Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика

План занятия (практическое) № 8

Тема занятия: Определение глюкозы и кетоновых тел в моче качественными методами

Дисциплина: МДК 01.01Теория и практика лабораторных общеклинических исследований

Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика

Цели занятия:

· Изучить методы качественного определения глюкозы и кетоновых тел в моче.

План занятия:

1.  Ответить на вопросы(Приложение 1) 2. Записать алгоритмы (Приложение 2).

3. Составить схему одного из качественных проб для определения глюкозы.

4. Составить схему одного из качественных проб для определения кетоновых тел. 5. Ответить на вопросы (Приложение3)

б) Задание студентам для выполнения лабораторной работы: Качественные методы определения глюкозы и кетоновых тел в моче с помощью тест-реагентов и анализаторов методом Гайнеса-Акимова, экспресс-тестами,  Альтгаузена.

Задание на дом

Составление вопросников с ответами по теме лекций 8,9 повторить лекции и п/з № 1-7

Составление схемы по методам определения глюкозы и кетоновых тел в моче качественными методами.

Составить презентацию на тему  «Глюкозурии»

 

Гр.: качественные методы (пробы)

· Проба Ланге

· Модифицированная проба Ротеры

· Проба Легаля

· Проба Лестраде

Гр.: полуколичественные методы

· Экспресс-тесты (диагностические тест-полоски)

Принцип обнаружения кетоновых тел в моче. Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами, образуя комплекс, окрашенный в розовато-сиреневый, сиреневый или фиолетовый цвет. Чувствительность проб около 50 мг/л кетоновых тел. Полуколичественную оценку результатов можно дать в интервале от 150 до 1500 мг/л.

Алгоритм 3. Определение кетоновых тел в моче с помощью пробы Ланге.

Принцип метода: Нитропруссид натрия в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами с образованием комплекса красно-фиолетового цвета.

Посуда, реактивы, оборудование:

· Химическая пробирка;

· Секундомер (часы);

· Реактивы:

1. Уксусная кислота 80%.

2. Нитропруссид натрия (свежеприготовленный 10% раствор).

3. Аммиак.

Ход исследования:

К 12 – 15 мл мочи приливают около 1 мл уксусной кислоты и около 0,5 мл раствора нитропруссида натрия. Затем наслаивают аммиак.

Интерпретация полученных результатов:

В положительном случае на границе двух жидкостей образуется фиолетовое кольцо. Кольцо может появиться не сразу, а в течение 2 – 3 мин.

Другая модификация этой пробы удобна тем, что можно использовать готовый реактив нитропруссида натрия.

Приготовление реактива: 6 г нитропруссида натрия растворяют в 100 мл 30% уксусной кислоты.

Ход исследования:

Интерпретация полученных результатов:

К 5 – 6 мл мочи прибавляют несколько капель реактива (до цвета чая) и наслаивают аммиак.

В положительном случае на границе жидкостей появляется фиолетовое кольцо.

Зарисуйте схему пробы Ланге

 

 

Алгоритм 4. Определение кетоновых тел в моче с помощью модифицированной пробы Ротеры.

Принцип метода: интенсивность окраски рабочего раствора позволяет ориентировочно судить о концентрации кетоновых тел в моче.

Посуда, реактивы, оборудование:

· Химическая пробирка;

· Секундомер;

· Реактивы:

· Нитропруссид натрия, раствор 50 г/л; готовят перед использованием.

· Аммония сульфат.

· Аммиак водный – 25% раствор.

Ход исследования:

Приблизительно 200 мг сухого сульфата аммония, 5 капель мочи и 2 капли раствора нитропруссида натрия тщательно смешивают в пробирке, а затем на эту смесь тщательно наслаивают 10 – 15 капель раствора водного аммиака.

Интерпретация полученных результатов:

При наличии кетоновых тел на границе раздела в течение 3 – 5 мин образуется красно-фиолетовое кольцо, интенсивность окраски которого позволяет ориентировочно судить о концентрации кетоновых тел в моче (см. таблицу).

При незначительной концентрации кетоновых тел слабое кольцо может появиться на 8 – 10 минуте.

Ориентировочная количественная оценка кетоновых тел в моче.

 

Интенсивность окраски

Алгоритм 7. Экспресс-тесты

К экспресс-тестам определения кетоновых тел в моче относятся: набор для экспресс-анализа ацетона в моче и диагностические полоски. Исследование проводится согласно инструкции.

· Изучите инструкцию к диагностическим тест-полоскам фирмы ФАН и БИОСЕНСОР АН, перепишите её в тетрадь;

· Получите образцы биологической жидкости и тест-полоски у преподавателя и проведите самостоятельное исследование мочи;

· Результат запишите в бланки анализа;

· Оцените полученный результат с позиции «норма-патология» и сдайте преподавателю.

Принцип определения кетоновых тел с использованием тест-полосок ФАН

Принцип основан на:

полуколичественном определении кетонов. Диагностическая зона пропитана щелочным буфером и нитропруссидом натрия, который при низких величинах ph (в щелочной среде) вступает в реакцию с ацетоуксусной кислотой и ацетоном, вследствии чего образуется комплекс коричневато-красного цвета. Интенсивность окраски прямопропорциональна количеству кетонов в исследуемой моче.

