Cryptococcus neoformans ( Sanfelice) Vuill

Синонимы: Cryptococcus meningitidis, Torula histolitica, Тоrula neoformans. Совершенные формы - Filobasidiella neoformans Kwon-Chung, Filobasidiella bacillispora Kwon-Chung.

Характеристика: колонии при 37 С кремовые, желтоватые, при старении - темно-коричневые (на среде Steib 2-4 дня роста), округлые, гладкие, блестящие, слизисто-тягучие. Преобладают округлые дрожжеподобные клетки размером от 6 до 20 мкм с одной, как правило, почкой. Псевдомицелий обычно не образует, но отдельные штаммы способны образовывать не только псевдомицелий, но и истинный мицелий. Необходимо дифференцировать с сапрофитическими криптококками, не растущими при 37 С. Характерна слизистая капсула, размеры которой варьируют в зависимости от штамма. При ВИЧ-инфекции встречаются бескапсульные варианты Cr. neoformans, которые при последующих пересевах вновь приобретают гетерополисахаридную капсулу. У тканевых форм капсула хорошо выявляется в "тушевых препаратах", а также при окраске альциановым синим или основным коричневым; грам-положительный микроорганизм.

Распространение: повсеместно. Как сапрофит встречается в высевах из почвы, в испражнениях птиц (голубя). Человек и животные инфицируются через респираторный тракт, возможно также через кожу и загрязненную пищу. Предрасполагающими условиями для возникновения криптококкоза являются гематологические заболевания, кортикостероидная терапия, лечение цитостатиками и т.п. Криптококкоз (криптококковый менингит) является одним из наиболее тяжелых осложнений ВИЧ-инфекции.

Заболевания: криптококкоз (болезнь Буссе-Бушке) поражает преимущественно легкие и ЦНС, значительно реже кожу и слизистые. Относится к ВИЧ-маркерной инфекции. При диссеминации поражаются внутренние органы и кости. Поражения легких подразделяются на бессимптомные, острые и хронические, напоминающие туберкулезные (однако каверны и фиброз для криптококкоза не характерны). Криптококкоз ЦНС - это, главным образом, менингит - развивается постепенно, протекает без лихорадки. В тканях, как правило, слабая воспалительная реакция иногда образуются крупные скопления "Hefe tumor" (опухоль из гриба). Криптококкозные менингиты, менингоэнцефалиты, иногда абсцессы мозга характерны для ВИЧ-инфекции. Криптококкоз при СПИДе встречается у 10 - 20% больных.

Методы диагностики:

• Магниторезонансная томография или компьютерная томография головного мозга, рентгенография легких.
• Выявление источника инфекции и очагов диссеминации, получение материала из очагов поражения.
• Люмбальная пункция с определением давления спинномозговой жидкости (при любом клиническом варианте криптококкоза).
• Общеклинический и биохимический анализ спинномозговой жидкости.
• Микроскопия спинномозговой жидкости, других биологических жидкостей, материала из очагов поражения (окраска Альциановым синим, тушевые препараты).
• Посев спинномозговой жидкости, крови, мочи, простатической жидкости, материала из очагов поражения.
• Определение антигена Cryptococcus neoformans в спинномозговой жидкости и крови тестом латекс-агглютинации (Pastorex Cryptococcus, Bio-Rad, Immuno-Mycologics Inc., Meridian Diagnostics Inc., Murex Diagnostics или ELISA- тестом /Meridian Diagnostics Inc./).
• Повторное определение антител к Candida в сыворотке крови.
• Определение концентрации щелочной фосфотазы в сыворотке крови.
• Обследование больного для выявления источника инфекции и других очагов диссеминации.

Pneumocystis carinii

Pneumocystis carinii -возбудитель пневмоцистоза, хронической инфекции, возникающей на фоне иммунодефицитных состояний и поражающий преимущественно легкие. Микроорганизм длительное время относили к простейшим, в настоящее время есть достаточно оснований причислить его к царству грибов /Kwon-Chung, 1992/. Pn.carinii не культивируется на искусственных питательных средах. Предприняты успешные попытки выращивать пневмецисты в культуре легочной ткани куриных эмбрионов, а также в культуре фибробластов эмбриональной легочной ткани человека.

