Посів і пересів мікроорганізмів у рідке середовище.

У ліву руку беруть дві пробірки - одну зі стерильним середовищем, іншу культурою і тримають у похилому положенні. У правій руці великим і вказівним пальцем тримають бактеріальну петлю і стерилізують її у полум'ї спиртівки.

Виймають ватяні пробки з обох пробірок, притискають їх до долоні мізинця і безіменним пальцями правої руки й обпалюють краї пробірок, стежачи за там, пробки не торкалися сторонніх предметів.

Петлю вводять у пробірку з мікробною культурою, що пересівається.

 

Обережно, не торкаючись стінок, відбирають краплю рідкої культури. Якщо роблять пересівання з косого шару агару, то для охолодження петлі спочатку доторкнутися до поверхні агару, де не було культури, після чого беруть найбільшу кількість мікробної маси зі скошеного щільного середовища.

Вводять петлю з матеріалом у пробірку зі стерильним середовищем, намагаючись не зачіпати стінок пробірки. При посіві на скошені живого середовища петлю з клітками мікроорганізмів опускають майже на дно, накопичується невелика кількість конденсаційної води. Злегка торкаючись поверхні щільного середовища, але не розпушуючи його, проводять від дна на штрих.

Петлю виймають, обпалюють краї пробірки і внутрішні кінці пробірок, після
чого пробірки закривають.

Петлю знову прожарюють у полум'ї спиртівки.

На пробірці роблять напис: назва культури і дату посіву. Засіяні пробірки
поміщають у термостат для вирощування при постійній температурі. Посів і
пересіви мікроорганізмів краще проводити в боксі.

 

Завдання 2.

Посіви на тверді живильні середовища.

Посіви петлею на скошеному агарі проводять:

зигзагоподібним штрихом, вільно сковзаючи петлею по поверхні твердого середовища від одного краю пробірки до іншого;

прямою рискою, проводячи петлею пряму лінію знизу нагору посередині поверхні живильного середовища;

суцільним посівом, розтираючи матеріал обережними круговими рухами по всій поверхні середовища.

Посів у чашки Петрі проводять у такий спосіб: тверде живильне середовище 5 пробірках і колбах розплавляють на киплячій водяній лазні, прохолоджують до 48-50°С і, дотримуючи правила стерильності, розливають рівним шаром товщиною 3-5 мм у стерильні чашки. Посів роблять скляним шпателем Дригальского. Посів у пробірку з твердим живильним середовищем - уколом.

При посіві глибинним методом у чашку Петрі вносять 1см³ досліджуваного матеріалу, доливають 15см³ розплавленого і охолодженого до 45°С живильного середовища, негайно кришку закривають і легкими круговими рухами розподіляють масу. Залишають чашку Петрі до застигання, а потім підписують і поміщають у термостат для культивування мікроорганізмів.

Усі посіви проводити з дотриманням правил асептики.

 

 

Контрольні питання:

Назвіть способи посіву і пересіву мікроорганізмів на тверді живильні середовища.

Навіщо необхідно проводити пересівання мікроорганізмів?

Що ми називаємо посівом мікроорганізмів і з якою метою його проводять?

Чому необхідно "дотримувати стерильність при посіві і пересіві мікроорганізмів?

 

Використана література:

А.Ю. Жвирблянська, O.A. Бакушинська. Мікробіологія в харчовій промисловості, -М.: Харчова промисловість, 1975р.

А.Я. Панкратов, B.C. Григоров, Р.Л. Кащенко Керівництво до лабораторних занять по мікробіології, - М.: Харчова промисловість, 1975р.

Слюсаренко Т.П. «Лабораторний практикум по мікробіології харчових виробництв» - М: Легка і харчова промисловість, 1984р.

 

ЛАБОРАТОРНА РОБОТА №5

 

Тема: Вивчення впливу фізичних, хімічних і біологічних факторів на життєдіяльність мікроорганізмів.

Ціль: Вивчити вплив температури на життєдіяльність термоустойчивість мікроорганізмів. Вивчити вплив рН середовища (кислої і лужний) на мікроорганізми, а також дію антибіотиків на їхню життєдіяльність.

Матеріали й устаткування: тверде живильне середовище, чашки Петрі, термометр, водяна лазня, електроплитка, термостат, антибіотик, оцтова кислота, сода, культура мікроорганізмів.