Чувствительность и специфичность:

Чувствительность зоны к ацетоуксусной кислоте составляет 0,5 ммоль/л, для ацетона – 10 ммоль/л.

Оценка теста

Цветная шкала диагностической тест полоски с 2004 года представлена 4 зонами:

1 зона: бледно-желтая – отрицательная;

2 зона: розово-бежеватого цвета – соответствует15 ммоль/л (16мг/дл);

3 зона: насыщенного бежевато-розоватого цвета –5,0 ммоль/л (53 мг/дл);

4 зона: коричневато-красного цвета – соответствует 15 ммоль/л (160 мг/дл).

Интерпретация полученных результатов: Реакция оценивается через 60 сек после погружения диагностической полоски в мочу, путем сравнения образовавшейся окраски реагентной зоны с цветовой шкалой (стандартом). Если результат лежит между двумя цветовыми квадратами, то результат оценивают по наиболее близкой по окраске зоне цветовой шкалы.

Положительным результат считается, если диагностическая зона при контакте с исследуемой мочой принимает тот или иной оттенок цветной шкалы.

Принцип определения кетоновых тел с использованием тест-полосок фирмы БИОСЕНСОР АН

Данные тест-полоски предназначены для определения двух важных показателей (глюкозы и кетоновых тел в моче), что очень важно в диагностике и контроле показателей у больных Сахарным диабетом.

 

1.Т щательно перемешайте мочу стеклянной палочкой;

2 Произведите отбор 10мл мочи для исследования мочевого осадка;

3 Затем возьмите строго необходимое количество тест-полосок для исследования мочи (ровно столько сколько у Вас образцом мочи);

4.Закройте пенал фабричной крышкой;

5. Опустите тест-полоску в мочу на 2-3 сек, так чтобы все реагентные зоны были в моче;

6. Выньте тест-полоску из мочи, убрав излишки жидкости ребром полоски о край посуды или промокните ребром полоски о фильтровальную бумагу;

7 Положите тест-полоску на ровную поверхность диагностическими зонами вверх;

8 Оцените полученный результат через 60 сек с цветовой шкалой (стандартом) на пенале.

9 Запишите полученный результат в бланки анализа.

Диапазон определяемых концентраций глюкозы в моче:

0,0 0,05 0,1 0,25 0,5 1,0 ≥ 2,0 %

0,0 2,8 5,6 14,0 28,0 56,0 ≥ 112,0 ммоль/л

0,0 50 100 250 500 1000 ≥ 2000 мг/дл

Диапазон определяемых концентраций кетоновых тел в моче:

Ммоль/л

0,0 0,5 1,5 4,0 8,0 ≥ 16.0 ммоль/л

 

Записать и выучить! Факторы, влияющие на определение кетоновых тел в моче

При оценке результатов проб на кетоновые тела в моче следует учитывать ряд факторов. Так, например, известно, что ацетоуксусная кислота в стерильной моче стабильна до 8 — 10 дней, при бактериурии или большом количестве дрожжевого грибка может полностью исчезнуть в течение 24 часов. Около 20% ацетона при комнатной температуре исчезает за 24 часа, но сохраняется в холодильнике. Поэтому важное значение имеет правильный сбор мочи, ее хранение и сроки выполнения анализа. Кроме того, кетоновые тела могут исчезать из мочи при бактериурии и invivo, что может привести к ложноотрицательным результатам.

К ложноположительным результатам может привести использование месны, фенолфталеина, метаболитов некоторых препаратов (например, леводопы и каптоприла, капотена, менса и др.); кислая моча, повышенный удельный вес мочи. Все эти факторы приводят к химическому завышению результатов анализа, то есть непосредственно влияют на химическую реакцию определения кетоновых тел в моче, а количество самих кетоновых тел в моче может быть нормальным.

Необходимо помнить, что существуют также факторы, приводящие к клиническому повышению кетоновых тел в моче, то есть непосредственно влияющих на их уровень в моче за счет воздействия на обменные процессы, связанные с образованием кетоновых тел. К таким фактором относится прием некоторых лекарственных препаратов — инозитола, метионина, метформина, фенформина, феназопиридина, эфирного наркоза, интоксикация изониазидом, изопропиловым спиртом, ацетилсалициловой кислотой.

 

Приложение 3

План занятия (практическое) № 8

Тема занятия: Определение глюкозы и кетоновых тел в моче качественными методами

Дисциплина: МДК 01.01Теория и практика лабораторных общеклинических исследований

Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика

Цели занятия:

· Изучить методы качественного определения глюкозы и кетоновых тел в моче.

План занятия:

1.  Ответить на вопросы(Приложение 1) 2. Записать алгоритмы (Приложение 2).

3. Составить схему одного из качественных проб для определения глюкозы.

4. Составить схему одного из качественных проб для определения кетоновых тел. 5. Ответить на вопросы (Приложение3)

б) Задание студентам для выполнения лабораторной работы: Качественные методы определения глюкозы и кетоновых тел в моче с помощью тест-реагентов и анализаторов методом Гайнеса-Акимова, экспресс-тестами,  Альтгаузена.

Задание на дом

Составление вопросников с ответами по теме лекций 8,9 повторить лекции и п/з № 1-7

Составление схемы по методам определения глюкозы и кетоновых тел в моче качественными методами.

Составить презентацию на тему  «Глюкозурии»