Эфирные масла при острых лучевых поражениях

Оценка радиопротекторных свойств эвкалипта в условиях острого лучевого поражения. ЭМ эвкалипта содержит многоатомные спирты: цинеол, карвакрол и др., ранее не использовавшиеся для радиопрофилактики. ЭМ эвкалипта разрешено Фармкомитетом для применения в медицине, используется как антисептическое средство в виде ингаляций при заболеваниях верхних дыхательных путей [Машковский М.Д., 1987]. Средство проверено в лабораторных условиях путем постановки опытов на мышах линии CBA/lac и гибридах F2(CBA×C57BL) массой 25 г обоего пола.

Тотальное облучение в диапазоне летальных доз проводили на рентгеновской установке РУМ-17, фильтр комбинированный, мощность дозы 0,32 Гр/мин.

Средство применяли следующим образом, мышей ежедневно на 40 мин помещали в камеру, где они дышали воздухом, содержащим ЭМ в концентрации 20 мг/м³. Процедуры проводили в течение 10 дней и прекращали за день до облучения.

Дозу и длительность воздействия ЭМ определяли в предварительных экспериментах с учетом его влияния на показатели иммунной системы, поскольку известно определяющее значение состояния иммунной системы в развитии бактериальных осложнений после радиационных поражений, являющихся причиной сокращения продолжительности жизни. Диапазон концентраций, оказывающих иммуномодулирующее действие, — 20—90 мг/м³. При этих концентрациях признаки токсического поражения внутренних органов и аллергических реакций не были выявлены.

Радиозащитный эффект оценивали по интегральному показателю — 30-дневной выживаемости животных при дозе ЛД 90—100/30 и средней продолжительности жизни животных. Для более полной характеристики динамики гибели вычисляли процент погибших с 1-го по 7-й день (7 %), с 8-го по 14-й день (14 %), с 15-го по 30-й день (21 %). Результаты радиопрофилактического действия ЭМ эвкалипта приведены в табл. 13.

Таблица 13. Радиопрофилактическое действие эвкалипта

Группа животных	Показатели радиационного поражения, %
Контроль		84,6	7,7	92,3
Опыт		38,46	7,69	46,15

Полученные данные позволяют рассматривать ЭМ эвкалипта как радиопротектор.

Оценка радиопротекторных свойств РАВ монарды в условиях острого лучевого поражения. Изучены радиопротекторные свойства ЭМ монарды.

Средство проверено в лабораторных условиях путем постановки опытов на белых беспородных мышах. В опытной группе было 137 мышей, в контрольной — 167. Облучение проводили на стационарной рентгенотерапевтической установке в режиме: 250 кВ, 100 мА, фокусное расстояние — 40 см, фильтр — 2 Сu, экспозиция — 22 мин. Мышей облучали смертельной дозой 1000 R.

Мышам опытной группы перед облучением вводили внутримышечно (в мышцы бедра задних конечностей) 4 раза через день по 0,1 мл 7 % водной эмульсии ЭМ из растения монарды трубчатой. Последний раз эмульсию вводили за 24 ч до облучения. Животным контрольной группы эмульсию не вводили.

Радиозащитное действие ЭМ монарды оценивали по разности показателей средней продолжительности жизни и выживаемости мышей контрольной и опытной групп.

Полученные результаты свидетельствует о том, что ЭМ монарды в виде 7 % водной эмульсии увеличивает продолжительность жизни в 3,2 раза и в 18,3 раза повышает выживаемость животных после тотального облучения рентгеновскими лучами в дозе 1000 R.

Полученные данные позволяют рассматривать ЭМ монарды как радиопротектор.

Эфирные масла при длительном воздействии малых радиационных доз

Работа выполнена на мышах-самцах гибридов FL(CBA×C57BL6) массой 16—18 г. Животных содержали в условиях вивария при смешанном освещении на стандартной диете.

Гуморальный иммунный ответ оценивали по числу антителообразующих клеток в селезенке на 5-е сутки после иммунизации. Использовали метод локального гемолиза в геле агарозы (Ерне и Нордин). Учитывали число АОК на всю селезенку и на 10⁶ спленоцитов. В качестве антигена использовали тимусзависимый антиген — эритроциты барана в оптимальной дозе (2-10⁸ клеток на мышь). Антиген вводили внутривенно в 0,5 мл среды 199.

Облучение экспериментальных животных выполняли на аппарате РУМ-17. Источник излучения Со-60, фокусное расстояние — 15 см, фильтры — Аl и Сu. Мощность облучения — 108 R в 1 мин.

