Укладка перевязочного и операционного белья в биксы для стерилизации

Для стерилизации и краткосрочного хранения перевязочного материала и операционного белья используют биксы Шимммельбуша, которые представляют собой металлическую коробку различной фор­мы и величины с крышкой и отверстиями по бокам.

Передвигая металлический обод вокруг бикса, отверстия пе­ред стерилизацией открывают, а сразу же после извлечения бикса из автоклава - закрывают.

Стерилизация перевязочного материала и операционного белья проводится в автоклаве паром под давлением.

Хранение стерилизованного материала в биксах допускается не более 72 часов, после чего он должен быть подвергнут повтор­ной стерилизации. Если бикс открывался для изъятия части мате­риала, то оставшийся в нем материал после завершения работы должен стерилизоваться повторно.

ВИДЫ УКЛАДОК МАТЕРИАЛА В БИКСЫ

- универсальная;

- видовая (специализированная);

- целенаправленная.

УНИВЕРСАЛЬНАЯ УКЛАДКА

В один бикс укладывается все необходимое для производства одной операции: халаты, простыни, салфетки, полотенца, шарики и пр. Для этого бикс делят на секторы, в каждом из которых нахо­дится лишь материал одного вида. Такой вид укладки обычно ис­пользуют в районных больницах для выполнения небольших типичных операций - аппендэктомия, грыжесчечение и пр..

ВИДОВАЯ (специализированная) УКЛАДКА

В бикс укладывается один вид материала: отдельный бикс с халатами, отдельный - с салфетками или шариками и т.д.. Этот вид укладки используют в операционных с большим объемом разно­образной хирургической деятельности.

ЦЕЛЕНАПРАВЛЕННАЯ УКЛАДКА

В один бикс укладывается разный материал, необходимый для выполнения конкретной операции - бикс с материалом для резекции желудка, бикс с материалом для пульмонэктомии и т.д.. Такую ук­ладку применяют для больших плановых операций.

ПРАВИЛА УКЛАДКИ МАТЕРИАЛА В БИКСЫ

- на дно бикса помещают развернутую простынь, концы кото­рой размещаются снаружи;

- перед закладкой халаты, простыни, полотенца тщательно осматривают, обнаруженные дырки штопают, оторванные пояса и за­вязки пришивают;

- простыни расстилают на столе и с узкого конца загибают на ширину 50 см, затем складывают вчетверо продольно (пополам дважды) и скручивают в рыхлый рулон, начиная с незагнутого кон­ца;

- халаты складывают продольно пополам рукавами и вязками внутрь, в карман кладут пояс или тесемку, выполняющую его функ­цию, затем борты халата продольно загибают и халат рыхло скру­чивают в виде рулона, начиная с подола;

- полотенца складывают пополам и скатывают в рулон;

- белье укладывают в биксы вертикально, что позволяет сра­зу найти то, что нужно и извлечь необходимый материал, не нару­шая порядок в биксе;

- материал укладывают рыхло (между рулонами должна свобод­но проходить ладонь), что обеспечивает свободное прохождение пара между бельем и внутрь рулона;

- верхние края рулонов белья не должны касаться крышки стерилизатора при ее закрытии;

- в центральную часть бикса помещают пробирку с серой или другой индикатор контроля стерильности;

- после наполнения бикса края выстилающей его простыни за­ворачивают один на другой поверх содержимого;

- в один из биксов сверху простыни закладывают халат, а на него несколько марлевых салфеток и полотенце, чтобы операцион­ная сестра вымыв и вытерев руки, могла надеть стерильный халат, не открывая остального материала в биксе;

- к крышке бикса привязывают клеенчатую этикетку, на кото­рой простым карандашом указывают какой материал и сколько его находится в биксе, а после стерилизации - дату стерилизации и подпись сестры, производившей стерилизацию;

- крышку бикса закрывают, укрепляют имеющимся крючком на цепочке и прочно фиксируют тесьмой, чтобы крышка случайно не открылась;

- проверяют, чтобы боковые отверстия бикса, через которые проникает пар, были открыты; сразу после извлечения бикса из автоклава эти отверстия закрывают.

ПРИЧИНЫ ПОЛУЧЕНИЯ ВЛАЖНОГО МАТЕРИАЛА ПРИ ЕГО АВТОКЛАВИРОВАНИИ

- избыток воды в автоклаве и забрасывание ее во внутреннюю камеру при бурном кипении;

- недостаточное отсасывание пара в аппаратах с вакуум-на­сосом;

- вынимание биксов из остывшего автоклава;

- оставление биксов после стерилизации в холодной сырой комнате;

- стерилизация слишком охлажденного материала, что приво­дит к конденсацию на нем пара по окончанию стерилизации.

