Заглавная страница
Избранные статьи
Случайная статья
Познавательные статьи
Новые добавления
Обратная связь

ТОП 10 на сайте

Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации

Техника нижней прямой подачи мяча.

Франко-прусская война (причины и последствия)

Организация работы процедурного кабинета

Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний

Коммуникативные барьеры и пути их преодоления

Обработка изделий медицинского назначения многократного применения

Образцы текста публицистического стиля

Четыре типа изменения баланса

Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву

Мы поможем в написании ваших работ!

ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?

Влияние общества на человека

Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации

Практические работы по географии для 6 класса

Организация работы процедурного кабинета

Изменения в неживой природе осенью

Уборка процедурного кабинета

Сольфеджио. Все правила по сольфеджио

Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления

Главная Избранные Случайная статья Познавательные Новые добавления Обратная связь FAQ

ГЛАВА 1. Общие свединья о микробах и их микробиологической диагностике

Стр 1 из 2Следующая ⇒

КУРСОВАЯ РАБОТА

По дисциплине (модулю) ПМ 04. Лабораторных микробиологических исследований

Специальность 31.02.03 Лабораторная диагностика

Тема: Методы биохимической идентификации микробов применяемые для диогнастических заболиваний

Выполнил студентка группы № 0341 Дехтиевская Ксения Михайловна Научный руководитель Борисова Зоя Анатольевна

Оценка ___________________

Самара 2019

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ…………………………………………….…………………………3

ГЛАВА 1. Общие свединья о микробах и их микробиологической диагностике ………………………………………………………….…………... 5

1.1. Класификация микробов и их микробиологическом развитии …...………5

1.2. Методы биохимической идентификации микробов на современом этапе ……………………………………………………………….12

ЗАКЛЮЧЕНИЕ………………………………………………………….19

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ ………………19

ВВЕДЕНИЕ

Микробы могут быть как безядерными(прокариоты: бактерии, археи), так и иметь ядро(эукариоты: некоторые грибы, протисты), кроме вирусов ноги входят в отдельную гуппу. Большинство микроорганизмов состоят из одной клетки, но есть и многоклеточные микроорганизмы, точно так же, как существуют одноклеточные микроорганизмы, видимые невооружённым глазом, например Thiomargarita namibiensis, представители рода Caulerpa (являются гигантскими поликариотами).

Повсеместная распространённость и суммарная мощность метаболического потенциала микроорганизмов определяют их важнейшую роль в круговороте веществ и поддержании динамического равновесия в биосфере Земли.

Краткое рассмотрение различных представителей микромира, занимающих определённые «этажи» размеров, показывает, что, как правило, величина объектов определённо связана с их структурной сложностью. Нижний предел размеров свободноживущего одноклеточного организма определяется пространством, требуемым для упаковки внутри клетки аппарата, необходимого для независимого существования. Ограничение верхнего предела размеров микроорганизмов определяется, по современным представлениям, соотношениями между клеточной поверхностью и объёмом. При увеличении клеточных размеров поверхность возрастает в квадрате, а объём — в кубе, поэтому соотношение между этими величинами сдвигается в сторону последнего.

Чтоб всё это узнать существует Медицинская микробиология, цель которой изучение структуры и свойств патогенных микробов, взаимоотношения их с организмом человека в определенных условиях природной и социальной среды, совершенствование методов микробиологической диагностики, разработка новых, более эффективных лечебных и профилактических препаратов, решение такой важнойх проблемы, как ликвидация и предупреждение инфекционных болезней

Объект исследования: микробы

Предмет исследования: методы биохиимческой идентификации микробов

Цель исследования: изучить современные методы биохимической идентификации микробов

Задачи:

1. Изучить научную медицинскую и специальную литературу по теме исследования и дать определения основным понятиям.

2. Изучить методы биохимической идентификации микробов на современном этапе.

Методы исследования:

1. Аналитический метод.

ГЛАВА 1. Общие свединья о микробах и их микробиологической диагностике

Извитые формы микроорганизмов.

1.Вибрионы и кампилобактерии- имеют один изгиб, могут быть в форме запятой, короткого завитка.

2.Спириллы- имеют 2- 3 завитка.

3.Спирохеты- имеют различное число завитков, аксостиль- совокупность фибрилл, специфический для различных представителей характер движения и особенности строения (особенно концевых участков). Из большого числа спирохет наибольшее медицинское значение имеют представители трех родов- Borrelia, Treponema, Leptospira.

Эукариоты

Отличия от прокариот.

1. Из органоидов прокариоты имеют только рибосомы 70S (мелкие), а у эукариот имеются не только крупные 80S рибосомы, но и много других органоидов.

2. Так как ядра у прокариот нет, то делятся они делением надвое – не с помощью мейоза/ митоза.

3. Эукариоты имеют гистоны, которых нет у бактерий. Хромантин эукариот содержит 1/3 ДНК и 2/3 белка, у прокариот все наоборот.