При анализе радиопротекторного действия РАВ их ингалировали животным, помещенным в замкнутое пространство. Время ингаляции — 20 мин. С помощью ароматизатора-дозатора создавали заданную концентрацию 0,2; 0,4; 0,6 мг/м³. В качестве РАВ использовали композицию (лаванда, пихта, мята, базилик, жасмин).

Условия эксперимента: реакция гуморального иммунного ответа на дозированное внешнее облучение в малых дозах; динамика силы иммунного ответа у мышей, перенесших облучение в дозе 0,2 Гр; радиопротекторный эффект РАВ при дозированном хроническом облучении в малых дозах.

На первом этапе исследования была выявлена зависимость силы иммунного ответа от дозы облучения. При этом исследовали реакцию гуморального компонента иммунного ответа на дозированное внешнее облучение в малых дозах. В качестве контрольных животных были использованы интактные мыши, ибо манипуляции, связанные с облучением (подсадка мышей в контейнеры и пр.), существенно не влияли на иммунный ответ (табл. 14).

Оказалось, что однократное внешнее облучение в малых дозах способно изменить иммунный ответ (табл. 15).

Облучение в дозах 0,4 и 0,6 Гр приводило к супрессии иммунного ответа, а облучение в дозе 0,2 Гр не сопровождалось ограничением накопления АОК. Однако последующие исследования показали, что облучение, даже однократное в допустимой дозе аварийного обслуживания, сопровождается угнетением антителообразования в динамике пострадиационного периода (табл. 16).

Таблица 14. Гуморальный иммунный ответ на эритроциты барана ннтактных мышей и мышей, подвергнутых ложному облучению

Группа животных	Число опытов (и мышей)	Количество АОК
на селезенку	на 10^6 спленоцитов
Интактные	2(11)	46 282
Ложнооблученные	2(10)	48 183

Таблица 15. Реакция гуморального компонента иммунного ответа на однократное дозированное внешнее облучение в малых дозах

Группа животных	Число опытов (и мышей)	Количество АОК
на селезенку	на 10^6 спленоцитов
Интактные	2(13)	36 303
Доза 0,2 Гр	2(12)	33 164
Доза 0,4 Гр	2(12)	22 676
Доза 0,6 Гр	2(11)	23 288

Таблица 16. Динамика силы иммунного ответа у животных, перенесших внешнее равномерное облучение в дозе 0,2 Гр

Сутки послеоблучения	Группа животных	Число опытов(и мышей)	Количество АОК
на селезенку	на 10^6 спленоцитов
	Контроль Опыт	2(11) 2(12)	33 474 29 922	99 130
	Контроль Опыт	2(10) 2(10)	25 276 11 053	51 29
	Контроль Опыт	2(11) 2(10)	19 520 41 114	104 308

Супрессия гуморального иммунного ответа после однократного внешнего облучения в дозе 0,2 Гр была зарегистрирована на 4-е сутки пострадиационного периода.

На втором этапе исследования животных ежедневно подвергали воздействию ионизирующего излучения в течение 20 дней до суммарной дозы, равной эффективной допустимой дозе аварийного обслуживания человека, способной, судя по представленным выше данным, обусловить развитие иммунодепрессии (0,2 Гр), отчетливо регистрируемой на 4-е сутки пострадиационного периода. Мышей опытной группы перед облучением ингалировали композицией в течение 20 мин в заданных концентрациях. В качестве контроля использовали животных, получивших только ингаляцию. Иммунизацию проводили по схеме на 7-е, 15-е и 21-е сутки. Опыт дублирован. В использованных группах мышей число животных колебалось от 10 до 14.

Хроническое дозированное облучение в течение 20 дней до суммарной дозы, равной эффективной допустимой дозе аварийного обслуживания человека, сопровождалось иной динамикой модуляции функции иммунной системы по сравнению с таковой при однократном облучении в равной дозе (0,2 Гр).

Супрессия антителообразования в ответ на антигенную стимуляцию эритроцитами барана при хроническом дозированном облучении регистрировалась в тот период, когда при остром однократном облучении наблюдается стимуляция гуморального иммунного ответа, в частности на 7—8-е сутки. Очевидно, репаративные процессы в иммунной системе при хроническом дозированном облучении, имеющие клеточную природу, оказывались существенно подавленными. Ингаляция композицией РАВ в дозах 0,4 и 0,6 мг/м³ способна обеспечить иммунопротективный эффект, возможно, через стимуляцию репаративных процессов. В селезенке мышей, получавших ингаляции, накапливалось достоверно большое АОК по сравнению с их числом у мышей, подвергнутых только облучению. На 15-е сутки хронического дозированного облучения различия не столь демонстративны.

