помощью ферментов – эндонуклеаз рестрикции, или рестриктаз, плазмида, несущая какой-нибудь маркерный ген, (ген устойчивости к определенному антибиотику), разрезается в строго определенном месте с обр-ем с каждой стороны нескольких (1-5) неспаренных оснований – «липких концов». С помощью таких же рестриктаз получается фрагмент генома организма-донора, несущий нужный ген, (ген человеческого инсулина). Донорную ДНК чаще получают путем «пришивания» «липких концов» к молекуле ДНК, полученной путем обратной транскрипции с матричной РНК нужного гена (кДНК). Главную роль здесь играет фермент обратная транскриптаза, или ревертаза. Далее за счет комплиментарного взаимодействия неспаренных оснований «липких концов» происходит включение нужного гена в плазмиду, при этом образуется новая рекомбинантная (гибридная) ДНК. Завершает процесс фермент ДНК-лигаза, кот. ковалентно зашивает разрывы в цепях ДНК. Следующий этап – перенос рекомбинантной плазмиды в бактерию. Трансформация – это естественный биолог-ий процесс. В естественных условиях трансформация встречается у таких бактерий, как возбудитель пневмонии. Бактерии с трансформированными плазмидами легко отобрать: они способны расти в присутствии антибиотика, против которого в плазмиде имеется ген устойчивости. Другой способ построения векторных молекул использует бактериофаги – особая группа вирусов, заражающих исключительно бактерии. Наиболее широкое применение получил бактериофаг λ. Средняя часть генома этого вируса не несет в себе важных функций и может быть заменена на чужеродный фрагмент ДНК. Сложнее подвергнуть генетической модификации эукариотические м/о (грибы, протисты, растения и животные). Для того, чтобы возник стабильный трансформант, необходимы два последовательных события: проникновение рекомбинантной ДНК в к-ку и ее интеграция в хромосомную ДНК. Такой метод называется интегративной трансформацией. Использование: 1) производство продуктов биосинтеза трансгенных м/о (антибиотиков, гормонов, ферментов и витаминов); 2) использование биомассы м/о – производство медицинских вакцин, различных дрожжей, белково-витаминных концентратов и заквасок для получения кисломолочных продуктов и силосования кормов; 3) биотехнологии, основанные на уникальных способностях некоторых бактерий производить органические кислоты, этанол, углеводы и метан. Переработка некоторых отходов с возможностью получения полезных соединений, в первую очередь, горючих газов.