Практически, в настоящее время доступны изучению лишь тканевые формы возбудителя, полученные из патологического материала /гистологические срезы, бронхолегочный лаваж, мокрота/. При рутинных методах окраски /гематоксилин и эозин, Ван-гизон и пр., / скопления возбудителя в тканях определяется как однообразные ячеистые массы. Диагностически значимые зрелые формы пневмоцист хорошо выявляются при импрегнации по Гомори-Грокетту, при окраске толуидиновым синим, тионином, при окраске по методу Бауэра. По Граму пневмоцисты окрашиваются непостоянно.

Морфологически зрелые пневмоцисты представляют собой округлые клетки до 10 мкм в диаметре с плотной многослойной клеточной стенкой гетерополисахаридной природы. В зрелых пневмоцистах видны базофильные внутриклеточные тельца /аскоспоры/. Вокруг зрелых пневмоцист сосредоточено большое количество молодых форм /трофозоидов/, имеющих лабильные очертания, а также промежуточные формы - прецисты с более тонкой, чем у цист стенкой. По мере созревания внутриклеточные тельца заполняют зрелые цисты, их оболочка разрывается, и внутриклеточные тельца выталкиваются в окружающие ткани, превращаясь в трофозоиды. Материнские клетки приобретают чашевидные или полулунные очертания и постепенно дегенерируют.

Сходство механизмов образования внутриклеточных телец с аскоспорообразованием позволяет предположить близость пневмоцист к грибам класса Ascomycetes (Kwon-Chung, 1996), хотя имеется мнение о принадлежности пневмоцист к зигомицетам (Hoog, 1996).

Заболевание: Pneumocystis carinii вызывает пневмоцистную пневмонию. Однако встречаются случаи экстрапульмонарной пневмоцистной инфекции, возникающей, как правило, на фоне тяжелого поражения легких. В настоящее время описаны диссеминированные формы заболевания с поражением почек, селезенки, лимфоузлов, пространств Вирхова-Робэна головного мозга, сетчатки глаза, перикарда, капсулы тимуса, печени, панкреатической железы.

Инфекция возникает при ослаблении организма на фоне различных иммунодефицитных состояний: ослабленные дети /недоношенные, в состоянии гипотрофии/, врожденные иммунодефициты, иммуносупрессивная терапия злокачественных новообразований, кортикостероидная терапия, радиационные поражения. Наибольшее распространение пневмоцистоз имеет при СПИДе /65% больных ВИЧ-инфекцией/.

Патогистологическая картина пневмоцистной пневмонии характеризуется двумя особенностями. С одной стороны, наличием пенистого экссудата в альвеолах, бронхиолах и мелких бронхах (скопления микроорганизма), с другой - наличием инфильтративно-пролиферативного процесса в межальвеолярных перегородках. Характерно отсутствие в инфильтратах нейтрофильных лейкоцитов.

Методы диагностики:

Диагноз ставится на основании типичной патогистологической картины и обнаружения зрелых форм пневмоцист в патологической материале. Чаще всего применяется brush-биопсия, трансбронхиальная биопсия периферических участков легких, хотя возможно обнаружение возбудителя и в промывных бронхоальвеолярных водах и даже в мокроте.

 

Aspergillus fumigatus (Fresenius)

Характеристика: колонии гладкие, бархатистые или шерстисто-клочковатые, зеленые (разных оттенков), до темно-бурых, реверзум (обратная сторона колонии) бесцветная или желтая. Конидиеносцы гладкие, часто зеленоватые, септированные или несептированные, большей частью 300 - 500 мкм длиной и 2-8 мкм шириной. Конечное вздутие (везикул) обратно-фляжковидное, 20-30 мкм в диаметре, несущее стеригмы, в основном только в верхней половине. Стеригмы размером 6-8 х 2-3 мкм пригнуты кверху. Каждая стеригма отчленяет цепочку конидий. Гриб термофильный, хорошо растет при температуре 37 С, некоторые расы растут при 52 С.

Распространение повсеместное. Очень часто встречается на пищевых продуктах, древесине, компосте, органических отбросах. Острая инфекция у человека обусловливается массивным попаданием грибов в организм или соответствующими патогенетическими условиями. Инфекция часто развивается на фоне лейкемии, саркоида Бека, длительной кортикостероидной терапии в больших дозах, при применении иммуносупрессоров, при злокачественных опухолях, туберкулезе, агранулоцитозе. Как профессиональное заболевание встречается при обмолоте зерна, скирдовании сена, сортировке пищевых продуктов. От человека к человеку не передается.