 

Методичні вказівки

Життєдіяльність мікроорганізмів тісно зв'язана з їхнім навколишнім середовищем. Чим сприятливіші умови середовища перебування для даного мікроорганізму, тим інтенсивніше протікає його розвиток. Але дія багатьох факторів гальмує чи убиває життєдіяльність мікроорганізмів. На мікроорганізми можуть впливати багато факторів: температура, вологість, осмотичний тиск, рН середовища, різні види променистої енергії та ін..

Крім цього в природі мікроорганізми зіштовхуються з дією різноманітних біотичних (біологічних) факторів. Це форми впливу мікроорганізмів один на одного, на рослини, тварин і людину. При симбіозі (спільному існуванні) мікроорганізми роблять або сприяють розвитку один одного, або пагубно впливають на розвиток (антибіотик).

Антибіоз зв'язаний зі здатністю одного виду мікроорганізмів виділяти в навколишнє середовище специфічні речовини, що гнітять життєдіяльність інших, - антибіотики. Вони володіють широким спектром дії для ряду мікроорганізмів, або виборчим до одного з них.

Продуцентами антибіотиків можуть бути міцеліальні гриби (пеніциллінові, аспергиллові), бактерії і найчастіше актиноміцети. Їх використовують як лікувальні препарати, а також як добавки в корм тварин, птахів.

 

План роботи

Вивчення впливу температури на життєдіяльність і термоустойчивість мікроорганізмів.

Вивчення впливу рН середовища.

Вивчення впливу дії антибіотика на ріст і розмноження мікроорганізмів.

 

Хід роботи

 

Завдання 1.

Вивчення впливу температури на життєдіяльність і термоустойчивість мікроорганізмів.

Порядок проведення роботи. Приготувати дві стерильні чашки Петрі з м'ясопептонним чи сусловим агаром. Зовнішню сторону дна чашки розділити на три сектори і позначити «0», «10», «30». 0,1 мл двох культур внести в пробірку з 10 мл стерильної води. Добре перемішати й одну петлю приготовленого розведення висіяти в чашку Петрі в центрі сектора «0».

Пробірку з підготовленою культурою помістити у водяну лазню при температурі 60-80°С на 10 хвилин. Після прогріву з пробірки зробити висів однією петлею в центрі сектора с позначенням «10».

 

Пробірку поставити у водяну лазню ще на 20 хвилин і знову зробити висів у центрі сектора «10». Чашки Петрі поставити в термостат при 37°С. Через 48 годин переглянути культури і зробити висновок про термоустойчивість по характеру і величині вирослого посіву.

Завдання 2.

Вивчення впливу рН середовища на життєдіяльність мікроорганізмів.

Беремо 1%, 5% і 9% розчину оцтової кислоти. У три чашки Петрі вносимо по 1см³ дріжджовій суспензії, по 1см³ розчину оцтової кислоти відповідно різної концентрації і по 15см³ охолодженого до 40°С щільного живильного середовища. Термостатуємо при температурі 37°С 48 годин. Робимо висновок про вплив кислотності середовища на життєдіяльність мікроорганізмів.

Дія вивчення впливу лугу на ріст і розмноження мікроорганізмів використовуємо 1%, 5% і 10% розчину харчової соди. Усі посіви проводимо аналогічно з використанням оцтової кислоти. Робимо висновок про вплив лугу на мікроорганізми.

Завдання 3.

Вивчення вплив антибіотиків на життєдіяльність мікроорганізмів.

Беремо 1см³ розчину ґрунту і 1см³ розчину дріжджової суспензії І ПО ІСМ"' антибіотика широкого спектру дії і робимо посів глибинним методом у двох чашках Петрі. Термостатуємо 48 годин при температурі 37°С. Робимо висновок про дію антибіотика на ріст бактерій ґрунту і ріст дріжджових кліток. Оформляємо протокол.

1.   2. 3. 4.

 

Контрольні запитання:

 

Перелічіть фізико-хімічні фактори, що діють на життєдіяльність мікроорганізмів.

Перелічіть дію біологічних факторів на мікроорганізми.

Назвіть продуценти антибіотиків.

Які мікроорганізми називаються термофільними?

 

 

Використана література:

А.Ю. Жвирблянська, O.A. Бакушинська. Мікробіологія в харчовій промисловості, -М.: Харчова промисловість, 1975р.

А.Я. Панкратов, B.C. Григоров, Р.Л. Кащенко Керівництво до лабораторних занять по мікробіології, - М.: Харчова промисловість, 1975р.