18.Технология получения трансгенных растений, их практическое использование в сельскохозяйственном производстве. Получение растений с новыми свойствами из трансформированных клеток возможно благодаря их свойству тотипотентности(способности развиваться в целое растение).Технология рекомбинантных ДНК лежит в основе технологии получения трансгенных растений,включ. след. этапы:1)выбор гена и его клонирование-определяется задачами,направленными на придание растениям хозяйственно-полезного признака(устойч. к инфекциям…);2)подбор генотипа растения реципиента-в качестве реципиента подбираются раст-ия высокоурож-го сорта,имеющие лишь одно отриц-ое свойство,которое можно передать с помощью генно-инжен. способов; 3)введение гена и его экспрессия в геноме растения-реципиента; 4)регенерация растений из трансформированных клеток и отбор трансгенных раст-й.Перенос генов в клетки и их встраивание в геном растений осущ. различными методами при помощью векторов. Векторы на основе Ti-плазмид. Некот. виды агробактерий могут заражать двудольные растения,вызывая образование опухолей-корончатых галлов.Вызывают опухоль у растений Ti-плазмиды,кот. способны проникать в клетки растений,а часть ее включается в их ДНК. Ti-плазмида-кольцевая молекула ДНК(Т-область или Т-ДНК+vir-область).Т-область несет гены синтеза опина,ауксина,цитокинина; vir-область отвечает за вырезание Т-области и перенос ее в геном раст. клетки.В качестве векторов для клонирования генов и последующей трансформации растений используют две разновидности Ti-плазмид.Они отличаются по типу опинов(октопины или нопалины),которые синтезируют инфицированные ими растения.Клонируемый ген встраивают вместо кодирующей части генов октопинсинтетазы или нопалинсинтетазы,входящих в состав Т-ДНК. В наст. время на основе Ti-плазмиды сконструированы коинтегративный и бинарный векторы,которые реплицируются в клетках кишечной палочки. Векторы на основе ДНК-содержащих вирусов растений – наиболее перспективным считается вирус мозаики цветной капусты.Вводят его в раст-я путем втирания в листья.Инфицирование небольшого числа клеток приводит к заражению всего растения,так как вирус распространяется от клетки к клетке. Самый распространенный метод получения трансгенных двудольных раст-й - метод кокультивирования с агробактерией (простота проведения трансформации и высокий выход трансген. раст-й).Методы прямого переноса генов в растение: 1)трансформация раст-х протопластов-введение в протопласты практ. любого ДНК-вектора,несущего чужеродный ген. 2)метод микроинъекции ДНК; 3)м.электропорации применяется для введения генов только в протопласты,из кот. могут быть регенерированы жизнеспособные растения;4)м. упаковки в липосомы основан на введении чужеродной ДНК в составе липосом в протопласты растений.5)м. биобаллистической трансформации. Развитие методов,инструментов и подходов генетической инженерии растений позволяет решить в селекции ряд задач:повысить устойчивость новых форм,сортов и гибридов с/х раст-й к небл. условиям окруж. среды,патогенам,вредителям;сократить сроки выведения новых сортов;повысить пищевую ценность с/х раст-й и декорат. качества культурных раст-й;замедлить пр-сы старения;снизить технологич.затраты при выращивании с/х р-й.

 

19. Технология получения трансгенных животных.Современное состояние генно-инженерных работ в животноводстве и ветеринарии. Применение методов генетт-й инженерии в живот-ве способствует изменению ряда свойств организма: повышение продуктивности,резистентности к заболеваниям,увеличение скорости роста, улучшение качества продукции и др.Благодаря переносу генов у трансгенных животных возникают новые качества,а дальнейшая селекция позволяет закрепить их в потомстве и создавать трансгенные линии.Получение трансген. жив-х предусматривает ряд этапов:1)приготовление раствора ДНК для микроинъекции;2)извлечение эмбрионов из донорных организмов;3)микроинъекция ДНК и пересадка инъецированных эмбрионов в яйцеводы или после культивирования в матку реципиентов.У родившихся потомков исследуют экспрессию трансгена на уровне транскрипции и трансляции.Трансгенное потомство получают путем использования традиционных методов разведения животных.В большинстве случаев гены транспортируют на стадии зиготы и двухклеточных эмбрионов.Для трансформации генов в геном животного используют след. приемы: микроинъекцию ДНК в пронуклеус зигот или в каждый бластомер у двухклеточного эмбриона; введение ДНК с помощью ретровирусных векторов; получение трансгенных химер из генетически трансформированных клеток и эмбрионов. Наиболее распространен метод микроинъекции ДНК. Ее осуществляют с помощью специальной пипетки.После инъекции ДНК эмбрионы культивируют до момента пересадки реципиентам.После небольшого культивирования in vitro проинъецированные эмбрионы переносят в яйцеводы (хирургическим путем)реципиентов.Используя методы блот-анализа, дот-блот-анализа и ПЦР, можно получить доказательства интеграции и экспрессии ДНК у трансгенных животных.Сэтой целью используют ядросодержащие клетки тканей или внутренних жидкостей реципиента,из которых выделяют ДНК.Трансген, внесенный в клетки животных организмов, не всегда интегрируется в их геном до начала клеточных делений зиготы,поэтому получают животные-мозаики(часть клеток которых содержит трансген, а часть клеток не имеет).