В основе феномена стимуляции антителогенеза при дозированном хроническом равномерном облучении, регистрируемого по числу АОК на миллион спленоцитов на 15-е сутки облучения, лежит, возможно, не только стимуляция репаративных процессов, например усиленная миграция стволовых кроветворных клеток в органы иммуногенеза из костного мозга, но и угнетение Т-супрессоров. Следовательно, есть основание предположить, что ингаляции могут реализовать свой иммунопротективный эффект не только на уровне стволовой кроветворной клетки, но и на уровне регуляторных популяций Т-лимфоцитов, снимая, например, ограничение функции Т-лимфоцитов-супрессоров. С достоверностью можно только сказать, что ежедневные ингаляции композицией в дозах 0,4—0,6 мг/м³ в течение 7 дней до иммунизации и 5 дней после иммунизации способны обеспечить иммунопротективный эффект при хроническом равномерном дозированном облучении малыми дозами, не превышающими суммарной дозы 0,12 Гр.

Эфирные масла и резервные возможности костного мозга животных при хроническом радиационном облучении. В работе использованы самцы мышей гибридов FL(CBA×C57BL6) 3-месячного возраста. Хроническое радиационное облучение в малых дозах воспроизводили на аппарате РУМ-17 ежедневно в дозе 0,2 Гр в течение 25 дней. Все животные были разделены на три группы: 1-я группа — интактные мыши, 2-я группа — контрольные (подвергнуты только облучению), 3-я группа — опытные (получавшие сразу после облучения ингаляции РАВ). Ингаляции проводили в течение 20 мин вгерметически замкнутом объеме. Использовали природную концентрацию РАВ — 0,2 мг/м³. В качестве ароматического вещества применяли масло лаванды. Из каждой группы для исследования брали по 5 мышей.

Исследовали периферическую кровь. Каждые 5-е сутки учитывали число лейкоцитов, эритроцитов, подсчитывали лейкоцитарную формулу. Кровь забирали при декапитации.

Прежде всего следует отметить, что не только однократное внешнее облучение в допустимой дозе аварийного обслуживания (0,2 Гр) сопровождается модуляцией гуморального иммунного ответа в динамике пострадиационного периода: в первые 4 сут регистрируется его снижение, а на 8-е сутки — повышение. Ежедневные воздействия ионизирующим излучением до суммарной дозы, которая в 3 раза меньше 0,2 Гр, ограничивают регенеративную способность костного мозга как источника иммунокомпетентных клеток и иммуногенез (табл. 17).

Таблица 17. Гуморальный иммунный ответ на эритроциты барана у мышей, перенесших хроническое дозированное равномерное облучение в суммарной дозе 0,07 Гр

Период исследования (сутки)	Группа животных	Число опытов (и мышей)	Количество АОК
на селезенку	на 10^6 спленоцитов
7—8-е	Контроль Опыт	2(12) 2(11)	18 067 7600	129 60

С учетом приведенных данных не вызывает сомнений, что использование в дальнейших исследованиях хронического дозированного равномерного облучения малыми дозами (в частности, ежедневное облучение в дозе 0,2 Гр) в течение 25 дней можно рассматривать в качестве модели хронической лучевой болезни. Гематологически она проявляется постепенно развивающейся лейкопенией, эритроцитозом, абсолютной лимфопенией (табл. 18) и ограничением резервных возможностей костномозгового кроветворения, например в условиях повышенной нагрузки на эритропоэз, индуцированной гипоксической гипоксией (табл. 19).

РАВ в природных концентрациях заметно «снимают» отмеченные патологические сдвиги, что наиболее отчетливо проявляется с 20-х суток наблюдения (табл. 20). На 25-е сутки показатели крови мышей опытной группы практически не отличаются от таковых интактных мышей.

Эффект РАВ реализуется на уровне костного мозга, ибо резервные возможности его у этой группы мышей сохраняются, о чем свидетельствует усиление эритропоэза в ответ на гипоксическую гипоксию. В контрольной группе количество эритроцитов в периферической крови животных после гипоксии не изменяется, в то время как в опытной группе регистрируется достоверное увеличение числа эритроцитов (табл. 21).

