Энтеровирусные инфекции. Лабораторная диагностика гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызываемых вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами

Занятие № 2.2.2

Энтеровирусные инфекции. Лабораторная диагностика гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызываемых вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить основные группы энтеровирусов; биологические свойства возбудителей гепатитов А, Е, полиомиелита, вирусов Коксаки, ECHO, ротавирусов; принципы вирусологической диагностики энтеровирусных инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

2. Клинику, патогенез, эпидемиологию, восприимчивость, иммунитет, механизм передачи возбудителей при энтеровирусных инфекциях.

3. Принципы лабораторной диагностики гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

4. Основы профилактики гепатитов А, Е, полиомиелита,

инфекций вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

5. Препараты для диагностики, лечения и профилактики энтеровирусных

инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· составлять алгоритм вирусологического обследования пациента с
энтеровирусной инфекцией;

· интерпретировать результаты вирусологических исследований с целью
диагностики энтеровирусных инфекций;

· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

• алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

 

• методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей энтеровирусных инфекций.

 

Работа № 1. Строение вирусов полиомиелита, гепатитов А, Е

Цель: Изучить морфологию вирусов полиомиелита, гепатитов А, Е

Самостоятельная работа: Зарисовать строение возбудителей. Сделать вывод.

L neMPLQ703FL9tZ+shqpTB/zZla+JXW/v4ttcfk7vL1pfX81PjyAizfFshj98RoeCmSo/ORNEryFd K+4SeVApCDY8qCUfKg3qfpWCLHL5v0LxCwAA//8DAFBLAQItABQABgAIAAAAIQC2gziS/gAAAOEB AAATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAABbQ29udGVudF9UeXBlc10ueG1sUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhADj9 If/WAAAAlAEAAAsAAAAAAAAAAAAAAAAALwEAAF9yZWxzLy5yZWxzUEsBAi0AFAAGAAgAAAAhABro f1JKAgAAUgQAAA4AAAAAAAAAAAAAAAAALgIAAGRycy9lMm9Eb2MueG1sUEsBAi0AFAAGAAgAAAAh ALsKRAjfAAAACgEAAA8AAAAAAAAAAAAAAAAApAQAAGRycy9kb3ducmV2LnhtbFBLBQYAAAAABAAE APMAAACwBQAAAAA= "/>

 

 

 

 

Вирус полиомиелита Вирус гепатита А Вирус гепатита Е

Вывод:

1. _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3._________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 2. Принципиальная лабораторная диагностика энтеровирусных инфекций

Цель: изучить принципиальную схема лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций

Самостоятельная работа: составить алгоритм диагностики энтеровирусных инфекций (направления и этапы диагностики). См. теоретическую справку

Исследуемый материал:

____________________

____________________

____________________

 

 

Работа № 2. Вирусологическая диагностика энтеровирусов

Цель: изучить этапы вирусологической диагностики энтеровирусных инфекций

Методические указания

Идентификацию вирусов проводят в различных серологических реакциях, используя известные специфические антитела. Например, вирусы полиомиелита можно дифференцировать от вирусов Коксаки А и В, ECHO в РСК, используя антитела к общему антигену (VP-4) для всех типов вирусов полиомиелита.

В реакции использована диагностическая сыворотка, содержащая антитела к общему (внутреннему) антигену вируса полиомиелита VP-4 и исследуемый вируссодержащий материал.

Тип вируса полиомиелита определяют в реакции нейтрализации по цветной пробе, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, VP-2 и VP-3).

Самостоятельная работа

А) учесть результат РСК, поставленной с целью идентификации вируса полиомиелита, выделенного от больного с подозрением на полиомиелит.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

 

Постановка:

Опыт КС КД КГС

 

 

 

Результат:_____________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

 

Б) Определить тип вируса полиомиелита в реакции нейтрализации по результату постановки цветной пробы, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, УР-2 и VP-3). Учесть результат реакции. Сделать вывод.

