Обоснование и предполагаемое назначение препарата

 

Живая аттенуированная культуральная вакцина против чумы КРС, описанная в предыдущих изданиях Руководства по наземным животным (Plowright, 1962), была разработана в Кении в результате серийных пассажей выделенного в 1911 г. полевого штамма вируса чумы КРС (RBOK (старый штамм чумы КРС Kabete или “Kabete “O”) в первичных клетках почки теленка. Хотя современная классификация вирусов чумы КРС по четырем линиям (африканские линии 1 и 2 и старая африканская линия 1, включавшая Kabete O, плюс азиатская линия) была неизвестна до 1995 года, с момента разработки вакцины RBOK посевной материал вакцины разошелся по всему миру, и миллионы доз вакцины применялись на полуострове Индостан, на Среднем и Ближнем Востоке, а также в Африке для борьбы с чумой КРС и ее искоренения.

 

Другие существующие в настоящее время вакцинные штаммы – LA (Nakamura & Miyamoto, 1953) и LA-AKO (Furutani et al., 1957a) – появились из разработанного лапинизированного вакцинного штамма Nakamura III (по-другому – L штамм; Nakamura et al., 1938) в результате многократных пассажей в клетках эмбрионов кур и кроликов. Исходный штамм Nakamura III широко применялся для контроля заболевания в Восточной и Юго-Восточной Азии. Штаммы LA и LA-AKO обладают намного более низкой вирулентностью, чем исходный штамм, особенно, для высоко восприимчивых пород КРС в Восточной Азии, таких японская черная и корейская желтая. В настоящее время штамм LA-AKO используют для производства культуральной вакцины против чумы КРС для целей вынужденной вакцинации на одобренном МЭБ/ФАО предприятии, обеспечивающем соответствующий уровень биологической защиты и безопасности.

 

2. Описание процесса производства и минимальные требования к традиционным вакцинам

 

Характеристики посевного материала

 

Биологические характеристики

 

i i) RBOK

 

 

Посевной материал, используемый в производстве живой аттенуированной культуральной вакцины против чумы КРС, должен обеспечивать производство безопасной клеточной культуральной вакцины, индуцирующей у КРС иммунитет продолжительностью не менее пяти лет. Иммуногенность посевного материала продемонстрирована вплоть до 122-го пассажа в клетках почки теленка, дальнейшее пассирование не рекомендуется.

 

Поддержание вакцинного штамма осуществляется в системах посевного материала между пассажами 90-го и 120-го уровня. Посевной вирус хранят в лиофилизированном виде при температуре –20ºC и ниже. Вирус культивируют в клетках Vero или в первичных или серийно культивированных клетках почки, полученных от здорового плода теленка или очень молодого теленка. Серийно культивированные клетки

должны быть получены не позднее, чем после десяти пассажей исходной культуры.

 

Посевной вирус позволяет получить вакцину, безопасную для применения у различных европейских, африканских и индийских пород КРС. Оценку безопасности и эффективности вакцины у китайских и японских пород КРС не проводили.

 

i ii) LA-AKO

 

 

Посевной вирус (LA-AKO) получен из штамма Nakamura III (на уровне 897-ого пассажа в клетках кролика) в результате многократных пассажей в клетках эмбрионов кроликов (29 пассажей) и в клетках куриных эмбрионов (456 пассажей). Введение вируса LA-AKO не вызывает клинических признаков кроме небольшого повышения температуры тела у высоко восприимчивых пород, таких как японская черная. Следует отметить, однако, что вирус вызывает выраженную спленомегалию у куриных эмбрионов (Furutani et al., 1957b). Недавно последовательность генома LA-AKO и его родительского штамма, Nakamura III, были зарегистрированы в публичных базах данных (Fukai et al., 2011; Takamatsu et. al., 2015).

 

Посевной материал лиофилизируют и хранят при температуре -20ºC или ниже.

 

Критерии качества

 

i i) RBOK и LA-AKO

 

 

Необходимо подтвердить, что посевной материал как RBOK, так и LA-AKO является:

 

� a) Чистым

 

 

То есть свободным от контаминации вирусами, бактериями, грибами или микоплазмами.

 

� b) Безопасным

 

 

То есть не вызывающим клинической реакции при введении КРС, восприимчивому к чуме КРС.

 

� c) Эффективным

 

 

То есть индуцирующим иммунитет к чуме КРС у КРС, восприимчивому к данному заболеванию.