Таблица 18. Показатели клеточного состава периферической крови мышей при хронической лучевой болезни

Сутки от начала облучения	Группа животных	Показатели крови
лейкоциты, 10^9/л	эритроциты, 10^12/л	лимфоциты, 10^9/л
5-е	Интактные Контрольные	6,05 6,5	3,9 3,6	3,33 3,57
10-е	Интактные Контрольные	9,3 7,2	4,7 5,3	5,3 3,8
15-е	Интактные Контрольные	6,1 6,2	4,4 7,5	3,2 3,2
20-е	Интактные Контрольные	7,0 3,5	2,9 5,3	3,9 1,9
25-е	Интактные Контрольные	5,3 2,8	3,4 6,9	3,8 1,7

Таблица 19. Количество эритроцитов в периферической крови мышей интактной и контрольной групп, перенесших гипоксическую гипоксию

Период исследования	Группа животных	Количество эритроцитов, 10^12/л
Исходный	Интактные Контрольные	3,9 5,6
5-е сутки после гипоксии*	Интактные Контрольные	4,7 5,3

* Гипоксическую гипоксию воспроизводили «поднятием» мышей в барокамере на «высоту» 10 000 м с «площадкой» в течение 5 мин.

Таблица 20. Показатели клеточного состава периферической крови мышей при сочетанном действии иронического облучения и ингаляции РАВ

Сутки от начала облучения	Группа животных	Показатели крови
лейкоциты, 10^9/л	эритроциты, 10^12/л	лимфоциты, 10^9/л
20-е	Интактные Контрольные Опытные	7,0 3,5 4,4	2,9 5,2 4,7	3,9 1,9 2,9
25-е	Интактные Контрольные Опытные	5,3 2,8 5,8	3,4 6,9 4,7	3,8 1,7 3,1

Таблица 21. Количество эритроцитов в периферической крови мышей опытной и контрольной групп, перенесших гипоксическую гипоксию

Период исследования	Группа животных	Количество эритроцитов, 10^12/л
Исходный	Интактные Контрольные Опытные	3,9 5,6 5,3
5-е сутки после гипоксии	Интактные Контрольные Опытные	4,7 5,3 6,9

Таким образом, РАВ обладают радиопротекторными свойствами. Последнее реализуется на уровне костномозгового кроветворения; очевидно, основной мишенью радиопротекторного действия РАВ являются плюрипотентная стволовая клетка или ее ближайшие потомки — коммитированные клетки-предшественники.

Глава 21. АНТИКАНЦЕРОГЕННОЕ ДЕЙСТВИЕ ЭФИРНЫХ МАСЕЛ

Есть заболевания, которые в далеком прошлом встречались крайне редко, а в настоящее время являются серьезной медицинской проблемой. К таким заболеваниям относится рак. Человеческая деятельность в наше время увеличивает риск развития рака. Это корпускулярные (а и Р) и ионизирующие (рентгеновские и γ-лучи) излучения, ультрафиолетовые лучи (озоновые дыры), резкое ухудшение экологической ситуации в глобальном масштабе, затрагивающие атмосферу, водоемы, почву и т.д. Нередко злокачественными опухолями осложняются заболевания с иммунологической недостаточностью: профессиональная патология, стрессы, нарушения эндокринного равновесия и др.

Смертность от злокачественных опухолей занимает второе место среди общей смертности, причем она проявляет тенденцию к увеличению, а существующие методы лечения в большинстве случаев остаются малоэффективными. В связи с этим встает наиболее остро проблема профилактики.

Особую актуальность приобретает разработка новых методов выявления и профилактики доклинических форм заболевания (онкологический риск!) как наиболее перспективных направлений профилактики злокачественных опухолей.

В настоящее время раковые клетки можно обнаружить в организме лишь в том случае, когда их число превышает 10⁹. Однако это количество уже соответствует клинически далеко зашедшему процессу, так как по достижении 10¹² клеток наступает смерть.

Растения постоянно привлекают внимание исследователей в качестве противоопухолевых веществ. Известный советский химиотерапевт Е.М.Вермер считал, что противоопухолевые вещества надо искать в первую очередь среди растительных веществ, тормозящих их рост и подготавливающих растения к зимнему анабиозу.

В Индии уже много лет назад в качестве противоопухолевого препарата применялся барвинок. Многие другие противоопухолевые средства, созданные на базе различных растений, имеют свою историю. Народный опыт характерен тем, что для лечения используются растительные вещества, лечебный эффект которых действительно наблюдался на протяжении многих поколений.

