Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ:  Археология Биология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия ЭкологияТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву 
Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Методы биохимической идентификации микробов на современном этапеСодержание книги
Поиск на нашем сайте
Биохимическая идентификация основывается на определении ферментов микроорганизмов. Присутствие ферментов определяют по их способности разлагать соответствующие субстраты, для такой идентификации необходимо 18 – 24 часа. В последнее время определяют непосредственно сами ферменты, для такой идентификации требуется 4 – 6 часов. Согласно международной биохимической классификации ферментов, в зависимости от катализируемой реакции выделяют 6 основных классов: оксидоредуктазы, трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы, лигазы. Отдельные представители каждого класса ферментов имеют систематическое название, традиционное (тривиальное) название, а также четырехуровневый числовой код, который отражает класс, подкласс, под-подкласс и серийный номер фермента в под-подклассе. Кроме систематического названия ферменты микроорганизмов имеют традиционные названия, получаемые в зависимости от субстратной специфичности. Традиционно ферменты микроорганизмов классифицируются на сахаролитические, протеолитические, липолитические, окислительно-восстановительные ферменты, а также ферменты-токсины, которые определяют с помощью специальных сред или тестов.
Определение биохимических свойств микроорганизмов
Среда для детекции | Положительная реакция | ||||||
|
САХАРОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ | ||||||||
|
Амилаза | Крахмальный агар (агар с 0,2% крахмала) и раствор Люголя.
| При нанесении раствора йода на среду с 18 - 24 часовой культурой микроорганизмов, вокруг колоний с амилазной активностью образуется светлый неокрашенный ореол, в то время как остальная среда приобретает сине-фиолетовый цвет из-за присутствия в ней крахмала. | ||||||
|
Карбо-гидразы | Дифференциально-диагностические среды для энтеробактерий (Эндо, Левина, Плоскирева и др.); содержат лактозу, анилиновые красители. | Лактозопозитивные энтеробактерии (Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, K. pneumonia), образуют ярко окрашенные колонии, лактозонегнативные энтеробактерии (Salmonella, Shigella) – бледно-розовые или бесцветные колоний. | ||||||
| Полиуглеводные среды (Клиглера, Олькеницкого и др.). Среда Клиглера имеет малиново-красный цвет и содержит: 0,1% глюкозы, 1% лактозы, соли Fe 2+, феноловый красный (индикатор рН). | При разложении глюкозы желтеет столбик среды, при разложении лактозы желтеет скошенная часть среды, при разложении углеводов с образованием CO2 в среде также появляются газовые пузырьки или разрыв столбика; при образовании H2S наблюдается почернение по ходу укола. | |||||||
| Жидкие или полужидкие моноуглеводные среды Гисса; содержат один из углеводов, индикатор рН (табл. 5); рН среды устанавливают 7,2±0,2. Для выявления газообразования в жидкие среды вносят поплавок. | При разложении углеводов образуются кислые продукты, снижающие рН среды, в результате чего индикатор рН изменяет цвет. Газообразование на жидких средах приводит к накоплению газа в поплавке, в полужидких – появлению разрывов или газовых пузырьков в среде. | |||||||
|
Продукция ацетил-метил-карбинола | Выявляют с помощью реакции Фогес-Проскауэра, используют 10% КОН или 20% КОН. | После добавления к культуре равного объёма 10% или 20% КОН и инкубации 4-24 часа при 370С в случае образования ацетилметилкарбинола среда окрашивается в розовый цвет с жёлтым оттенком; в случае образования ацетоина и 2,3-бутиленгликоля окраска не изменяется. | ||||||
|
ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ | ||||||||
|
Протеазы и пептидазы | 5% обезжиренное молоко. | Происходит свёртывание с образованием сгустков казеина и пептонизация с лизис казеина, при которой молоко становится прозрачным. Обе реакции могут происходить последовательно или одновременно. | ||||||
| Свёрнутая сыворотка. | Происходит разжижение. | |||||||
| Столбик желатина.
| Происходит разжижение (желатину разжижают Proteus vulgaris, Bacillus anthracis). | |||||||
| Молочный агар в чашках Петри имеет мутно-белый цвет. | Появляются зоны просветления вокруг колоний на фоне мутно-белой среды. | |||||||
|
Дезами-назы амино-кислот | Среда с одной из аминокислот и индикатором рН; рН среды 7,2±0,2. | Образуется аммиак, приводящий к защелачиванию среды и изменению цвета индикатора. | ||||||
|
Декар-боксилазы | Среда с одной из основных аминокислот (аргинином, лизином, орнитином, гистидином, тирозином, глутамином) и индикатором рН. | При наличии декарбоксилазной активности среда подщелачивается за счёт образования диаминов, вызывая изменение цвета индикатора. | ||||||
|
Трипто-фаназа | Мясо-пептонный бульон или среда с аминокислотой триптофаном, а также индикаторная бумажка, смоченная щавелевой кислотой и закреплённая под пробкой над питательной средой. | Образуется индол, который приводит к покраснению бумажки, смоченной щавелевой кислотой. | ||||||
|
Десуль-фуразы (цисти-назы) | Среды с цистеином, метионином и качественным реактивом на H2S – солями железа, свинца, висмута. | Образуется H2S, который взаимодействует с Fe2+(Pb2+, Vi2+) с образованием сульфида железа черного цвета, что вызывает почернение среды. | ||||||
|
Уреаза | Среда с мочевиной и индикатором рН - феноловым красным, рН среды устанавливают 6,8±0,2. | Образуется аммиак и окраска среды из красно-оранжевой переходит в малиново-лиловую за счёт сдвига рН в щелочную сторону. | ||||||
|
ЛИПОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ | ||||||||
| Липаза | Желточный агар или среда с твином-80. | Липазы гидролизуют жиры на глицерин и свободные жирные кислоты. Вокруг колоний в проходящем свете на поверхности среды видна радужная пленка (похожа на бензиновую пленку на поверхности воды). | ||||||
| Лецити-наза | Желточный агар (к 300 мл стерильного МПА, расплавленного и охлажденного до 45-500С, добавляют источник лецитина - желток куриного яйца). | Лецитиназа расщепляет лецитин на фосфохолин и диглицерид, и вокруг колоний появляются опалесцирующие зоны, или «венчики помутнения»; лецитиназа есть у Staphylococcus aureus, клостридий, фузобактерий. | ||||||
|
||||||||
|
|
Последнее изменение этой страницы: 2021-05-27; просмотров: 116; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.117.106.23 (0.01 с.) |
|||||||
