ТЕМА: Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых спорообразующими и неспорообразующими анаэробами

Занятие № 2

ТЕМА: Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых спорообразующими и неспорообразующими анаэробами

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ знать: классификацию и таксономию, морфологические, тинкториальные, культуральные, антигенные, биохимические свойства, факторы патогенности, особенности культивирования возбудителей газовой гангрены, столбняка; ботулизма; эпидемиологию, патогенез, микробиологическую диагностику и биопрепараты для этиотропного лечения и специфической профилактики газовой гангрены, столбняка, ботулизма; основные биологические свойства бактероидов, порфиромонад, превотелл, фузобактерий, вейлонелл, пептококков, пептострептококков; микробиологическую диагностику; методы профилактики и терапии

уметь: приготавливать мазки из раневого отделяемого, окрашивать их по Граму и Ожешко, микроскопировать с масляной иммерсией, определять морфологические и тинкториальные свойства анаэробов, учитывать реакцию нейтрализации с учётом на белых мышах, идентифицировать чистые культуры неспорообразующих анаэробов с помощью API-систем

Задание на дом

1. Вопросы для самоподготовки:

1) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики газовой анаэробной инфекции

2) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики столбняка

3) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики ботулизма

4) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики инфекций, вызываемых неспорообразующими анаэробами: бактероидами, порфиромонадами, превотеллами, фузобактериями, вейлонеллами, пептококками и пептострептококками

Грамположительные спорообразующие палочки

Клостридии — возбудители газовой гангрены

Таксономия и классификация

Род Clostridium семейства Bacillaceae отдела Firmicutes включает около 20 видов, которые играют роль в патологии человека: Clostridium perfringens, Clostridium novyi, Clostridium septicum — возбудители газовой анаэробной гангрены, Clostridium tetani — возбудитель столбняка, Clostridium botulinum — возбудитель ботулизма, Clostridium difficile является этиологическим фактором псевдомембранозного колита.

 

Нозологические формы

Clostridium perfringens — вид бактерий рода Clostridium, который занимает первое место по частоте встречаемости и тяжести, вызываемой им, газовой гангрены. С. perfringens также является причиной развития пищевых токсикоинфекций, поскольку вырабатывает энтеротоксин. По способности образовывать токсины микроорганизмы разделяют на 6 сероваров: А, В, С, D, E, F. Для человека патогенны С. perfringens А, С и D. Серовары В, С, D, Е вызывают заболевания у сельскохозяйственных животных. С. рerfringens типов А, С и D вызывают газовую гангрену, некротический энтерит и пищевые токсикоинфекции у человека и животных.

Газовая гангрена (от греч. gangraina, разъедающая язва) — раневая инфекция, вызываемая клостридиями (С. perfringens, С. novyi, С. oedematiens, С. histolyticum, С. septicum и др.); характеризуется быстро наступающим и распространяющимся некрозом преимущественно мышечной ткани, отеком, газообразованием в тканях (симптом крепитации), тяжелой интоксикацией и отсутствием воспалительных явлений.

Также выделяют пищевые токсикоинфекции, вызванные сероварами А и С:

· С. рerfringens типа А вызывает преимущественно токсикоинфекции легкой и средней степени тяжести. Симптомы появляются через 8-18 часов, после употребления контаминированной пищи. Заболевание начинается остро, с болями в животе, рвотой (иногда с примесью крови) и диареей (до 20 раз в сутки). Симптомы исчезают в последующие 12-24 часа. Летальные исходы наблюдают редко.

· С. рerfringens типа С вызывает некротический энтерит. При острых формах болезнь может привести к смерти пациента в течение 12-24 часов.

Антигенная структура

Выделяют 6 сероваров (A-F), различающихся по антигенным свойствам, продуцируемых экзотоксинов. Тип А включает много подтипов, идентифицируемых в реакции агглютинации, что облегчает диагностику в случае пищевых токсикоинфекций и раневых анаэробных инфекций.

Биохимические свойства

Бактерии ферментируют углеводы (ксилозу, галактозу, сахарозу, маннозу и др.) с образованием кислоты и газа. От прочих клостридий С. рerfringens отличает способность восстанавливать нитраты, расщеплять лактозу, образовывать лецитиназу. Протеолитическая активность слабая: разжижает желатину, не разлагает казеин. Интенсивно створаживает молоко с образованием крупноячеистого творожистого сгустка, напоминающего пену на волнах («штормовая реакция»). Наиболее характерные признаки — способность вызывать масляно-кислое брожение и анаэробный распад углеводов с образованием масляной кислоты и газов (СО₂, водород, иногда метан).

Факторы патогенности

С. рerfringens продуцируют более 12 экзотоксинов, обозначаемых буквами греческого алфавита (α, β, γ, δ, ε и др.). Наиболее важную роль в развитии патологического процесса играет α-токсин (лецитиназа, фосфолипаза С). Продуцентами являются все серотипы, однако наиболее активными являются клостридии типа А. Токсин разрушает лецитин клеточных мембран животных клееток, вызывая лизис эндотелиальных клеток, эритроцитов, лейкоцитов и др. Проявляет дермонекротизирующее, гемолитическое и летальное действие.