 

ПЕРЕЛИВАНИЕ КРОВИ

Согласно ныне действующей "Инструкции по предупреждению не­совместимости при переливании крови", утвержденной Минздравом РФ от 09.01.1998 г., основным принципом предупреждения гемот­рансфузионных осложнений является обеспечение совместимости крови донора и реципиента. Прежде чем приступить к переливанию крови, врач должен предусмотреть, чтобы кровь донора была сов­местима с кровью реципиента.

Для того, чтобы недопустить переливания несовместимой кро­ви и следующих за этим клинических проявлений несовместимости, врач, переливающий кровь обязан:

- правильно выбрать кровь в отношении групп крови системы АВО;

- правильно выбрать кровь в отношении резус-принадлежности;

- проверить всю относящуюся к этому документацию;

- произвести контрольные исследования, включающие пробы на совместимость.

ВЫБОР КРОВИ, СОВМЕСТИМОЙ В ОТНОШЕНИИ ГРУПП КРОВИ АВО

Вопросы совместимости в отношении групп системы АВО решают­ся различно в зависимости от того, переливается ли цельная кровь или предполагается использовать эритроциты, освобожденные от плазмы (эритроцитная масса, эритроцитная взвесь, отмытые, размороженные эритроциты).

При переливании цельной крови она должна быть одноименной по группам АВО, т.е. реципиенту переливается кровь той же группы, к которой принадлежит он сам. В исключительных случаях у взрослых пациентов до­пускается переливание крови группы О(I) реципиентам другой группы, однако количество переливаемой крови в этих случаях должно быть не более 500 мл. Эти ограничения связаны с тем, что гемолиз эритроцитов реципиента возможен не только за счет ес­тественных антител (при массивной гемотрансфузии), но и иммун­ными антителами анти-А, реже анти-В, донорской крови. Эти анти­тела образуются у людей группы О(I) при иммунизации антигенами А и В (после переливания иногруппной крови, несовместимых по системе АВО беременностях, вакцинации и т.д.).

Детям необходимо переливать только одногруппную кровь.

ВЫБОР КРОВИ, СОВМЕСТИМОЙ В ОТНОШЕНИИ РЕЗУС-АНТИГЕНА D

В отношении резус-принадлежности переливаемая кровь должна быть одноименной. Это особенно важно для резус-отрицательных реципиентов, независимо от наличия и отсутствия у них резус-ан­тител, в последнем случае для предупреждения возможного их об­разования. При переливании эритроцитов, освобожденных от плаз­мы, резус-положительным новорожденным рекомендуется введение резус-отрицательных эритроцитов.

ПРОВЕРКА ДОКУМЕНТАЦИИ

Выбрав кровь для переливания больному, специалист обязан:

- сравнить запись определения группы крови реципиента по системе АВО (в истории болезни) и донора (на контейнере с кровью, приготовленной для переливания) и убедиться, что, сог­ласно этим записям, кровь донора совместима с кровью реципиента в отношении групп крови системы АВО;

- проверить запись о резус-принадлежности в истории болез­ни реципиента и на контейнере с кровью и убедиться, что кровь донора и реципиента совпадают по резус-принадлежености.

КОНТРОЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Независимо от проведенных ранее исследований и имеющихся записей непосредственно перед тем, как приступить к переливанию крови врач обязан:

- определить групповую принадлежность крови реципиента по системе АВО и сверить результат с записью в истории болезни и с обозначением группы крови донора на контейнере (флаконе);

- определить групповую принадлежность крови донора, взятой из флакона (из трубочки контейнера) и сверить результат с за­писью на нем;

- провести пробу на совместимость по группам крови АВО;

- провести пробу на совместимость по резус-антигену D; Все исследования проводятся в хорошо освещенном помещении при комнатной температуре.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ СИСТЕМЫ АВО

Возможны следующие способы определения группы крови:

1. Определение группы крови при помощи стандартных изоге­магглютинирующих сывороток.

2. Определение группы крови при помощи стандартных эритро­цитов.

3. Определение группы крови цоликлонами анти-А, анти-В, анти-АВ.

4. Определение группы крови перекрестным способом.