Методические указания

Цветная проба для обнаружения вируса полиомиелита в культуре ткани применяется наряду с изучением цитопатического эффекта, вызываемого вирусом в культуре тканей. В пробирки с культурами тканей и питательной средой вносят исследуемый материал и индикатор феноловый красный, пробирки ставят в термостат. В этом случае, если вирус не размножается в культуре ткани, кислые продукты метаболизма клеток поступают в среду, которая приобретает желтую окраску. Если же полиовирусы размножаются в клетках тканей и пораженные клетки гибнут, то среда сохраняет первоначальный красный цвет, так как в неё не поступают кислые продукты метаболизма клеток и не изменяют её окраску. При рН 7,4-7,8 цвет среды красный, при рН 7,2 — оранжевый, при рН 7,0 и ниже — жёлтый. Таким образом, по изменению цвета среды с культурой тканей, куда внесён исследуемый материал и индикатор, можно судить о поражении клеток вирусами.

 

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

 

Постановка:

 

	Диагностические сыворотки, содер­жащие антитела к поверхностным антигенам вируса полиомиелита	Контроль среды	Контроль культуры клеток	Контроль вируса
	VP-1(тип1)	VP-2 (тип2)	VP-3 (типЗ)
Результат реакции

 

 

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Работа № 4.

Цель: изучить методы лабораторной диагностики гепатита Е.

Самостоятельная работа: решить ситуационную задачу, ответить на вопросы.

Ситуационная задача

Женщина, 25 лет на 3 неделе беременности поступила в клинику с жалобами на общую слабость, тошноту, отсутствие аппетит, ноющие боли в правом подреберье. Из анамнеза, больная приехала из Туркменистана.

 

1. Какой вирус гепатита мог вызвать инфекционный процесс у больной?

________________________________________________________________________

 

1. Перечислить признаки, характерные для данной инфекции.

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

1. Составить план лабораторного обследования на гепатит, указать, какие реакции и с какой целью используются для диагностики заболевания.

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Самостоятельная работа студента во внеурочное время:

1. Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).

 

Вакцина «Имовакс Полио»

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

 

Вакцина «Аваксим»

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

 

Вакцина ротавирусная

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

 

 

1. Заполнить контрольные карты по нозоформам:

 

ПОЛИОМИЕЛИТ

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период______________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Назовите основные клинические формы полиомиелита:

____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика _____________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) ____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) ______________________________________________________________________________________________________________________________________________

ГЕПАТИТ А

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период______________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Основные клинические проявления в зависимости от возраста:

____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика _____________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) ____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) ______________________________________________________________________________________________________________________________________________

ГЕПАТИТ Е

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период______________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Особенности течения гепатита Е:

____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика _____________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) ____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) ______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя_________________________________________________________

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

1. В клинику поступил больной с предварительным диагнозом «По­лиомиелит?». В процессе лечения его обследовали на 5-й и 30-й дни болезни для выявления специфических антител с помо­щью цветной пробы. Результаты исследования: на 5-й день - по­ложительная цветная проба в разведении сыворотки 1/10, на 30-й— 1/80. Оценить диагностическую ценность полученного результата.

 

2. В диагностическое отделение инфекционной боль­ницы поступило несколько детей в возрасте 10-12 лет из приго­родного спортивного лагеря. По клиническим симптомам был поставлен предварительный диагноз «Гепатит А?». Какой ис­следуемый материал необходимо взять для лабораторного исследования? Какие методы необходимо использовать для диагно­стики заболевания?

 

Пример решения задачи

В диагностическое отделение инфекционной больницы поступили двое больных с желтухой. Возникло подозре­ние на гепатит А. В целях подтверждения диагноза в лабораторию отправлена сыворотка крови больных для проведения иммуноферментного анализа с использованием диагностикума вируса гепати­та А. Оценить результат, записать протокол, сделать выводы.

Выделяется для учета результатов исследования полистироловый планшет с результатами ИФА.