Слюсаренко Т.П. «Лабораторний практикум по мікробіології харчових виробництв» - М: Легка і харчова промисловість, 1984р

 

 

ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 6

Тема: Мікрофлора і методи санітарно-мікробїологічного дослідження повітря,

ґрунту.

Мета: вивчити методику визначення забрудненості зовнішнього середовища, визначити мікрофлору повітря та ґрунту.

Матеріали і обладнання: чашки Петрі, живильне середовище МПА, термостат, предметні та покрівні скельця, бактеріологічна петля, зразки ґрунту.

 

План роботи:

Вивчення мікрофлори повітря седиментаційним методом.

Визначення мікрофлори ґрунту.

 

Методичні вказівки.

Повітря для життя мікроорганізмів є несприятливим середовищем, тому що воно не містить в достатній кількості споживчих речовин, містить мало вологи. На мікробні клітини нищівно діє сонячна радіація, висихання, а також впливають інші фактори.

Наявність мікроорганізмів у повітрі встановив Л. Пастер. Для більшості мікроорганізмів передання у повітрі є тимчасовим.

Головним джерелом мікрофлори повітря є грунт. З частинками пилу мікроорганізми підіймаються в повітря і розповсюджуються вітром у вертикальному, та горизонтальному напрямках. Мікроби потрапляють у повітря також з різноманітних предметів, рослин, із організму тварин і людей (з поверхні тіла, фекалій), із відходів, відмерлих рослин, тварин та інше.

Кількісний і якісний склад мікрофлори повітря визначається ступенем забруднення і видом (складом) мікроорганізмів, її джерелом. Специфічної мікрофлори, яка зустрічається виключно тільки в повітрі, не виявлено.

Найбільша кількість мікробів знаходиться в повітрі закритих приміщень, з недостатньою вентиляцією і освітленням.

Рослини сприяють очищенню повітря від мікроорганізмів, оскільки виділяють антимікробні речовини - фітонциди.

Мікроорганізми можуть знаходитися у повітрі у вигляді вільно літаючих., окремих клітин і вібріонів (віруси, фаги), або в таких трьох фазах бактеріального аерозолю (фізичної системи з твердих або рідких крихітних частинок, завислих у газі): пилова, краплинна, краплино ядерна.

Якісний склад мікрофлори повітря відрізняється більшою різноманітністю. Більшість з них - сапрофіти, які переважають в ґрунті. Але в повітрі лікарень, поліклінік, аптек є багато і хвороботворних мікроорганізмів.

В повітрі найчастіше зустрічаються споротвірні види бактерій і грибів, в зв'язку більш високою кількістю спор до дії ультрафіолетових променів і висихання.

В повітрі багато пігментних форм, які утворюють колонії червоного, рожевого, жовтого кольору в зв'язку з наявністю в їхніх клітинах каротиноїдів. Каротиноїди захищають мікробні клітини від фотоокиснення. В повітрі приміщень зустрічається багато коків, які виділяють люди з органів дихання.

Серед мікрофлори повітря часто зустрічається спори бацил і клострицій дріжджів, мікроміцетів і актиноміцетів, із не споротворних - найчастіше стафилококи, стрептококи, мікрококи і сарцини, палички - групи кишкової палички і багато інших.

Повітряне середовище служить джерелом забрудникі з багатьох інфекційних захворювань, найчастіше - органів дихання. Через повітря передаються туберкульозні палички, забрудники пневмонії (запалення легенів), ангіни, грану скарлатини, кору, дифтерії, легеневих форм чуми, сибірської язви і сапу, а також натуральної та вітряної віспи і т.д. за добу через дихальні шляхи проходить 15- 17 тис. літрів повітря.

Чистота повітря відіграє велику роль в ряді галузей промисловості, зокрема в харчовій. Мікрофлора повітря обсіває сировину, продукцію та технологічні лінії негерметизовану готову продукцію.

В природі без участі людини проходять процеси самоочищення повітря. Вагомий фактором самоочищення є сонячна радіація, істотний вплив фітонцидів рослин.

На харчових підприємствах передбачені такі заходи профілактики забруднення повітря. У виробничих приміщеннях - фарбування чи покриття облицьовальною плиткою стін і стелі, тверде покриття підлоги, ретельне вологе прибирання (сухе заборонено), при тримання в належному санітарному стані обладнання, ефективне вентиляція.

Хороші результати дає опромінювання ультрафіолетовими промінням за допомогою ламп БУВ. Все ж при цьому в приміщенні не повинні знаходитись люди, тому що УФ промені викликають опіки шкіри, очей.