 

Метод производства

 

Процедура

 

i i) RBOK

 

 

Отдельные серии вакцины производят посредством заражения клеточных культур с последующим – после соответствующего периода инкубирования – сбором покрывающей среды, в которой в больших количествах присутствуют высвобожденные частицы живого вируса. Вирус можно выращивать в первичных культурах клеток почки эмбрионов КРС или телят или в гомогенатах клеток, полученных в результате не менее чем десяти пересевов одной из вышеуказанных культур. Кроме того, вакцину можно производить в утвержденных перевиваемых клеточных культурах при условии, что клетки не инфицированы случайно занесенными вирусами, включая вирус вирусной диареи КРС, и поддерживаются в системе посевных материалов.

 

Вирусный материал собирают с культур, инкубируемых в роллерных флаконах, не позднее чем через 10 дней после их инфицирования. Правильный момент для сбора вирусного материала определяют по наличию обширного характерного ЦПЭ внутри клеточного монослоя. Для формирования промышленной суспензии собранный вирусный материал очищают центрифугированием на низкой скорости, а затем вносят криопротектор.

 

Из одного и того же набора культур разрешается произвести два сбора, которые можно объединить для образования одной суспензии. Все этапы производства вакцины должны быть описаны в соответствующем протоколе.

 

i ii) LA-AKO

 

 

Отдельные серии вакцины производят путем заражения клеток Vero восстановленным посевным материалом с последующим сбором покрывающей среды и инфицированных клеток, содержащих большое количество частиц живого вируса, после инкубирования в течение соответствующего периода времени. Серию вакцины также можно произвести из промышленной суспензии, содержащей вирус в соответствующей концентрации, поддерживаемой за счет нескольких серийных пересевов (до 10 раз). Кроме того, производство вакцины следует осуществлять в стерильных условиях в культуре, свободной от таких случайно занесенных агентов, как вирус вирусной диареи КРС, вирус лейкоза КРС и ротавирус КРС.

 

Вирусный материал собирают с культур, инкубируемых в роллерных флаконах, не позднее чем через 7 дней после их заражения. Правильный момент для сбора вирусного материала определяют по наличию обширного характерного ЦПЭ внутри клеточного монослоя. Для формирования промышленной суспензии собранный вирусный материал очищают центрифугированием на низкой скорости, а затем вносят криопротектор.

 

Все этапы производства вакцины должны быть описаны в соответствующем протоколе.

 

Для длительного хранения и реализации в режиме холодовой цепи промышленные суспензии лиофилизируют.

 

Требования к субстратам и средам

 

i) RBOK a) Клетки

b) Среды

c) Криопротектор

 

 

 

 

Первичные клетки, серийно культивированные первичные клетки или перевиваемые клеточные культуры получают от здоровых на вид животных или из нормальных эмбрионов, при этом все клеточные культуры должны сохранять нормальную морфологию во время культивирования. Клетки должны быть свободны от контаминации случайно занесенными вирусами, особенно, вирусом вирусной диареи КРС (см. ниже).

 

 

Клетки почки теленка выращивают и поддерживают в сбалансированном солевом растворе Эрла или в минимальной эссенциальной среде Игла с добавлением 0,5% гидролизата лактальбумина и 0,1% экстракта дрожжей, а также 5% сыворотки новорожденного теленка КРС, восприимчивого к чуме КРС, из стран с незначительным риском губкообразной энцефалопатии КРС.

 

Клетки Vero выращивают и поддерживают в среде Игла в модификации Глазго с добавлением 14% TPB и 6% сыворотки КРС (свободной от антител к вирусу чумы КРС), не подвергавшейся тепловой обработке, а также антибиотиков.

 

 

В качестве стабилизатора для лиофилизации используют раствор, содержащий равные объемы 5% гидролизата лактальбумина и 10% сахарозы.

 

i ii) LA-AKO

 

 

� a) Клетки

 

 

Во время культивирования перевиваемые культуры клеток Vero должны сохранять нормальную морфологию. Клетки должны быть свободны от контаминации случайно занесенными вирусами.

 

b) Среды d) Криопротектант

 

 

 

Клетки Vero выращивают и поддерживают в минимальной эссенциальной среде Игла с добавлением 10% нагретой фетальной телячьей сыворотки, 0,295% TPB, а также антибиотиков.

 

 

В качестве стабилизатора для лиофилизации используют раствор, содержащий равные объемы 1% глутамата натрия, 0,3% поливинилпиролидона и 10% сахарозы.