Вопросы 1. Какую тест-систему взяли для исследования? 2. Зарисовать схему реак­ции (ИФА) в данном исследовании. 3. У кого из больных под­твержден диагноз гепатита А и почему?

Решение. Студент учитывает данные ему результаты иссле­дований, заполняет протокол и делает выводы:

1. Для исследования взята тест-система для ИФА с адсорбиро­ванными на твердой фазе антигенами (HAV-АГ) вируса гепатита А,

где 1 - твердая фаза (дно лунки планшета); 2 - адсорбированный на твердой фазе АГ вируса (HAV-антиген); 3 - сыворотка крови больного; 4 - антиглобулиновая сыворотка, меченная ферментом пероксидазой; 5, 6 - субстрат к ферменту и инди­катор на продукты расщепления субстрата.

3. При проведении лабораторного исследования подтвер­дился диагноз гепатита А у больного А., так как результат иммуноферментного анализа у него положительный, т. е. выявле­ны AT против HAV-антигена вируса.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ СПРАВКА

Маркеры гепатитов А и Е

Возбуди-тель	Маркеры	Диагностическое значение
Вирус HA	Антиген HAV Ag     анти-HAVIgM     анти-HAVIgG	Определяется в фекалиях уже через 10–20 дней после заражения и обычно сохраняется там короткое время (не более 1–2 недель).   Появляются в сыворотке в начале желтушного периода и сохраняются до 6 месяцев. Таким образом, выявление антител анти-НAV IgM указывает на острое заболевание вирусным гепатитом А.   Появляются в начальной стадии инфекции и сохраняются в крови всю жизнь.Обнаружение в крови антител анти-HAV IgG при отсутствии анти-HAV IgM указывает на перенесенный в прошлом вирусный гепатит А.
Вирус HE	антигеныВГЕ   анти-HEVIgM     анти-HEVIgG	Определяют методом иммуноэлектронной микроскопии, ПЦР, иммунофлюоресцирующих антител (МФА) в фекалиях больных   определяются с высокой частотой в сыворотках больных ГЕ в острой стадии заболевания и в период ранней реконвалесценции;     свидетельствуют о перенесенной в прошлом ГЕ - инфекции.

Ротавирусы

Лабораторная диагностика заболеваний, вызванных данным возбудителем, проводится путем выявления вируса в фекальных массах больных в первую неделю заболевания, с одной стороны, и регистрация нарастания титра специфических антител в парных сыворотках - с другой. Ротавирусы обнаруживаются в фекальных массах в 100% случаев в первые дни заболевания с помощью иммунной и электронной микроскопии. Вирусный антиген выявляют в фекалиях иммуноферментным и радиоиммунным методами, в реакциях иммунофлюоресценции, а также с помощью нуклеиновых зондов. Вирусы могут быть выделены в культурах клеток в первые дни болезни. Серологическую диагностику проводят в реакциях нейтрализации вируса в культуре клеток, РСК, а также в РТГА с эритроцитами человека группы 0. В качестве диагностикума используют ротавирусы обезьян и телят.

 

Занятие № 2.2.2

Энтеровирусные инфекции. Лабораторная диагностика гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызываемых вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить основные группы энтеровирусов; биологические свойства возбудителей гепатитов А, Е, полиомиелита, вирусов Коксаки, ECHO, ротавирусов; принципы вирусологической диагностики энтеровирусных инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

2. Клинику, патогенез, эпидемиологию, восприимчивость, иммунитет, механизм передачи возбудителей при энтеровирусных инфекциях.

3. Принципы лабораторной диагностики гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

4. Основы профилактики гепатитов А, Е, полиомиелита,

инфекций вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

5. Препараты для диагностики, лечения и профилактики энтеровирусных

инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· составлять алгоритм вирусологического обследования пациента с
энтеровирусной инфекцией;

· интерпретировать результаты вирусологических исследований с целью
диагностики энтеровирусных инфекций;

· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

• алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

 

• методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителей энтеровирусных инфекций.