Группа крови больного, которому предполагается сделать пе­реливание крови, может быть определена специально обученной ме­дицинской сестрой. Однако чтение результатов пробы проводит врач и несет за это ответственность.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ СИСТЕМЫ АВО

стандартными гемагглютинирующими сыворотками

ОСНАЩЕНИЕ: стандартные изогемагглютинирующие сыворотки О (I), А (II), В (III) групп в двух различных сериях и один фла­кон стандартной сыворотки АВ (IV) группы (всего 7 флаконов), исследуемая кровь в пробирке с указанием на ней фамилии и ини­циалов лица, которому она принадлежит, глазные пипетки для каж­дого флакона сыворотки, длинная стеклянная пипетка с резиновой грушей, стеклянные палочки, чистая сухая тарелка или любая бе­лая планшетка со смачиваемой поверхностью, карандаш, вата, спирт, эмалированный лоток, изотонический раствор хлорида нат­рия, часы, резиновые перчатки (рис 2.1).

Рис. 2.1 Оснащение для определения группы крови системы АВО стандартными гемагглютинирующими сыворотками

1- стандартные гемагглютинирующие сыворотки, 2 - исследуемая кровь 3 - глазные пипетки, 4 - длинная стеклянная пипетка, 5 - стеклянные палочки, 6 - планшетка (тарелка), 7 - изотонический раствор НаС1, 8 -вата, 9 - спирт, 10 - карандаш, 11 - резиновые перчатки, 12 - эмали­рованный лоток, 13 - часы, 14 - лупа.

 

ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

- определяют соответствие гемагглютинирующих сывороток стандарту. Флаконы сыворотки должны быть закрыты рези­новыми пробками (высыхание их приводит к снижению активности), прозрачными, без осадка. Сыворотка О(I) группы бесцветная, А(II) - окрашена в синий цвет, В(III) - красный, АВ(IV) - желтый. На этикетке сыворотки А(II) группы имеются две полосы синего цвета, на этикетке сы­воротки В(III) группы - три полосы красного цвета, АВ(IV) группы - четыре полосы желтого цвета. Этикетка сыворотки О(I) группы полос не имеет. Титр антител сы­вороток 1:32. Используемые сыворотки должны принадле­жать различным сериям, соответствовать сроку годности, обозначенному на этикетке.

- обезжиривают тарелку спиртом, вытирают или высушивают;

- карандашом двумя перпендикулярно перекрещивающимися ли­ниями делят тарелку на четыре сектора для нанесения ге­магглютинирующих сывороток с обозначением каждого сек­тора по часовой стрелке О(I), А(II), В(III) и АВ (IV). По краю тарелки подписывают фамилию и инициалы челове­ка, которому определяется группа крови;

- на размеченную тарелку наносят стандартные сыворотки. Для этого глазной пипеткой набирают сыворотку О(I) группы и помещают две капли (0,1 мл) на сектор О(I) тарелки. Рядом, на этот же сектор, другой пипеткой на­носят такое же число капель сыворотки О(I) группы вто­рой серии. Для предотвращения сливания капель сывороток расстояние между ними должно составлять не менее 1,5-2 см. Аналогичным образом осуществляют нанесение стан­дартных сывороток А(II) и В(III) групп на соответствую­щие секторы тарелки. Сектор АВ(IV) остается свободным;

- в длинную стеклянную пипетку при помощи резиновой груши из пробирки в штативе набирают около 1 мл исследуемой крови и наносят по одной маленькой капле (в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки) на тарелку, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки. Чтобы по­лучить маленькую каплю исследуемой крови необходимо, набрав кровь в стеклянную пипетку, плотно прижимать ее кончик к тарелке и осторожно выдавливать резиновой гру­шей часть крови;

- капли тщательно перемешивают стеклянными палочками. Во избежание случайного смешивания капель на каждое смеши­вание крови и сыворотки применяют отдельную стеклянную палочку. Перемешивание капли крови с сывороткой осу­ществляется до тех пор, пока смесь не окрасится равно­мерно в красный цвет. Можно перемешивать кровь с сыво­роткой одной и той же палочкой, но в этом случае необ­ходимо после размешивания каждой капли промывать палоч­ку в стакане с водой и насухо ее вытирать;

- замечают время, наблюдают за ходом реакции не менее пя­ти минут. В течение первых трех минут осторожно покачи­вают тарелку, избегая сливания капель. Затем добавляют во все капли по одной капле изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при периодичес­ком покачивании тарелки до истечения пяти минут.

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

Реакция агглютинации в каждой капле может быть положи­тельной или отрицательной. При положительной реакции в смеси появляются видимые невооруженным глазом мелкие красные комочки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие ко­мочки постепенно сливаются в более крупные, а иногда в хлопья неправильной формы. При этом сыворотка полностью или почти пол­ностью обесцвечивается. При отрицательной реакции жидкость все время (5 минут) остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживается никаких агглютининов. Результаты реак­ций в каплях с сывороткой одной и той же группы должны совпа­дать. Возможны следующие комбинации положительных и отрицатель­ных реакций (рис 2.2):

- сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию в обеих сериях. Исследуемая кровь О(I) группы.