В исследованиях установлена противоопухолевая активность экстрактов из тополя бальзамического, различных видов полыни. Экстракт из листьев эвкалипта препятствовал развитию цитогенетических нарушений. Так, число клеток с хромосомными аберрациями у интактных животных составляло 1,5 %, после иммунизации мышей вирусом полиомиелита — 12,8 %. При введении одновременно с вакциной экстракта из эвкалипта уровень нарушений снижался на 20—60 %.

Некоторые исследователи нетоксической терапии онкологических заболеваний на экспериментальных моделях отдают предпочтение препаратам растительного происхождения, относящимся к группе адаптогенов (женьшень, родиола розовая, элеутерококк, лимонник китайский). Они способствуют повышению адаптации организма к неблагоприятным условиям, в частности в послеоперационном периоде онкологических больных, для стимуляции клеточного иммунитета при иммунодепрессии.

Противоопухолевый антибиотик из растений — препарат «К»— при введении в организм повышает синтез IgM, обладающий противоопухолевым действием, повышает чувствительность замедленного действия. На основе производных азулена (компонента ЭМ) создан противоопухолевый препарат.

Известно, что канцерогенез может быть предотвращен введением различных химических соединений как природного, так и синтетического происхождения. В настоящее время обнаружено, что вещества, обладающие антиканцерогенными свойствами, принадлежат к 25 различным классам химических соединений. Антиканцерогенные соединения принято классифицировать в соответствии с тем этапом канцерогенеза, на котором они эффективны. К первому типу ингибиторов относятся вещества, предотвращающие образование собственно канцерогенов из их предшественников, ко второму — так называемые блокирующие агенты, которые препятствуют доступу канцерогенов к критическим мишеням или взаимодействию с ними, к третьему — подавляющие агенты, препятствующие развитию опухолевого процесса в клетках, уже подвергшихся взаимодействию с канцерогеном.

Наши исследования относятся к изучению действия антиканцерогенов второго типа, препятствующих взаимодействию канцерогенов с критическими мишенями — белками и образованию канцерогенов — белковых аддуктов (КБА). Исследования в этом направлении представляются наиболее перспективными для решения таких актуальных вопросов онкологии, как разработка высокоэффективных методов первичной специфической химиопрофилактики повышенного профессионального онкологического риска.

Известно, что взаимодействие канцерогенов с нуклеиновыми кислотами и клеточными белками является ключевым звеном в процессах инициации канцерогенеза. Модификация клеточных белков, происходящая в результате их взаимодействия с канцерогенами, может обусловливать повреждение процессов репликации, транскрипции и клеточного деления и, таким образом, модулировать трансформацию клеток или опухолевую прогрессию. Образующиеся при взаимодействии канцерогенов с белками КБА, как было показано, являются высокоспецифическими маркерами канцерогенеза и могут быть использованы для выявления лиц с повышенным онкологическим риском среди промышленных рабочих, а также как эффективные маркеры контроля и регистрации антиканцерогенного действия изучаемых модуляторов канцерогенеза.

Исследования антиканцерогенного и иммуномодулирующего действия РАВ проводились нами на мышах линии СЗНА, получавших в течение 15 дней известный канцероген — бензидин, вызывающий у людей опухоли мочевого пузыря, а у мышей этой линии — развитие гепатом. Эта экспериментальная модель успешно использовалась ранее для изучения антиканцерогенного действия синтетических соединений — полимеров и природных биорегуляторов — витаминов.

Бензидин давали мышам с основной диетой в дозе 100 мг/кг. РАВ эфирных масел вводили ингаляционным способом. Ингаляции производили в специально оборудованной герметической камере в течение 1 ч через день (9 раз). Скорость подачи воздуха, смешанного с летучими РАВ, составляла 3 л/мин. Исследованию подвергали следующие группы животных: 1) мыши, получавшие канцероген в течение 15 дней; 2) мыши, которым вводились РАВ без канцерогена через день (9 раз); 3) мыши, получавшие в течение 15 дней бензидин и эфирные масла; 4) интактные животные (контрольная группа).

Антиканцерогенное действие РАВ оценивали путем сравнительного изучения их влияния на образование КБА в группах мышей, получавших один канцероген и канцероген в сочетании с введением масел. Иммуномодулирующее действие РАВ оценивали путем определения их влияния на образование антителообразующих В-лимфоцитов и розеткообразующих Т-лимфоцитов.

Известно, что бензидин вызывает в печени и в сыворотке крови мышей линии СЗНА через 15 дней после введения образование КБА двух типов: содержащих экзогенный канцероген — бензидин и эндогенный — метаболит триптофана — 3-оксиантраниловую кислоту (3-ОАК). Появление КБА второго типа связано с метаболическими нарушениями, индуцируемыми поступлением в организм экзогенных канцерогенов.