Заболевания: A. fumigatus является наиболее частой причиной аспергиллеза, прежде всего, бронхов, легких, отомикоза. Выделение грибом токсина может стать причиной экземы. Аспергиллез легких может протекать в форме острой гнойной пневмонии или в хронической грануломатозной форме с выраженным фиброобразованием. Вокруг ветвящихся нитей гриба ткани некротизируются, очаг окружен нейтрофильными лейкоцитами, а затем поясом гранулемы с многочисленными гигантскими многоядерными клетками. Характерным является формирование полостей, содержащих своеобразные грибковые шары (fungusball). Аспергилл может быть также причиной мицетомы, язв роговицы глаз. Описаны генерализованные формы с поражением головного мозга.. A.fumigatus вызывает микоз легких у молодняка домашних птиц (кур, уток), вызывает аборты у коров.

Аспергиллез инвазивный

Методы диагностики:

• Компьютерная томография (КТ) или рентгенография легких, придаточных пазух.
• При наличии неврологической симптоматики - КТ или магнитно-резонансная томография головного мозга /или других органов при выявлении симптомов диссеминации/.
• Бронхоскопия, бронхоальвеолярный лаваж /БАЛ/, биопсия очагов поражения.
• Микроскопия БАЛ, мокроты, отделяемого из носа, биопсийного материала.
• Определение антигена Aspergillus в сыворотке крови (тест латекс-агглютинации – Pasrorex или Platelia Aspergillus, Bio-Rad)
• Определение специфических антител к Aspergillus в сыворотке крови (при хроническом некротизирующем аспергиллезе).

Аспергиллома

Методы диагностики:

• Компьютерная томография или рентгенография легких.
• Микроскопия и посев мокроты, бронхолегочного лаважа.
• Определение антител к Aspergillus в сыворотке крови.

 

Аспергиллез аллергический бронхолегочный

Методы диагностики:

• Общий анализ крови с определением абсолютного количества эозинофилов.
• Определение функции внешнего дыхания.
• Рентгенография легких.
• Микроскопия и посев мокроты или бронхолегочного лаважа.
• Определение общего IgE к Aspergillus в сыворотке крови.
• Определение IgG с антигеном Aspergillus в сыворотке крови.
• Кожная проба с антигеном Aspergillus.

Aspergillus flavus (Link)

Характеристика: колонии клочковатые, зеленовато-желтого цвета (окраска варьирует у разных рас). Обратная сторона колонии желтоватая. Конидиеносцы желтые, шероховатые. Конечное пузыревидное вздутие округлое. Конидиальные головки не радиальные. Стеригмы однорядные в малых головках, с колонками конидиальных цепочек. Конидии грушевидные или круглые. Обильные склероции, вначале белые, затем бурые. Рост культуры при 25 - 37 С.

Распространение повсеместное, встречается на зерне, в муке, на арахисе. Образует афлотоксины - вещества, повреждающие гепатоциты. Длительное употребление афлотоксина с пищей является причиной первичного рака печени. Массовые отравления описаны в странах Африки, Иране, в Юго-Восточной Азии. Как правило, в странах с низким уровнем жизни.

Заболевания: микотическая гранулома в синусах носа, поражение нижних отделов респираторного тракта. У больных диабетом поражение центральной нервной системы.

Микоз легких у птиц, аборты у коров.

Aspergillus niger (van Tieghem)

Характеристика: быстрый рост колоний при 37 С вначале белого цвета, позже желтого с мелкими черными споровым головками, через 4-5 дней вся поверхность колоний становится черной. Обратная сторона колонии светло-желтая. Стеригмы в споровых головках расположены в два ряда друг над другом и заканчиваются цепочками спор с гладкой или бородавчатой поверхностью.

Распространение повсеместное, растет на гниющих органических отходах.

Заболевания: отомикоз, реже пневмомикоз. Описаны случаи поражения ЦНС.

Absidia corymbifera (Cohu)

Синоним: Mucor corymbifera

Характеристика: плесневой гриб, быстро растет при 37 С. Колонии пушистые, вначале белые, затем серые. Спорангиеносцы крупные, до 250 мкм длиной; спорангии грушевидной формы, размером 40-60 мкм; с конической апофизой размером 50-100 мкм. Споры шаровидные или эллиптические, бесцветные, гладкие или шероховатые.