 

Мікрофлора ґрунту.

Грунт є сприятливим середовищем для збереження і розвитку мікроорганізмів. Його мікрофлора численна і різноманітна. В грунті можна знайти представників всіх класів мікроорганізмів (бактерії, актиноміцети, мікроскопічні гриби, водорості найпростіші, мікро плазми, рикетсії, віруси). Ґрунт є джерелом мікроорганізмів для всього оточуючого середовища.

У ґрунті знаходяться усі органічні і мінеральні речовини, необхідні для розвитку мікроорганізмів. Щороку в масу ґрунту надходить значна кількість мертвих рослин.

Основна маса органічних сполук, які потрапляють в ґрунт, піддаються там мінералізації під впливом ферментів мікроорганізмів, але деяка частина не

 

розпадається до кінцевих продуктів мінеральних речовин, а перетворюється і складні «перегнійні» сполуки, які називають «гумусом».

Гумус складає 85... 90% всієї маси органічних речовин ґрунту. Вміст гумусу визначає консистенцію і родючість ґрунту.

Для розвитку мікроорганізмів істотне значення має активна кислотність ґрунту /рН/ і осмотична активність, тобто концентрація речовин, розчинених в ґрунтовії рідкій фазі. Від величини /рН/ ґрунту(значення /рН/ може коливатися від 3 до 4 і дуже кислотних ґрунтах, до 8 - 9 і вище в сильно лужних) залежить характер мікрофлори.

В більшості видів ґрунту осмотичний тиск сприяє розвитку мікроорганізмів. Винятком є солончакові ґрунти, де можуть розвиватися тільки осмофільні і осмотелерантні мікроорганізми.

Таким чином в ґрунті є досить сприятливі умови для проявлень: мікроорганізмами фізіологічних функцій живлення, дихання, розмноження.

Більшість мікроорганізмів в ґрунті розташовані в шарах, що знаходяться на відстані 10 - 20см від поверхні. Це пов'язано з тим, що в поверхневих шарах ґрунту

Мікроорганізми гинуть під дією сонячних променів (ультрафіолету), під впливом всихання.

Ґрунт є природним фільтром для ґрунтових вод. Кількість мікроорганізм в 1 – ґрунту може коливатись від сотень до мільярдів. До 1 % органічних речовин ґрунту становлять органічні речовини мікроорганізмів. Мікробна маса на 1 гa ґрунту може становити до 12 т.

До власно ґрунтової мікрофлори відносяться актиноміцети, сіркобактерії, залізобактерії, водень окислюючи бактерії, азот фіксуючі мікроорганізми, клітковину, пектин розкладаючі мікроорганізми та інші. Це аеробні мікроорганізми родів Nitresomonas, Nitrosocystis, Nitrosobacter.

Здатність до нітрифікації в ґрунті, в основному викликають мікроорганізми роду Clpasîlurianum.

Розрізняють азот фіксуючі мікроорганізми, які розвиваються на корінні ряду рослин, і, зокрема, бобових - бульбочкові мікроорганізми роду Rhizobium..

В ґрунтах, які містять свіжі органічні забруднення, переважають не спороносні грам-негативні гнильні бактерії роду Pseudomonas.

Істотним є питання про місце існування в ґрунті анаеробних мікроорганізмів. Їх чисельність звичайно не велика, не більше 10 % бактерій ґрунту належать до строгих і факультативних і анаеробів. Це анаеробні гнильні мікроорганізми клостридії (Cl partrificum, Cl sporogenes, Cl septicum).

Основну масу сапрофітних ґрунтових мікроорганізмів складароть гриби і дріжджі. Переважають гриби родів Penicillium і Mucor, Aspergillus, Rhizopus.

Екологія недосконалих грибів мало вивчена. Але все ж таки встановлено, що гриби роду Fusarium переважають в чорноземі.

В ґрунті дуже багато не досконалі -- грибів з темнопігментоватим міцелієм - p.p. Cladosporium, Altenaria, Trichoderma.

Вивчення екології дріжджових грибів показало їх взаємозв'язок з типами ґрунту. Дріжджі складають переважну мікрофлору вологих кислих грибів, багатих рослинними рештками. Тут в основному можна знайти роди Torulopsis і Candidu,

В чорноземах постійно знаходять дріжджі роду Zypomuces і рожеві дріжджі роду Rhodotorula.

Хід роботи.