Для определения КБА использовали метод встречной иммунодиффузии в агаре. Тест-системой для определения КБА служили иммуносыворотки кроликов, содержащие антитела против канцерогенов как гаптенов. Для иммунизации кроликов и получения иммуносывороток использовали синтетические, содержащие канцерогены вещества — бензидин и 3-ОАК — азопротеины. Азопротеины получали путем диазотирования аминогрупп канцерогенов и последующего азосочетания полученных диазосоединений с белковым носителем — альбуминами лошадиной сыворотки крови.

КБА определяли в сыворотке крови и экстрактах печени мышей. Для получения сыворотки крови применяли пул от 3—5 мышей. Для получения тканевых антигенов использовали печень от каждой мыши. Тканевые экстракты печени получали путем гомогенизации ткани этого органа в объеме воды, равном 5-кратному весу печени. После гомогенизации экстракты оставляли на сутки в рефрижераторе при +4 ˚С, а затем центрифугировали при 8000 об/мин и концентрировали до содержания белка в пробах 3—6 г%.

Состояние иммунореактивности в группах подопытных и контрольных животных оценивали путем подсчета антителообразующих В-клеток (АОК) в селезенке мышей против эритроцитов барана (ЭБ) при помощи реакции локального гемолиза в геле, отражающих состояние В-системы иммунитета, и розеткообразующих Т-клеток (РОК), отражающих состояние Т-системы иммунитета. Определение Т-лимфоцитов проводили в селезенке, вилочковой железе и лимфатических узлах при помощи реакции иммунного розеткообразования. Статистическую обработку результатов исследований проводили при помощи t-критерия Стьюдента.

Исследовали шалфейное, гвоздичное, жасминовое, анисовое, эвгеноловое ЭМ, основную фракцию ЭМ базилика, пихтовое ЭМ масло лавра и эвкалиптовое. Результаты проведенных исследований показали следующее.

Введение мышам лишь одного канцерогена — бензидина вызывало:

· образование в сыворотке крови и в ткани-мишени печени животных КБА, содержащих экзогенный канцероген — бензидин и эндогенный — 3-ОАК у всех 14 обследованных мышей;

· снижение количества АОК в селезенке мышей; в контроле число АОК составляло 309,7, в то время как у мышей, получавших бензидин, — 136,8 (Р<0,001);

· инволюцию вилочковой железы и снижение количества розеткообразующих Т-лимфоцитов в селезенке и лимфатических узлах. В контроле число розеткообразующих Т-лимфоцитов составляло в селезенке 26,3, в лимфатических узлах — 34,0 и в вилочковой железе — 18,0, в то время как у мышей, получавших бензидин, в селезенке — 14,1 (Р<0,001) и в лимфатических узлах — 21,0 (Р<0,01).

Введение мышам одних РАВ без канцерогена оказывало различное действие на состояние иммунореактивности в зависимости от типа вводимых ароматических веществ. РАВ шалфейного масла не оказывали иммуномодулирующего действия на состояние иммунореактивности мышей. РАВ гвоздичного ЭМ вызывали статистически достоверное по сравнению с контролем увеличение с&#x043E;держания как АОК, так и розеткообразующих Т-лимфоцитов в селезенке, вилочковой железе и лимфатических узлах мышей: в селезенке число РОК составляло 43,7, в лимфатических узлах — 60,0 и в вилочковой железе — 31,0.

РАВ жасминового масла приводили к стимуляции образования АОК в селезенке мышей: их число было статистически достоверно выше по сравнению с контрольными показателями, а также к увеличению содержания Т-розеткообразующих клеток в селезенке мышей (33,3) и не влияло на число РОК в вилочковой железе и лимфатических узлах. РАВ анисового и пихтового масел вызывали стимуляцию образования АОК в селезенке мышей и не влияли на число розеткообразующих Т-лимфоцитов. РАВ ЭМ лавра не влияли на образование АОК и РОК в селезенке и лимфатических узлах, но стимулировали число Т-лимфоцитов в вилочковой железе (40,2). РАВ эвкалиптового масла оказывали иммуностимулирующее действие на образование АОК [число АОК при применении масла повышалось до 367,7, в то время как в контроле составляло 249,8 (Р<0,001)] и на образование РОК в селезенке (43,3; Р<0,02) и в лимфатических узлах мышей (46,6; Р<0,01). РАВ эвгенола не оказывали стимулирующего действия ни на число РОК, ни на число АОК: значения этих показателей были даже достоверно ниже, чем в контроле (число РОК в селезенке мышей составляло 21,6, в лимфатических узлах — 21,6 и в вилочковой железе — 14,7).

