Унифицированный метод Брандберга–Робертса–Стольникова

Принцип метода. В основу положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что при добавлении к моче азотной кислоты на границе сред (кислота—моча) при наличии белка происходит его коагуляция, и появляется белое кольцо.

Реактивы: 30% раствор азотной кислоты (HNO₃) (d = 1,2) или реактив Ларионовой: 20–30 г натрия хлорида (NaCl) растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, остужают, фильтруют; к 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной HNO₃.

Ход определения. В пробирку наливают 1–2 мл 30% раствора HNO₃ или реактива Ларионовой и осторожно по стенке наслаивают столько же профильтрованной мочи.

Оценка результатов. Появление на границе двух жидкостей между 2-й и 3-й минутами тонкого белого кольца указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. При появлении кольца раньше 2 мин после наслаивания мочу следует развести дистиллированной водой и провести повторное исследование с разведенной мочой. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, его ширины, компактности и времени появления. При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком — в 4 раза, при компактном — в 8 раз и т. д. Концентрацию белка вычисляют, умножив степень разведения на 0,033 г/л.

Примечание. Белое кольцо может образовываться при наличии больших количеств уратов; в отличие от белкового, оно появляется немного выше границы двух жидкостей и растворяется при легком нагревании

Определение количества белка в моче по реакции с сульфосалициловой кислотой

Принцип метода. Концентрация белка в моче пропорциональна помутнению, появляющемуся при его коагуляции сульфосалициловой кислотой.

Реактивы: 1) 3% раствор сульфосалициловой кислоты (C₇H₅O₆S); 2) 0,9% раствор NaCl; 3) 1% стандартный раствор альбумина: 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9% раствора NaCl в колбе емкостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же растворителем. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5% раствора азида натрия (NaN₃). При хранении в холодильнике реактив стабилен в течение 2 месяцев.

Ход определения. В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, добавляют 3,75 мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин пробу фотометрируют на ФЭКе при длине волны 590–650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете с длиной оптического пути 5 нм. Контролем служит проба, в которой к 1,25 мл мочи добавлено 3,75 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, для построения которого готовят разведения стандартного раствора альбумина (см. таблицу: Приготовление разведений для построения калибровочного графика).

Приготовление разведений для построения калибровочного графика

№ пробирки	Стандартный раствор, мл	0,9% NaCl, мл	Концентрация белка, г/л
1	0,05	9,95	0,05
2	0,1	9,9	0,1
3	0,2	9,8	0,2
4	0,5	9,5	0,5
5	1,0	9,0	1,0

Из каждого полученного разведенного раствора берут по 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Примечание. Прямолинейная зависимость величины экстинкции и концентрации белка сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях белка пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

При наличии в моче веществ, содержащих йод, могут быть получены ложноположительные результаты. Поэтому тест нельзя использовать у больных, принимающих препараты йода или прошедших исследование с применением йодсодержащих рентгено-контрастных соединений. Ложноположительные реакции при проведении исследования могут быть вызваны приемом сульфаниламидных лекарственных средств, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.

Биуретовый метод

Принцип метода. Пептидные связи белка с солями меди в щелочной среде образуют комплекс фиолетового цвета. Белки предварительно осаждают трихлоруксусной кислотой (ТХУ).

Реактивы. 1) 10% раствор ТХУ; 2) 20% раствор сульфата меди (CuSO₄ × 5Н₂O); 3) 3% раствор NaOH.

Ход определения. К 5 мл мочи прибавляют 3 мл 10% раствора ТХУ, центрифугируют до постоянного объема осадка. Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой, а осадок растворяют в 1 мл 3% раствора NaOH и добавляют 0,25 мл 20% раствора CuSO₄, смесь перемешивают и центрифугируют. Центрифугат фотометрируют при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 10 мм против дистиллированной воды. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочному графику, который строят так же, как описано в предыдущем методе. На оси абсцисс откладывают оптическую плотность в единицах экстинкции, а на оси ординат — концентрацию белка в г/л. При анализе суточной мочи рассчитывают потерю белка за сутки.