- реакция агглютинации отрицательная с сывороткой А(II) группы обеих серий и положительная с сывороткой О(I) и В(III) групп в обеих сериях. Исследуемая кровь А(II) группы.

- реакция агглютинации отрицательная с сывороткой В(III) группы в обеих сериях и положительная с сыворотками О(I) и А(II) групп в обеих сериях. Исследуемая кровь В(III) группы.

 

Рис.2.2. Определение группы крови системы АБО стандартными гемагглютинирующими сыворотками

а) группа крови 0(I) б) группа крови А(II)

в) группа крови В(III) г) группа крови АВ(IV)

- сыворотки О(I), А(II), В(III) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Исследуемая кровь должна принад­лежать АВ(IV) группе. Это следует подтвердить путем про­ведения реакции изогемагглютинации со стандартной сыво­роткой АВ(IV) группы. Для этого на оставшийся свободным сектор тарелки, обозначенный ранее карандашом АВ(IV), наносят каплю стандартной сыворотки АВ(IV) группы одной серии и смешивают ее с маленькой каплей исследуемой кро­ви. Через пять минут оценивают реакцию. Лишь отрицатель­ная реакция гемагглютинации свидетельствует о принадлеж­ности исследуемой крови к АВ(IV) группе.

ЗАПОМНИТЬ! При оценке результатов обращают внимание на сыворотку О(I) группы, которая является контрольной. Если в этой сыворотке наступила агглютинация, то она должна обязатель­но наступить или в сыворотке А(II) группы, или в сыворотке В(III) группы, или в той и другой вместе, так как в сыворотке О(I) группы имеются оба агглютинина a и b, а в остальных двух сыворотках эти же агглютинины представлены по отдельности.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ СИСТЕМЫ АВО ПО СТАНДАРТНЫМ ОТ­МЫТЫМ ЭРИТРОЦИТАМ С ИЗВЕСТНОЙ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТЬЮ

ОСНАЩЕНИЕ: стандартные эритроциты О(I), А(II), В(III) групп в одной серии во флаконах, глазные пипетки, сыворотка исследуемой крови в пробирке с подписанной фамилией и инициала­ми лица, которому она принадлежит, тарелка или планшетка со смачиваемой поверхностью, карандаш, длинная стеклянная пипетка с резиновой грушей, изотонический раствор хлорида натрия, часы, спирт, вата, резиновые перчатки.

ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

- определяют пригодность стандартных эритроцитов к работе. На этикетке флакончика со стандартными эритроцитами О(I) группы, кроме обозначения групповой принадлежности, по диагонали имеется одна черная полоса, на этикетке стан­дартных эритроцитов А(II) группы - две параллельные си­ние полосы, на этикетке В(III) группы - три параллельные красные полосы. На каждом флаконе указаны срок действия, титр антител (1:32). Внешне стандартные эритроциты представляют собой однородную темно - красную жидкость;

- карандашом делят тарелку (планшетку) на три сектора и обозначают их О, А, B. По краю тарелки подписывают фами­лию и инициалы человека, у которого определяется группа крови;

- в длинную стеклянную пипетку с помощью резиновой груши набирают около 1 мл сыворотки исследуемой крови и нано­сят по большой капле (0,1 мл) в центр каждого сектора тарелки;

- отдельными глазными пипетками наносят по одной маленькой капле стандартных эритроцитов 0(I), А (II), B(III) групп на пластинку, соответственно обозначенным секторам, каж­дую рядом с каплей сыворотки исследуемой крови;

- капли перемешивают отдельными стеклянными палочками;

- покачивают тарелку в течение 3 минут, затем добавляют по капле изотонического раствора хлорида натрия, перемеши­вают капли покачиванием тарелки и через 2 минуты после этого оценивают результат (рис.2.3).

Рис. 2.3. Определение группы крови системы АВО по стандартным эритроцитам с известной групповой принадлежностью

а) группа крови 0(1) б) группа крови А(II)

в) группа крови В(III) г) группа крови АВ(IV)

 

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

- реакция агглютинация отсутствует с эритроцитами О(I) группы и определяется с эритроцитами А(II) и В(III) групп. Исследуемая кровь О(I)группы;

- реакция агглютинация отсутствует с эритроцитами О(I) и A(II) групп и определяется с эритроцитами В(III) группы. Исследуемая кровь А(II) группы;

- реакция агглютинация отсутствует с эритроцитами О(I) и В(III) групп и определяется с эритроцитами А(II) группы. Исследуемая крови В(III) группы.