Одновременное введение мышам канцерогена и РАВ эфирных масел вызывало следующие изменения изучаемых показателей. Ингаляционное введение мышам одновременно с бензидином некоторых РАВ — как шалфейного, так и гвоздичного ЭМ — вызывало полное подавление образования бензидин и 3-ОАК-содержащих КБА в сыворотке крови и в печени всех исследованных животных; стимуляцию образования антителообразующих В-клеток, число которых не только достигло уровня контроля, но и статистически достоверно превышало его; стимуляцию образования розеткообразующих Т-лимфоцитов в селезенке, вилочковой железе и лимфатических узлах, количество которых не только было статистически достоверно выше соответствующих значений в группе мышей, получавших бензидин, но также достоверно превышало содержание их в группе контрольных животных. Так, в группе мышей, получавших бензидин- и РАВ гвоздичного масла, количество РОК в селезенке составляло 31,2, в лимфатических узлах — 45,5 и в вилочковой железе — 24,6.

При введении РАВ жасминового ЭМ одновременно с канцерогеном отмечалось подавление образования КБА, содер&#x0436;ащих 3-ОАК, и снижение образования КБА, содержащих бензидин в печени мышей: из 14 исследованных мышей бензидин-КБА был обнаружен в печени только 2 животных. На образование КБА в сыворотке крови мышей эти РАВ не влияли. Результаты исследования иммунореактивности в этой группе мышей свидетельствовали об увеличении числа АОК, достоверное как по сравнению с группой мышей, получавших бензидин, так и по сравнению с контрольной группой животных. Число РОК увеличивалось только в селезенке и вилочковой железе мышей этой группы и лишь по сравнению с группой животных, получавших один бензидин: в селезенке &#x043A;оличество розеткообразующих Т-лимфоцитов составляло 26,7, в вилочковой железе — 21,6. Число Т-лимфоцитов в лимфатических узлах мышей, получавших канцероген и РАВ жасминового масла, не отличалось от соответствующих значений животных контрольной группы (30,2).

Введение РАВ анисового масла с канцерогеном практически не влияло на образование КБА, вызывая лишь снижение частоты регистрации 3-ОАК-антигенов в печени мышей: из 5 подопытных животных 3-ОАК-антиген был обнаружен в печени 2 мышей. В этой группе животных РАВ анисового масла оказывали стимулирующее действие только на образование АОК, которых было достоверно выше, чем у мышей, получавших один канцероген. Число РОК в этой группе было ниже, чем в контроле, в селезенке (13,5) и лимфатических узлах (24,3), а в вилочковой железе, так же как и у мышей, получавших один бензидин, отмечалась инволюция.

Одновременно введение РАВ эвгенола с канцерогеном вызывало снижение образования КБА только в печени животных: из 5 подопытных мышей 3-ОАК-антигены и бензидин-антигены были обнаружены в печени у одного животного. Эвгенол оказывал некоторый защитный эффект на число АОК и РОК в селезенке мышей, значения которых были выше, чем у мышей, получавших бензидин, но ниже, чем в контроле: число РОК в селезенке мышей этой группы составляло 19,1, в вилочковой железе — 13,1 и в лимфатических узлах — 20,3.

РАВ пихты при введении одновременно с бензидином не влияли на частоту регистрации КБА в печени животных, но вызывали снижение их образования в сыворотке крови мышей: из 5 подопытных животных КБА, содержащие бензидин и 3-ОАК, были обнаружены в сыворотке крови только одного животного. Эти РАВ оказывали защитное действие на число АОК, которое было достоверно выше, чем в группе мышей, получавших один бензидин, но ниже, чем в контроле, и препятствовали инволюции вилочковой железы — число РОК в нем (18,5) не отличалось от соответствующего значения в контроле (18,0), но не влияло на число РОК в селезенке (19,0) и лимфатических узлах (24,8), которое достоверно не отличалось от соответствующих значений в группе мышей, получавших один канцероген.

РАВ масла лавра при одновременном введении с бензидином вызывали снижение процента обнаружения 3-ОАК-антигена в сыворотке крови (66,7 %) и в печени животных (17,6 %) и бензидин-антигена в печени мышей — до 5,9 %. На появление бензидин-антигена в сыворотке крови мышей эти РАВ не оказывали влияния. Под действием РАВ лавра в группе этих мышей не наблюдалось снижения содержания АОК в селезенке (259,6) по сравнению с группой мышей, получавших бензидин, которое сохранялось на уровне значения у мышей контрольной группы (249,8); не отмечалось также снижение содержания РОК в селезенке (24,4), вилочковой железе (30,0), лимфатических узлах (33,2), характерного для животных, получавших бензидин.