4. Клетка эукариот в 1000 раз больше по объему и в 10 раз больше по диаметру, чем клетка прокариот.

Простейши- это одноклеточные животные организмы. Среди микроорганизмов они являются наиболее сложными по своему строению и функциям. Разнообразны и по величине (от 2-4 мк до 3 см) и по морфологическим признакам. Они крупнее бактерий. Форма их тела чаще шаровидная (амебы), с лучевой симметрией (радиолярии), реже удлиненная с двусторонней симметрией (инфузории).

Грибы- большая группа низших растительных организмов, не имеющих хлорофилла, но имеющих более сложное строение и более совершенные способы размножения, чем бактерии.

Вирусы.

Ви́рус — неклеточный инфекционный агент, который может воспроизводиться только внутри живых клеток. Вирусы поражают все типы организмов, от растений и животных до бактерий и архей. Обнаружены также вирусы, поражающие другие вирусы. Вирусы бывают ДНК и РНК содержащими.

Среда для детекции

Положительная реакция

САХАРОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ

Амилаза

Крахмальный агар (агар с 0,2% крахмала) и раствор Люголя.

При нанесении раствора йода на среду с 18 - 24 часовой культурой микроорганизмов, вокруг колоний с амилазной активностью образуется светлый неокрашенный ореол, в то время как остальная среда приобретает сине-фиолетовый цвет из-за присутствия в ней крахмала.

Карбо-гидразы

Дифференциально-диагностические среды для энтеробактерий (Эндо, Левина, Плоскирева и др.); содержат лактозу, анилиновые красители.

Лактозопозитивные энтеробактерии (Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, K. pneumonia), образуют ярко окрашенные колонии, лактозонегнативные энтеробактерии (Salmonella, Shigella) – бледно-розовые или бесцветные колоний.

Полиуглеводные среды (Клиглера, Олькеницкого и др.). Среда Клиглера имеет малиново-красный цвет и содержит: 0,1% глюкозы, 1% лактозы, соли Fe ²⁺, феноловый красный (индикатор рН).

При разложении глюкозы желтеет столбик среды, при разложении лактозы желтеет скошенная часть среды, при разложении углеводов с образованием CO₂ в среде также появляются газовые пузырьки или разрыв столбика; при образовании H₂S наблюдается почернение по ходу укола.

Жидкие или полужидкие моноуглеводные среды Гисса; содержат один из углеводов, индикатор рН (табл. 5); рН среды устанавливают 7,2±0,2. Для выявления газообразования в жидкие среды вносят поплавок.

При разложении углеводов образуются кислые продукты, снижающие рН среды, в результате чего индикатор рН изменяет цвет. Газообразование на жидких средах приводит к накоплению газа в поплавке, в полужидких – появлению разрывов или газовых пузырьков в среде.

ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ

Протеазы и пептидазы

5% обезжиренное молоко.

Происходит свёртывание с образованием сгустков казеина и пептонизация с лизис казеина, при которой молоко становится прозрачным. Обе реакции могут происходить последовательно или одновременно.

Свёрнутая сыворотка.

Происходит разжижение.

Столбик желатина.

Происходит разжижение (желатину разжижают Proteus vulgaris, Bacillus anthracis).

Молочный агар в чашках Петри имеет мутно-белый цвет.

Появляются зоны просветления вокруг колоний на фоне мутно-белой среды.

Дезами-назы амино-кислот

Среда с одной из аминокислот и индикатором рН;

рН среды 7,2±0,2.

Образуется аммиак, приводящий к защелачиванию среды и изменению цвета индикатора.

Декар-боксилазы

Среда с одной из основных аминокислот (аргинином, лизином, орнитином, гистидином, тирозином, глутамином) и индикатором рН.

При наличии декарбоксилазной активности среда подщелачивается за счёт образования диаминов, вызывая изменение цвета индикатора.

Трипто-фаназа

Мясо-пептонный бульон или среда с аминокислотой триптофаном, а также индикаторная бумажка, смоченная щавелевой кислотой и закреплённая под пробкой над питательной средой.

Образуется индол, который приводит к покраснению бумажки, смоченной щавелевой кислотой.

Десуль-фуразы (цисти-назы)

Среды с цистеином, метионином и качественным реактивом на H₂S – солями железа, свинца, висмута.

Образуется H₂S, который взаимодействует с Fe²⁺(Pb²⁺, Vi²⁺) с образованием сульфида железа черного цвета, что вызывает почернение среды.

Уреаза

Среда с мочевиной и индикатором рН - феноловым красным, рН среды устанавливают 6,8±0,2.

Образуется аммиак и окраска среды из красно-оранжевой переходит в малиново-лиловую за счёт сдвига рН в щелочную сторону.

ЛИПОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ

Липаза

Желточный агар или среда с твином-80.

Липазы гидролизуют жиры на глицерин и свободные жирные кислоты. Вокруг колоний в проходящем свете на поверхности среды видна радужная пленка (похожа на бензиновую пленку на поверхности воды).