В конце 70х г. на основе технологии рекомбинантной ДНК получили гормон роста микробного происхождения.Гормон роста,полученный с помощью методов генетт-й инженерии,при крупномасштабном применении вызывал увеличение удоев.При ежедневной инъекции ГР молодняку крупного рогатого скота,свиней и овец удалось увеличить суточные привесы на 20-30% при знач. сокращении расхода кормов.У первых трансгенных мышей(1982г.)отмечалось повышение скорости роста и увеличение конечной живой массы.Однако у трансгенных свиней с геном ГР (1989)увеличение роста не наблюдалось.Др. важн. задача- выведение трансгенных животных устойчивых к заболеваниям.Пока результаты селекции на устойчивость животных к различным заболеваниям невелеки,но обнадеживающи. Созданы популяции крупного рогатого скота с примесью крови зебу,устойчивые к некоторым кровепаразитарным заболеваниям.Одной из важн. задач стратегии использования трансген. жив-х в медицине–получение биологически активных соединений за счет включения в клетки организмов генов,вызывающих у них синтез новых белков.

20 Требования к биобезопасности генно-инженерных технологий. Контроль. Постановление Сов Мина РБ от 19.06.1998 № 963 "О создании Национального координационного центра биобезопасности" Совет Министров Республики Беларусь ПОСТАНОВЛЯЕТ:1. Принять предложение Национальной академии наук Беларуси, согласованное с заинтересованными министерствами и другими республиканскими органами государственного управления, о создании Национального координационного центра биобезопасности, возложив его функции на Институт генетики и цитологии Национальной академии наук Беларуси.2. Основными задачами Национального координационного центра биобезопасности являются: сбор, анализ и систематизация информации о законодательстве и научных исследованиях по вопросам биобезопасности, полевых испытаниях генно-инженерных объектов, ввозе (вывозе), коммерческом использовании в Беларуси генно-инженерных организмов и продуктов на их основе. Предоставление информации, обмен информацией с координационными центрами биобезопасности других стран, международными организациями;Организация научной экспертизы безопасности генно-инженерных организмов и продуктов на их основе. Оказание консультативных услуг министерствам. 3. Оказывать содействие Институту генетики и цитологии Национальной академии наук Беларуси 4. Государственному комитету по науке и технологиям выделять средства республиканского бюджета.

Постановление РБ 5 июня 2002 г. № 734 О МЕРАХ ПО РЕАЛИЗАЦИИ ПОЛОЖЕНИЙ КАРТАХЕНСКОГО ПРОТОКОЛА ПО БИОБЕЗОПАСНОСТИ К КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Совет Министров Республики Беларусь постановляет: 1. Определить: республиканскими органами государственного управления, функций, связанных с высвобождением живых измененных организмов в окружающую среду; Министерство сельского хозяйства и продовольствия и Министерство здравоохранения - в части функций, связанных сиспользованием живых измененных организмов в хозяйственнойдеятельности; 1.2. Институт генетики и цитологии Национальной академии наук создать Национального координационного центра биобезопасности ответственным за связь с Секретариатом Конвенции о биологическом разнообразии. 2. Министерству иностранных дел уведомить о присоединении Республики Беларусь к Картахенскому протоколу по биобезопасности к Конвенции о биологическом разнообразии.

Закон Республики Беларусь от 29.06.2003 № 217-З "О качестве и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов для жизни и здоровья человека". Закон регулирует отношения в области обеспечения качества продовольственного сырья и пищевых продуктов и их безопасности для жизни и здоровья человека. Биологически активные добавки к пище, генетически модифицированные продовольственное сырье и пищевые продукты, качество продовольственного сырья и пищевых продуктов, методы лабораторного производства, производство продовольственного сырья и пищевых продуктов, реализация продовольственного сырья и пищевых продуктов, торговый оборот. Контроль, мониторинг.