- реакция агглютинация отсутствует с эритроцитами О(I), A(II) и B(III) групп. Исследуемая кровь АВ(IV) группы.

ПЕРЕКРЕСТНЫЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ СИСТЕМЫ АВО ПРИ ПОМОЩИ СТАНДАРТНЫХ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИХ СЫВОРОТОК И СТАНДАРТНЫХ ЭРИТРОЦИТОВ

Определение группы крови перекрестным способом заключается в одновременном определении групповых агглютиногенов в эритро­цитах испытуемой крови при помощи стандартных гемагглютининую­щих сывороток и групповых агглютининов в сыворотке исследуемой крови при помощи стандартных эритроцитов.

ОСНАЩЕНИЕ: стандартные изогемагглютинирующие сыворотки О(I), А(II), В(III) групп двух серий каждой группы, АВ(IV) группы одной серии, стандартные эритроциты О(I), А(II), В(III) групп одной серии каждой группы, пробирка с центрифугированной исследуемой кровью с указанием фамилии и инициалами лица, кото­рому она принадлежит, физиологический раствор, планшетка со смачиваемой поверхностью, длинная стеклянная пипетка с резино­вой грушей, стеклянные палочки, карандаш, часы, эмалированный лоток, резиновые перчатки.

ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

- оценивают пригодность к работе стандартных гемагглютини­рующих сывороток и стандартных эритроцитов (рассмотрено выше);

- планшетку обезжиривают спиртом, вытирают и высушивают;

- карандашом проводят горизонтальную линию, разделяя план­шетку на две половины. В верхней половине планшетки сле­ва направо тремя вертикальными линиями обозначают секто­ры для стандартных изогемагглютинтрующих сывороток a b, b и a. В нижней половине планшетки таким же об­разом обозначают секторы для стандартных эритроцитов то­же слева направо О, А, В. По краю планшетки подписывают фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуют;

- глазной пипеткой набирают стандартную гемагглютинирующую сыворотку О(I) группы и помещают две капли в сектор a, b в верхней половине планшетки. Ниже, в этот же сектор, другой пипеткой наносят такое же число капель стандарт­ной гемаггютинирующей сыворотки О(I) группы второй се­рии. Отдельными пипетками точно также же в секторы ab, b и a наносят стандартные сыворотки А(II) и В(III) групп двух серий. Таким образом в верхней половине планшетки всего получится 6 капель, которые образуют два ряда ка­пель.

- в длинную стеклянную пипетку с помощью резиновой груши из пробирки с центрифугированной исследуемой кровью набира­ют 0,5 мл сыворотки (осторожно, чтобы не взболтать эрит­роциты) и наносят по одной капле (0.1 мл) в нижнюю поло­вину планшетки в каждый сектор (секторы О, А, В);

- набирают со дна этой же пробирки около 0,5 мл эритроцитов исследуемой крови и добавляют их по маленькой капле (0,01 мл) рядом с каждой каплей стандартных гемагглюти­нирующих сывороток, расположенных в верхней половине планшетки.

- отдельными пипетками рядом с каждой каплей исследуемой сыворотки, расположенных в нижней половине планшетки, размещают по маленькой капле (0,01 мл) стандартных эрит­роцитов О(I), А(II) и В(III) групп соответственно секто­рам О, А и В;

- отдельными стеклянными палочками перемешивают каждую из девяти капель сывороток и крови. Планшетку периодически покачивают в течение трех минут, затем во все капли до­бавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, продолжают покачивать планшетку еще две минуты и оценивают результат (рис.2.4).

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

Оценка результата осуществляется раздельно по данным реак­ции гемагглютинации стандартных сывороток с эритроцитами иссле­дуемой крови(верхняя половина планшетки) и реакции гемагглютинации исследуемой сыворотки со стандартными эритроцитами (ниж­няя половина планшетки). При совпадении полученных результатов устанавливается соответствующая группа крови.

 

Рис. 2.4 Перекрестный способ определения группы крови системы АВО

а) группа крови 0(I) б) группа крови А(II)

в) группа крови В(III) г) группа крови АВ(IV)

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ СИСТЕМЫ АВО

ЦОЛИКЛОНАМИ АНТИ-А, АНТИ-В и АНТИ-АВ

ОСНАЩЕНИЕ: по одной серии Цоликлонов анти-А, анти-В и ан­ти-АВ во флаконах со своими маркированными "анти-А", "анти-В" и "анти-АВ" пипетками, исследуемая кровь в пробирке с обозначени­ем фамилии и инициалов лица, которому она принадлежит, тарелка или планшетка со смачиваемой поверхностью, изотонический раст­вор хлорида натрия, спирт, вата, карандаш, часы, резиновые пер­чатки.

ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

- определяют пригодность Цоликлонов анти-А, анти-В, анти -АВ к работе. Раствор цоликлона анти-А должен иметь крас­ный цвет, анти-В - синий, цоликлон анти-АВ - бесцветный. Флаконы цоликлонов должны быть закрыты резиновыми проб­ками, соответствовать сроку годности.

- Карандашом делят планшетку на три сектора с обозначением их "анти-А", "анти-В" и "анти-АВ". По краю тарелки под­писывают фамилию и инициалы лица, которому определяется группа крови;

- пипеткой "анти-А" наносят одну большую каплю Цоликлона анти-А на часть планшетки, обозначенной "анти-А". Пи­петкой "анти-В"- такую же каплю Цоликлона анти-В на второй часть тарелки, пипеткой "анти-АВ" - на часть та­релки, обозначенной "анти-АВ";

- в длинную стеклянную пипетку набирают исследуемую кровь и наносят по одной маленькой капле (1:10)рядом с каплями Цо­ликлонов анти-А, анти-В и анти-АВ;

- капли тщательно перемешивают отдельными стеклянными па­лочками;

- результат реакции оценивают через 3 минуты (рис.2.5).

Рис. 2.5 Определение группы крови системы АВО цоликлонами анти-А, анти-В, антн АВ

а) группа крови 0(I) б) группа крови А(II)

в) группа крови В(III) г) группа крови АВ(IV)

 

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

- агглютинации нет ни с одним из трех цоликлонов. Исследу­емая кровь О(I) группы;

- агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А и анти-АВ. Исследуемая кровь А(II) группы;

- агглютинация определяется с цоликлонами анти-В и ан­ти-АВ. Исследуемая кровь В(III) группы;

- агглютинация наблюдается со всеми тремя цоликлонами. Исследуемая кровь АВ(IV) группы.

ЗАПОМНИТЬ! В случае положительной реакции агглютинации эритроцитов со всеми тремя цоликлонами, т.е. установления АВ (IV) группы, с целью исключения спонтанной неспецифической агг­лютинации необходимо провести дополнительное контрольное иссле­дование данного образца крови с изотоническим раствором хлорис­того натрия. Для этого на отдельной тарелке смешивают одну большую каплю изотонического раствора хлорида натрия с малень­кой каплей исследуемой крови. При отсутствии агглютинации в этой контрольной капле исследуемая кровь принадлежит АВ(IV) группе. При положительной реакции следует повторить определение группы крови с применением отмытых эрироцитов данного образца крови.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ФАКТОРА

Определение резус принадлежности заключается в выявлении в эритроцитах людей антигена D системы резус.

При каждом исследовании необходимо для проверки специфич­ности и активности сыворотки антирезус ставить контроль. Для контроля применяются стандартные резус-положительные эритроциты группы О(I) или той же группы, что и исследуемая кровь, и стан­дартные резус-отрицательные эритроциты.

Применяют следующие способы определения резус-принадлеж­ности:

1. Определение резус-принадлежности при помощи стандартно­го универсального реагента (в пробирках без подогрева);

2. Определение резус-принадлежности реакцией конглютинации с применением желатина в пробирке с подогревом 46-48 С;

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ПРИ ПОМОЩИ СТАНДАРТНОГО УНИВЕРСАЛЬНОГО РЕАГЕНТА

(в пробирках без подогрева)

ОСНАЩЕНИЕ: универсальный реагент антирезус - анти-D во флаконе, исследуемая кровь без стабилизатора в пробирке с под­писанными фамилией, инициалами и группой крови лица, которому она принадлежит, 33% полиглюкин, стандартные Rh+ и Rh- эритро­циты для контроля, лупа с двух-четырехкратным увеличением, шта­тив для пробирок, длинная стеклянная пипетка с резиновой гру­шей, чистые пробирки вместимостью 10 мл, карандаш, часы, изото­нический раствор хлорида натрия во флаконе, резиновые перчатки.

ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

- на двух стеклянных пробирках подписывают фамилию, иници­алы лица, кровь которого исследуется. Пробирка n 1 уста­навливается в первый ряд штатива, пробирка под n 2 - во второй ряд (контрольный ряд);

- подписывают еще две пробирки, одну - "стандартные Rh + эритроциты", вторую - "стандартные Rh - эритроциты" и устанавливают их в 1-ый ряд штатива;

- в пробирки n 1 и n 2 при помощи длинной стеклянной пи­петки на самое дно помещают по одной капле (0,05 мл) исследуемых эритроцитов;

- в пробирки "стандартные Rh+ эритроциты" и "стандартные Rh - эритроциты" добавляют по одной капле соответствую­щих эритроцитов;

- на дно всех пробирок первого ряда длинной стеклянной пи­петкой вводят по две капли (0,1 мл) стандартного универ­сального реагента антирезус;

- на дно пробирки второго ряда добавляют две капли (0,1 мл) изотонического раствора NaCl и 1 каплю (0,05) 33% раствора полиглюкина;

- содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, а затем медленно поворачивают по оси, наклоняя почти до горизонтального положения так, чтобы содержимое растекалось по стенкам;

- через три минуты во все пробирки добавляют 2-3 мл физиологического раствора, перемешивают содержимое двух-трехк­ратным перевертыванием пробирок не встряхивая и оценива­ют результат (рис.2.6).

Рис. 2.6 Определение резус-принадлежности при помощи стандартного универсального реагента (в пробирках без подогрева)

а) резус-положительная кровь б) резус-отрицательная кровь

 

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ:

Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или че­рез лупу. Оценка резус-принадлежности исследуемых эритроцитов определяется результатом реакции агглютинации в пробирке n 1.

Кровь считается резус положительной при появлении агглюти­натов и отрицательной при их отсутствии.

Окончательные результаты учитывают как истинные только после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфич­ность и активность сыворотки антирезус, т.е. при отсутствии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами и наличии агглютинации со стандартными резус-положительными эритроцитами одноименной группы или группы 0(I). В пробирке второго ряда (контрольный ряд) агглютинации быть не должно. На­личие агглюитинации в пробирке контрольного ряда свидетельству­ет о неспецифичности реакции. При этих условиях положительный результат с сывороткой антирезус (в пробирке n 1) не может быть учтен как истинный. В таких случаях рекомендуется отмыть иссле­дуемые эритроциты теплым изотоническим раствором NaCl для элюи­рования с них аутоантител и повторить исследование. В сомни­тельных случаях для определения резус-принадлежности следует применить метод агглютинации в солевой среде, используя сыворотку с полными антителами.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ РЕАКЦИЕЙ КОНГЛЮТИНАЦИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЖЕЛАТИНА В ПРОБИРКЕ С ПОДОГРЕВОМ

ОСНАЩЕНИЕ: пробирка с исследуемой кровью в количестве 5-8 мл без стабилизатора, стандартная сыворотка антирезус анти-D, стандартные эритроциты Rh+ и Rh- для контроля, стеклянные про­бирки емкостью 10 мл, штатив для пробирок, длинная стеклянная пипетка, водяная баня 46-48 С или суховоздушный термостат 46-48 С, 10% раствор желатина во флаконе, карандаш, часы, резиновые перчатки.

ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

- на двух стеклянных пробирках одинаково подписывают фами­лию, инициалы лица, кровь которого исследуется. Пробирки нумеруют и устанавливают на штативе. Пробирка n 1 уста­навливается в первом ряду штатива, пробирка под n 2 - во второй ряд (контрольный ряд);

- подписывают еще две пробирки, одну - "стандартные Rh+ эритроциты", вторую - "стандартные Rh- эритроциты" и ус­танавливают их в 1-ый ряд штатива;

- в пробирки n 1 и n 2 при помощи длинной стеклянной пи­петки вводят по одной капле (0,05 мл) исследуемых эрит­роцитов.

- длинной стеклянной пипеткой помещают по одной капле (0,05 мл) стандартных Rh+ и Rh-эритроцитов на дно проби­рок соответственно обозначениям "стандартные Rh+ эритро­циты" и "стандартные Rh- эритроциты";

- на дно всех пробирок первого ряда длинной стеклянной пи­петкой добавляют по одной капле (0,05 мл) сыворотки ан­тирезус;

- На дно всех пробирок (в два ряда) длинной стеклянной пи­петкой добавляют по две капли (0,1 мл) 10% раствора же­латина, предварительно подогретого до разжижения;

- содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и штатив с пробирками помещают в водяную баню при 46-48 С на 15 минут или в суховоздушный термостат на 25-30 минут.

- по истечению указанного времени штатив с пробирками изв­лекается из термостата, в них доливают 5-8 мл изотони­ческого раствора NaCl и перемешивают содержимое путем одно-двухкратного перевертывания пробирок.

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или че­рез лупу. Оценка резус-принадлежности определяется реакцией в пробирке n 1.

Кровь считается резус положительной при появлении агглюти­натов и отрицательной при их отсутствии.