РАВ эвкалипта при одновременном введении с бензидином не оказывали влияния на образование КБА, но способствовали увеличению числа РОК в селезенке (41,5), лимфатических узлах (42,4) и вилочковой железе (41,0) животных, которое было достоверно выше не только по сравнению с этим показателем в группе мышей, получавших один канцероген, но и по сравнению с группой контрольных животных. Однако в отличие от РОК число АОК в селезенке этой подопытной группы мышей (89,9) оказалось достоверно значительно ниже по сравнению не только с контрольной группой животных (249,8), но и с группой мышей, получавших один бензидин (145,2).

На основании полученных материалов исследований могут быть сделаны следующие выводы.

Из 8 испытанных ЭМ иммуностимулирующие свойства были обнаружены при действии шести видов эфирных масел — гвоздичного, жасминового, анисового, пихтового, эвкалиптового и масла лавра. При этом одни масла стимулировали преимущественно В-систему иммунитета (анисовое и пихтовое), другие — Т-систему иммунитета (масло лавра); наибольший интерес представляют РАВ, стимулирующие как В-, так и Т-системы иммунитета: гвоздичное, жасминовое и эвкалиптовое масла.

Антиканцерогенные свойства РАВ проявляются в торможении взаимодействия канцерогенов с белками и образовании КБА; они обнаружены при действии РАВ гвоздичного, шалфеиного, жасминового, анисового, лаврового, пихтового масел, эвгенола. При этом только РАВ гвоздичного и шалфеиного масел вызывали полное торможение обра&#x0437;ования КБА как в сыворотке крови, так и в печени животных. Остальные РАВ оказывали частичный эффект.

Введение всех исследованных РАВ одновременно с бензидином препятствовало иммунодепрессивному действию канцерогенов на В- и Т-иммунитет. При этом одни РАВ оказывали защитный эффект преимущественно на В-иммунитет (анисовое и пихтовое масло), в то время как другие — на Т-иммунитет (эвкалиптовое) и третьи — на Т- и В-системы иммунитета (РАВ шалфеиного, гвоздичного, жасминового, лаврового масел, эвгенола).

Представленные результаты экспериментальных исследований свидетельствуют о том, что РАВ, являясь эффективными природными регуляторами, могут блокировать взаимодействие канцерогенов с критическими мишенями клетки и препятствовать их иммунодепрессивному действию на Т- и В-системы иммунитета. Эти данные открывают широкие перспективы для их практического использования в качестве естественных антиканцерогенов при разработке новых методов снижения повышенного онкологического риска.

Во второй части работы мы исследовали рабочих резиновой промышленности. Результаты эпидемиологических исследований свидетельствуют о повышенном риске развития у них злокачественных новообразований легкого, желудка, толстой кишки, мочевого пузыря, кроветворной и лимфатической систем, поджелудочной, предстательной, щитовидной желез и т.д.

Показано, что маркерами повышенного онкологического риска у них могут быть КБА, содержащие экзогенные канцерогены — бензидин и 2-нафтиламин, являющиеся одними из производственных факторов повышенного риска в резиновой промышленности, а также эндогенный канцероген 3-ОАК, регистрируемый в сыворотке крови рабочих.

Для проведения AT была отобрана группа рабочих (50 человек) с повышенным онкологи&#x0447;еским риском, в сыворотке крови которых были обнаружены КБА, содержащие бензидин, 2-нафтиламин или 3-ОАК. AT проводилась путем ингаляционного введения рабочим РАВ шалфейного и гвоздичного ЭМ в концентрациях, близких к природным, в течение 15 дней.

До и после AT у рабочих определялись следующие показатели:

· канцероген-белковые аддукты трех типов — содержание бензидина, 2-нафтиламина или 3-ОАК;

· количественное содержание иммунных комплексов (ИК);

· количественное содержание иммуноглобулинов;

· иммуносупрессивное действие сыворотки крови рабочих.

КБА определяли методом встречной иммунодиффузии в агаре. Тест-системой для определения КБА служили иммуносыворотки кроликов, содержащие антитела против канцерогенов как гаптенов. Для иммунизации кроликов и получения иммуносывороток были использованы синтети