21 Типы питательных сред. составу принято выделять естественные или натуральные среды неопределенного состава и синтетические среды. Естественными (натуральными)называют среды, которые состоят из продуктов животного или растительного происхождения. К таким средам относятся овощные или фруктовые соки, животные ткани, молоко, отвары или экстракты, полученные из природных субстратов и т.д. К числу натуральных сред, широко применяемых в лабораторной практике, относятся мясо-пептонный бульон, неохмеленное пивное сусло, дрожжевая и картофельная среды, почвенный экстракт. Синтетические среды - это среды, в которые входят лишь соединения определенного химического состава, взятые в точно указанных количествах. Синтетические среды широко используются при исследовании обмена веществ, физиологии и биохимии микроорганизмов. Полусинтетические среды. Главными компонентами полусинтетических сред являются соединения известного химического состава - углеводы, соли аммония, фосфаты и т.д. Эти среды находят широкое применение в промышленной микробиологии для получения аминокислот, витаминов, антибиотиков и других важных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов. По назначению различают элективные и дифференциально-диагностические (индикаторные) среды. Элективные среды предназначены для выделения микроорганизмов из мест их естественного обитания. Они обеспечивают преимущественное развитие определенной группы микроорганизмов, для которой характерна общность физиологических свойств.Дифференциально-диагностические среды (индикаторные) дают возможность быстро отличить одни виды микроорганизмов от других или выявить некоторые их особенности. Примером индикаторной среды для выявления кишечной палочки в естественных субстратах может служить агарированная среда Эндо. Бактерии из рода Escherichia на этой среде образуют розовые и малиновые колонии с металлическим блеском, а бактерии рода Salmonella - бесцветные. Применяются в санитарной и медицинской микробиологии. По физическому состоянию различают жидкие, сыпучие и плотные среды. Жидкие среды широко применяют для выяснения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, для накопления биомассы или продуктов обмена, а также поддержания и хранения многих микроорганизмов, плохо развивающихся на плотных средах.Сыпучие среды в промышленной микробиологии для культивирования некоторых продуцентов, и для сохранения культур микроорганизмов. К таким средам относятся, например, разваренное пшено, отруби и др.Плотные среды используются для выделения чистых культур, в диагностических целях для описания колоний, для определения количества микроорганизмов, их антибиотической активности, для хранения культур в коллекции и в ряде других случаев. С целью уплотнения сред применяют агар или желатин. Агар получают из водорослей и выпускают в виде пластин, стебельков или порошка. Большинство микроорганизмов не используют его в качестве субстрата для роста. В воде он образует гель, который плавится примерно при 100⁰С и затвердевает при температуре 40⁰С.Желатин - это экстракт, получаемый из субстратов, богатых коллагеном - белком костей, хрящей, сухожилий, чешуи. Используют - для выявления протеолитической активности микроорганизмов, а также для получения гигантских и глубинных колоний дрожжей. На предферментационной стадии проводится подготовка и получение питательных субстратов и сред, технологических и рециркулируемых воды и воздуха, настройка ферментационной аппаратуры. Компоненты питательных сред выбирают на основании расчета материального баланса, связанного с трансформацией источника питания в клеточную биомассу и/или метаболит с учетом расходуемой (выделяемой) энергии. Приготовление питательных сред происходит в специальных реакторах, оборудованных мешалками, обеспечивающими массообмен. В зависимости от совместимости и растворимости компонентов сред могут быть использованы отдельные реакторы. Технология приготовления значительно усложняется, если в состав сред входят нерастворимые компоненты.