Однако окончательные результаты учитывают как истинные только после проверки контрольных образцов, подтверждающих спе­цифичность и активность сыворотки антирезус, т.е. при отсутс­твии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритро­цитами и наличии агглютинации со стандартными резус-положитель­ными эритроцитами одноименной группы или группы 0(I). В пробир­ке второго ряда (контрольный ряд) агглютинации быть не должно. Наличие агглюитинации в пробирке контрольного ряда (положитель­ная прямая желатиновая проба) говорит о неспецифичности реак­ции. При этих условиях положительный результат с сывороткой ан­тирезус (в пробирке n 1) не может быть учтен как истинный. В таких случаях рекомендуется отмыть исследуемые эритроциты теп­лым изотоническим раствором NaCl для элюирования с них аутоан­тител и повторить исследование. При сомнительном результате для определения резус-принадлежности следует применить метод агглю­тинации в солевой среде с использованием сывороток антирезус, содержащих полные антитела.

ПРОВЕДЕНИЕ ПРОБ НА СОВМЕСТИМОСТЬ

Пробы на совместимость по группам крови АВО и резус-анти­гену D проводятся отдельно и не могут заменить друг друга, так как антитела разного характера требуют разных методов для свое­го выявления. Если больному переливается кровь из нескольких флаконов (контейнеров), пробы на совместимость должны быть сде­ланы с кровью из каждого флакона (контейнера), даже если на них обозначено, что кровь получена от одного и того же донора. Сы­воротка больного должна быть свежей, полученной в тот же день, когда делается переливание крови, или накануне при условии сох­ранения ее при температуре 4-8 С.

ПРОБА НА СОВМЕСТИМОСТЬ ПО ГРУППАМ КРОВИ СИСТЕМЫ АВО

ОСНАЩЕНИЕ: сыворотка крови реципиента в пробирке с подпи­санной фамилией, кровь (эритроцитная масса, взвесь) донора в пробирке, взятой из флакона (пластикового мешка), с указанием его фамилии и инициалов, тарелка или планшетка со смачиваемой поверхностью, длинная стеклянная пипетка с резиновой грушей, стеклянная палочка, карандаш, часы, вата, спирт, резиновые пер­чатки.

ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ

- определяют пригодность для переливания гемотрансфузион­ной среды. Путем визуального контроля контейнера с консервиро­ванной кровью убеждаются в герметичности упаковки, правильности паспортизации (наличие номера, дата заготовки, обозначение группы и резус-принадлежности, наименование консерванта, фами­лия, имя и отчество донора, наименование учреждения-заготовите­ля, указание на исследование АТ к ВИЧ и поверхностного антигена гепатита В, наличие подписи врача). Плазма консервированной крови должна быть без механических загрязнений, хлопьев, нитей фибрина, выраженного (красное окрашивание плазменного слоя) ге­молиза. Оценивают консервированную кровь при достаточном осве­щении на месте хранения, так как малейшее взбалтывание крови может привести к ошибочному заключению о гемолизе из-за окраши­вания плазмы в розовый цвет от смешивания с эритроцитами. Во взболтанной крови также легко не заметить пленок и сгустков. Кровь с тусклым цветом плазмы с серо-буроватым оттенком со взвешенными частицами в виде хлопьев следует рассматривать как бактериально-загрязненную. Переливанию она не подлежит. Глобулярная масса представлена равномерным слоем, без сгустков. Всегда должна быть четкая граница между глобулярной массой и плазмой. Оценка эритроцитной массы осуществляется по этим же критериям. Различие лишь в объеме плазмы. В эритроцит­ной массе объем плазмы незначительный.

- по краю тарелки подписывают фамилии реципиента и до­нора;

- длинной стеклянной пипеткой на центр тарелки помещают пять капель сыворотки больного и одну каплю крови донора;

- капли перемешивают стеклянной палочкой и оценивают ре­зультат реакции через пять минут (рис. 2.7).

Рис. 2.7 Проба на совместимость по группам крови системы АВО

а) кровь несовместима б) кровь совместима

 

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

- отрицательная реакция агглютинации (смесь крови донора и сыворотки больного остается гомогенной) - кровь совмес­тима.

- положительная реакция агглютинации (смесь крови донора и сыворотки больного представляет собой взвесь мелких или крупных комочков на фоне почти полностью обесцвеченной сыворотки) - кровь не совместима. Переливание крови до­нора недопустимо.

Следует помнить, что при некоторых патологических состоя­ниях, например, при ожогах, циррозе печени, при септико-пиеми­ческих состояниях, сыворотка больных приобретает свойство вы­зывать не