Распространение: встречается повсеместно. Изредка выделяется из человеческой мокроты и наружного слухового прохода. Обнаруживается на коже животных (лошадей), а также высевается из гниющих растительных отходов и пищевых продуктов.

Заболевания: является возбудителем мукоромикоза. Поражает легкие и другие внутренние органы, высевается из крови. Является причиной отомикозов, поражает ЦНС. Генерализация инфекции обычно смертельна. Предрасполагающими факторами являются диабет, амебиаз, длительная кортикостероидная терапия.

Методы диагностики (сходны при различных зигомикозах – Absidia, Mucor, Rhizomucor, Rhizopus):

• Компьютерная томография или рентгенография легких.
• Магнитно-резонансная или компьютерная томография, рентгенография придаточных пазух носа при неврологической симптоматике МР или КТ головного мозга.
• Получение материала из очагов поражения.
• Микроскопия и посев материала из очагов поражения, отделяемого из придаточных пазух, мокроты, бронхоальвеолярного лаважа, биопсийного материала /обнаружение толстого, несептированного мицелия/.
• Гистологическое исследование биопсийного материала.

Мucor spp.

Например: Mucor pusillus.

Характеристика: быстро растет при 22 С, патогенные виды бурно растут при 37 С. Колонии гладкие, бархатистые, серые; спорангиеносцы прямостоящие, с 1-2 ветвями, отходящими почти под прямым углом, 180-400 мкм высотой. Спорангии с апофизой, темно-серые или буроватые, до 60 мкм в диаметре; колонка шаровидно-грушевидная, дымчатая, размером 18-45 х 14-35 мкм. Споры 3-5 мкм в диаметре. Субстратный мицелий не септированный.

Распространение повсеместное, подобно Absidia.

Заболевания: мукоромикозы легких, ЦНС, отомикозы, поражения носа. Описаны случаи микотических абортов у коров и других домашних животных. Предрасполагающим фактором является диабет. Прогноз тяжелый.

Rhizopus spp.

Например: Rhizopus oryzae.

Характеристика: быстро растет при 22 С. Патогенные виды растут также при 37 С. Воздушный мицелий обильный серовато-белого цвета, шерстистый, затем желтовато-коричневый или коричневый. Субстратный мицелий несептированный бесцветный, спорангиофоры не ветвящиеся, 100-200 мкм в длину одиночные или группами с хорошо развитыми ризоидами. Спорангии с коричневыми или черными стенками, содержат округлые эндоспоры.

Распространение повсеместное, в основном, встречается на гниющих пищевых отходах.

Заболевания: те же формы, как и в случаях мукоромикозов (поражение легких, ЦНС, отомикозы).

Prototheca spp.

Характеристика: микроорганизм относится к бесхлорофильным водорослям. Различают 5 видов Prototheca. Патогенными для человека и животных являются Prototheca zopfii 1894 и Prototheca wickerhamii 1959.

Prototheca zopfii - растет на агаре Сабуро при 25 С. Колонии тускло-белые, дрожжеподобные по консистенции. Рост прекращается на средах с добавлением циклогексамина. Клетки различны по размерам и форме от 8,1 до 24,2 х 10,8 до 26 мкм в диаметре. Внутри клеток располагаются аутоспоры 9-11 мм. Микроорганизм ассимилирует: глюкозу, галактозу, n-propanol, n-butanol, Prototheca wickerhamii - растет на агаре Сабуро при 25 -30 С. Колонии кремового цвета, влажные. Клетки по форме похожи на P. zopfii, но размеры их меньшие от 8,1 до 13,4 х 10,8 до 16,1 мкм. Аутоспоры мелкие- 4-5 мкм в диаметре, внутри материнской клетки число их доходит до 50. В отличие от P. zopfii микроорганизм ассимилирует trehalose и не ассимилирует n-propanol. Заболевание: Протетектоз. Описано около 100 случаев в Южных штатах США, в Мексике, в Англии, Франции, Германии, Финляндии, Японии, Китае. Заболевание начинается на месте травмы в виде пигментированных участков на коже, затем возникают папулезные, экзематозные и папуло-нодулярные проявления. В 25% случаев развиваются локтевые бурситы.