22. Природные сырьевые субстраты и отходы производства для культивирования биопродуктов. Питательный субстрат, или питательная среда, является сложной трехфазной системой, содержащей жидкие, твердые и газооб­разные компоненты. микроорганизмы способны ассимилировать любое органическое соединение, поэтому потенциальными ресурсами для микробиологической биотехнологии могут служить все мировые запасы органических веществ, включая первичные и вторич­ные продукты фотосинтеза, а также запасы органических веществ в недрах Земли.Но, к сожалению, каждый конкретный вид микроорганизмов, используемый в биотехнологии, весьма избирателен к питательным веществам, и органическое сырье (кроме лактозы, сахарозы и крахмала) без предварительной химической обработки малопригодно для микробного синтеза. Тем не менее целлюлозосодержащее сырье после химического или ферментативного гидролиза и очистки от ингибирующих или балластных примесей (фенол, фур­фурол, оксиметилфурфурол и др.) может быть использовано в био­технологическом производстве. Каменный уголь, природный газ и древесина могут служить сырьем для химического синтеза техниче­ских спиртов или уксусной кислоты, а последние, в свою очередь, являются отличным сырьем для микробиологической промышлен­ности. Из органического сырья наибольшее внимание биотехнологов привлекает крахмал: много крах­мала расходуется для производства этанола, а также для изготов­ления фруктозных сиропов. Используется меласса, глюкозное сырье, метанол и этанол. Наиболее широко применяемые в производственных условиях источники углерода: кристаллическая глю­коза, техническая сахароза, тех лактоза, гидрол, крахмал, уксусная к-та, спирт этиловый синт-ий, узкая фракция жид­кого парафина, низкомолекулярные спирты (метанол, этанол). В 1939 г. В. О. Таусоном была установлена способность разных видов микроорганизмов использовать в качестве единственного источника углерода и энергии н-алканы и

некоторые фракции нефти

Многие ценные виды побочной продукции раньше считались отходами производства. В канализацию спускали воду после замачива­ния кукурузных зерен при их переработке в крахмал и глюкозу. Теперь эту воду упаривают, получая экстракт, и используют в микробиологической промышленности. Успешно используют отхо­ды химического производства (смесь карбоновых кислот — ян­тарной, кетоглутаровой, адипиновой) и др.; сульфитный щелок, зерновую и картофельную барду, мелассу, гидрол и т. Д.

23. Оборудование для специализированных ферментационных процессов: устройство ферментнров и биореакторов. Стадия ферментации - совокупность последовательных операций от внесения в заранее приготовленную и термостатированную среду инокулята до завершения процессов роста, биосинтеза или биотрансформации. Ферментация проходит в специальных емкостях, называемых ферментерами или биореакторами, которые обеспечивают необходимые физические условия, способствующие наилучшему взаимодействию катализатора со средой и поставляемым материалом. Биореакторы варьируют от простых сосудов до весьма сложных систем с различным уровнем компьютерного оснащения. Основные системы ферментера: - подачи жидкостных (или сыпучих) потоков в аппарат; - ввода и вывода газовых потоков; - аэрирования ферментационной среды; - перемешивания ферментационной среды; - пеногашения ферментационной среды; - термостатирования ферментационного объема; - стерилизации ферментера и ферментационной среды; - вывода жидкостных (или сыпучих) потоков из аппарата; - контроля и регулирования заданных параметров процесса. В зависимости от осуществляемых в них процессов, ферментеры могут быть разделены на следующие группы: 1. аэробные, анаэробные; 2. периодические, непрерывные; 3. стерилизуемые, не стерилизуемые; 4. целевой продукт в клетках, вне клеток; 5. глубинные на растворимых и не растворимых субстратах; 6. близкие к идеальному перемешиванию, идеальному вытеснению. по способу ввода энергии в аппарат (по способу осуществления процессов аэрирования и перемешивания): 1.- с газовай фазой; 2.- с жидкой фазой; 3.- с газовой и жидкой фазой (комбинированные). К. Шюгерль в 1982 г. предложил подразделить биореакторы на 3 основные группы согласно способу потребления энергии для перемешивания и диспергирования г стерильного воздуха (газа): - в биореакторах I типа энергия расходуется на механическое движение внутренних устройств; - в биореакторах II типа энергия расходуется на работу внешнего насоса, обеспечивающего рециркуляцию жидкости и/или газа; - в биореакторах III типа энергия расходуется на сжатие и подачу газа в культуралъную жидкость.