Вытеснительный электрофорез.

Этот метод характеризуется тем, что через некоторое время после разделения зон устанавливается состояние равновесия, при котором ширина зон в дальнейшем не изменяется. К электрофорезу такого типа относятся изоэлектрическое фокусирование.

Изоэлектрическое фокусирование. Это метод разделения белков, основанный на перемещении их молекул под действием постоянного электрического тока в область с величиной рН, соответствующей изоэлектрической точке данного белка. Между анодом и катодом создается градиент рН с помощью амфолитов. Каждый белок мигрирует к соответствующему электроду и прекращает движение, попадая в зону с pH = pJ (фокусируется). Таким образом, молекулы, имеющие одинаковую изоэлектриче­скую точку, сконцентрируются в узкой зоне.

Применение электрофореза

Электрофорез является одним из наиболее важных методов для разделения и анализа компонентов веществ в химии, биохимии и молекулярной биологии. Его применяют в физиотерапии, для окраски автомобилей, для осаждения дымов и туманов, для изучения состава растворов и др.

Электрофорез лекарственный – метод физиотерапии, заключающийся в одновременном воздействии на организм постоянного электрического тока и вводимых им (через кожу или слизистые оболочки) ионов лекарственных веществ. При лекарственном электрофорезе повышается чувствительность рецепторов к лекарственным веществам, которые полностью сохраняют свои фармакологические свойства. Основные особенности лекарственного электрофореза – выраженное и продолжительное терапевтическое действие малых доз лекарственных веществ за счет создания своеобразного кожного депо применяемых препаратов. Электрофорез лекарственный применяется при заболеваниях центральной и периферической нервной системы, опорно-двигательного аппарата, гинекологических заболеваниях и др.

Возможность упростить процесс обработки обширной и разносторонней информации, получаемой в результате электрофоретических и других исследований, дает использование лабораторной компьютерной системы. Получаемые денситограммы представляют собой графики зависимости оптической плотности от подвижности каждой фракции. Площадь пика пропорциональна количеству белков, находящихся в соответствующей фракции. Каждая фракция соответствует определенному белку. Процентное содержание отдельных белковых фракций меняется при многих заболеваниях. С помощью электрофореза можно провести первый этап оценки следующих патофизиологических процессов: иммунодефицит, воспалительный процесс, снижение синтеза белка, состояние потери белка, внутрисосудистый гемолиз, генетические варианты белков. Альбумины выполняют важную функцию по транспортировке многих биологически активных веществ. Они способны связываться с холестерином. Значительная часть кальция в сыворотке также связана с альбумином. Бóльшая часть антител, содержащихся в сыворотке, связана с фракцией g-глобулинов. Уменьшение содержания белков этой фракции резко снижает защитные силы организма.                                         

а) Содержание белков А сыворотки крови в норме
альбумин	56,3—68,8%
α1-глобулин	3—5,8%
α2-глобулин	6,9—10,5%
Д Г В β-глобулин	7,3—12,5%
Б γ-глобулин	12,7—19,2%

 

	б)
			в)		г)

 

 

Рис. 13 Графики зависимости оптической плотности от процентного содержания каждой фракции белка в сыворотке крови: А – альбумин; Б – a ₁ -глобулин; В – a ₂ -глобулин; Г – b-глобулин; Д – g-глобулин.

а) нормальная электрофореграмма сывороточных протеинов;

б) электрофореграмма при хроническом воспалении;

в) электрофореграмма при тяжелой форме гепатита;

г) электрофореграмма при циррозе.