Лецити-наза

Желточный агар (к 300 мл стерильного МПА, расплавленного и охлажденного до 45-50⁰С, добавляют источник лецитина - желток куриного яйца).

Лецитиназа расщепляет лецитин на фосфохолин и диглицерид, и вокруг колоний появляются опалесцирующие зоны, или «венчики помутнения»; лецитиназа есть у Staphylococcus aureus, клостридий, фузобактерий.

ФЕМЕНТЫ-ТОКСИНЫ

Гемо-лизины

5-10% кровяной агар.

a-гемолизины приводят к неполному гемолизу с образованием вокруг колоний зоны неполного просветления среды, которая в течение 2-5 суток приобретает зеленовато-бурый оттенок.

b-гемолизины вызывают полный гемолиз с образованием прозрачной зоны вокруг колоний.

g-гемолизины не дают видимого глазом гемолиза.

О-стрепто-лизин

В пробирки с двукратными разведениями b-гемолитических стрептококков добавляют равный объем 5% эритроцитов кролика, инкубируют при 37⁰С 1 час; параллельно ставят контроль из взвеси эритроцитов в питательном бульоне.

В положительных случаях происходит гемолиз (лаковая кровь), в отрицательных случаях образуется осадок из эритроцитов.

Определяют титр О-стрептолизина - наибольшее разведение микробной культуры при котором наблюдается гемолиз.

Плазмо-коагулаза

Стерильная цитратная плазма крови, разлитая по 0,4 мл в пробирки.

После внесения суточной агаровой культуры и инкубации посевов 2-5 часов при 37⁰С происходит свёртывание плазмы и утрата ею текучести.

Гиалуро-нидаза

Побирка с гиалуроновой кислотой и уксусная кислота; при добавлении к гиалуроновой кислоте уксусной кислоты образуется сгусток муцина.

Если тест-культура образует гиалуронидазу, то после 15 мин инкубации культуры бактерий при 37⁰С в пробирке с гиалуроновой кислотой и добавления 2-3 капель уксусной кислоты образуется сгусток муцина.

Нуклеазы

МПА с ДНК, среда опалесцирует (полупрозрачна).

Через 18-24 часа культивирования на среде после нанесения на ее поверхность 0,1% H₂SO₄ из-за деполимеризации ДНК и РНК вокруг колоний образуется прозрачный ореол - «венчик просветления».

Фибри- нолизин

Сгустки фибрина.

Растворение сгустков фибрина.

Цито-токсины

Культура эпителиальных клеток или др. и токсин, выделенный путем фильтрования культуральной жидкости с использованием бактериальных фильтров.

При культивировании культуры клеток с безмикробным фильтратом токсина культура клеток утрачивает типичную тканевую морфологию: округляется, ядра пикнотизируются.

Летучие жирные кислоты

Газо-жидкостная хроматография кислото-эфирного экстракта ЛЖК из биологического материала или культуральной жидкости, содержащей анаэробы.

На хроматограмме появляются пики в зависимости от массы и полярности вещества: чем легче вещество, тем раньше появляется пик на хроматограмме, поэтому ЛЖК выходят в следующей последовательности: уксусная, пропионовая, масляная, валериановая, капроновая (рис. 25). Изомасляная, изовалериановая, изокапроновая кислоты выходят раньше соответствующей кислоты.

Валериановая кислота Изовалериановая кислота Масляная кислота Изомасляная кислота Пропионовая кислота Уксусная кислота

В последние годы в бактериологических лабораториях применяются одноразовые коммерческие тест-системы для биохимической идентификации. Они представляют собой пластиковые планшеты с лунками, заполненными дегидратированными субстратами с индикатором рН. Тест-системы позволяют изучать 20, 32, 64 биохимических признака

Схема идентификации с использованием таких тест-систем включает следующие этапы:

1) выделение чистой культуры или изолированных колоний на плотной питательной среде;

2) приготовление бактериальной суспензии с определенной концентрацией микроорганизмов, которую определяют путем сравнения со стандартами мутности;

3) внесение суспензии микроорганизмов в лунки тест-системы;

4) инкубация в термостате от 4 до 24 часов (длительность зависит от тест-системы) при 37⁰С;

5) учёт результатов, который может быть:

а) визуальным по изменению цвета индикатора;

б) автоматическим с использованием микробиологического анализатора.

6) анализ результатов с использованием компьютерного банка данных, включающего биохимические профили разных видов микроорганизмов. Результаты ферментации учитываются по принципу +/- и вносятся в референс-таблицу, после чего происходит сравнение с компьютерным банком данных. Идентифицируемый микроорганизм относят к тому виду, с которым он проявляет наибольшее сходство и указывают степень сходства (в %). Хорошей идентификацией считается идентификация с 95% (и более) совпадением признаков.

Заключение

В итоге изучив материалы по данной теме можно сделать вывод, что современые методы биохимической идентификации микроорганизмов более ифективны в плане точности и скорости.