Биопсированная ткань характеризуется гиперкератозом и псевдоэпителиоматозной гиперплазией. Возбудитель обнаруживается в роговых массах, в эпидермисе в сосочковом и ретикулярных слоях дермы в виде групп округлых не почкующихся телец /от 8 до 20 мкм в диаметре в зависимости от вида Prototheca /. Гематоксилином и эозином микроорганизм не окрашивается, хорошо воспринимает окраску РАS методом и импрегнацию по Гомори-Гроккот. В большинстве случаев генерализация инфекции не возникает. Однако при ВИЧ-инфекции у больных гепатитом, у больных с перитонеальным диализом, в случаях хронической иммуносупрессии описаны перитониты, холангиты, менингиты, вызванные, как правило, P.wickerhamii.

Методы диагностики:

Получение и посев материала из очагов поражения.

Гистологическое изучение биопсийного материала (дифференциальная диагностика с возбудителями хромомикоза, бластомикозов, Histoplasma duboisii).

5.6 ВОЗБУДИТЕЛИ ПСЕВДОМИКОЗОВ
Actinomyces israelii (Kruse) Lachner-Sandoval

Синонимы: Streptothrix (Discomyces, Nocardia, Corynebacterium) israelii

Характеристика: Колонии вырастают в анаэробных (микроанаэробных) условиях за 24-48 часов при 37 ^оС на сердечно-мозговой среде и кровяном агаре. Имеется два серотипа Actinomyces israelii: серотип I формирует мелкие, паукообразные колонии с ветвящимся мицелиальными элементами, расходящимися из центральной точки. Через 10 дней колонии становятся плотными, лопастными, зеленовато-белыми, блестящими. Серотип II - колонии мелкие, глянцевые, вырастают через 24-48 часов, через 10 суток колонии становятся выпуклыми. Микроскопически молодые колонии состоят из коротких палочек с одним и более ветвлениями коккоидных форм. В старых культурах и в тканях нити могут быть более длинными. Они грам-положительные, не кислотоупорные. (1 мкм в диаметре). Actinomyces ферментирует маннозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, рафинозу, ксилозу, крахмал. Не усваивает глицерол. Гидролизует эскулин, желатин не переваривает.

Распространение повсеместное. Обнаруживается у человека в полости рта, кариозных зубах, в криптах миндалин, в аппендиксе. Распространяется по

организму, по-видимому, эндогенно. Инвазия в ткани происходит, возможно, в результате травмы /удаление зуба, оперативное вмешательство, постановка

контрацептива ит.п/. В тканях образуются характерные тканевые формы –друзы /гранулы/ из сплетений актиномицета. Друзы окружены распадающимися нейтрофильными лейкоцитами. Друзы "созревают" и фрагментируются. Вокруг молодых друз вновь возникают очаги гнойного воспаления, по периферии формируется грануляционная ткань и фиброзные прослойки. В целом очаг актиномикоза может напоминать "пчелиные соты".

Заболевания: Актиномикоз. Поражения чаще всего, в шейно-лицевой и абдоминальной области, в маточных трубах, а также в легких. Реже случается менингит.

Методы диагностики:

• Получение материала из очагов поражения.
• Микроскопия /поиск друз-гранул/, посев в анаэробных условиях.
• Гистологическое исследование биопсийного материала.

Nocardia asteroides (Eppinger) Blanchard

Синонимы: Cladotrix asteroides, Streptothrix carnea, Actinomyces gypsoides, Discomyces asteroides, Oospora asteroides, Actinomyces asteroides, Actinomyces asteroides var. serratus, Proactinomyces asteroides var. cateriforme, Proactinomyces asteroides var. decolor.

Характеристика: Колонии быстро растут при 37 С. Культура складчатая, оранжево-желтого цвета /иногда до рыжего/. Микроскопически - короткие палочки и кокки, наблюдаются редкие ветвления. Микроорганизм грам-положителен и кислотоупорен. Аэроб. Утилизирует мочевую кислоту. Не утилизирует казеин, тиронин, ксантин, крах мал, желатин. В тканях человека друз, как правило, не образует, хотя могут быть исключения. Ветвящийся мицелий окружен распадающимися нейтрофилами.

Распространение: обнаруживается в почве, в пыли, на растениях, в воде.

Заболевания: легочный нокардиоз, поражение головного мозга. В редких случаях Nocardia asteroides являются причиной мицетом.

Методы диагностики:

• Получение материала из очагов поражение, из промывных вод бронхов.
• Микроскопия и посев материала.
• Гистологическое исследование биопсийного материала.
• Рентгенография легких, компьютерная томография мозга.