Таким образом, мишенью для действия основных токсинов являются биологические мембраны в различных тканях, в основе поражения находятся ферментативные процессы, катализирующие гидролитическое расщепление и нарушение клеточной проницаемости с последующим отеком. Последний сопровождается снижени­ем окислительно-восстановительного потенциала в клетках, активацией эндогенных протеаз, приводящих к аутолизу тканей, характерному для газовой гангрены.

Энтеротоксин. Продуценты бактерии типов А и С, вызывающие пищевые токсикоинфекции. Термолабильный, с низкой молекулярной массой, действует в нижних отделах тонкого кишечника. Молекула токсина взаимодействует с рецепторами на поверхности эпителиальных клеток, повреждает клеточную мембрану и нарушает транспорт ионов, что ведет к потере жидкости и внутриклеточных белков. Диарея развивается вслед­ствие потери воды и электролитов за счет дилатации и повышения проницаемости капилляров.

С. рerfringens синтезирует большое количество ферментов, являющихся факторами патогенности: протеазы, коллагеназа, ДНК-аза, желатиназа, гиалуронидазы, способствующие распространению инфекции в тканях организма.

 

Патогенез

Все виды трав­матизма могут служить причиной развития газовой гангрены. Возникновению последней способствует загрязнение ран землей, наличие обширных очагов разможжения и некроза тка­ней. Газовая гангрена развивается при попадании С. рerfringens на раневые поверхности, где бактерии активно размножаются в условиях пониженного содержания кислорода. В некротизированных тканях в условиях гипоксии споры прорастают и образуют вегета­тивные формы. Газовая гангрена — токсинемическая инфекция, основными патогенетически­ми факторами которой являются гангренозные токсины и ферменты агрессии, повреждающие здоровые ткани и вызывающие тяжелую общую интоксикацию организма. Возбудители про­дуцируют экзотоксины, которые поступают в кровь, распространяются по организму по кро­веносным и лимфатическим сосудам и дости­гают мышечной ткани. Лецитиназа расщепляет лецитин, являющийся важным компонентом мембран клеток. Образующийся в результате биохимической активности клостридий газ рас­слаивает мышцы, а гиалуронидаза и коллагеназа увеличивают проницаемость тканей. Для поражений характерны некроз тканей с образованием газа с гнилостным запахом.

Иммунитет

Естественный иммунитет у человека к газовой гангрене отсутствует. Перенесенное заболевание не оставляет анти­токсического иммунитета, поскольку токсигенная доза гангренозных токсинов во много раз ниже иммуногенной дозы. Ведущая роль в за­щите от токсинов принадлежит антитоксинам.

Таблица 6. Схема бактериологического метода диагностики газовой гангрены

1 этап	1. Ориентировочная бактериоскопия Окраска по Граму: грам+ крупные палочки с центрально или субтерминально расположенной спорой Окраска по Цилю-Нильсену: споры-красные, вегетативные формы-синие Окраска по Бури-Гинсу: на темном фоне капсулы бактерий в виде бесцветных ободков вокруг красных бактерий 2. Посев исследуемого материала на среду Китта-Тароцци (помутнение и газообразование из-под кусочков печени)
2 этап	1. Посев на чашку Петри с сахарным кровяным агаром с целью получения изолированных колоний 2. Инкубация в анаэробных условиях при 37°С 3-4 суток
	1. Изучение культуральных свойств Сахарно-кровяный агар: C.perfringens — гладкие сероватые колонии с ровными краями и плотным возвышением в центре колонии, окруженные зоной полного или частичного гемолиза C.novyi — сероватые, полупрозрачные шероховатые колонии, окруженные зоной гемолиза C.septicum — сплошной нежный налет, переплетающиеся нити на фоне гемолиза C.hystolyticum — небольшие блестящие колонии с ровными краями и небольшой зоной гемолиза 2. Пересев на среду Китта-Тароцци и сахарно-кровяный столбик с целью выделения чистой культуры
3 этап	Идентификация чистой культуры по: морфологическим и тинкториальным свойствам (грам+ крупные палочки с центрально или субтерминально расположенной спорой) культуральным (строгие анаэробы, см. 2 этап) В глубине сахарно-кровяного столбика колонии имеют вид C.perfringens — комочки ваты (R-формы) или зерен чечевицы (S-формы) C.novyi — нежные хлопья ваты, разрыв среды вследствие продукции газа C.septicum — чечевицеобразные колонии C.hystolyticum — «пушинки» с уплотненным центром биохимической активности   Лактоза Сахароза Манит C.perfringens + + + C.novyi + — - C.septicum — — - C.hystolyticum — — - Тест-системы для изучения биохимической активности Api 20 A определение токсигенности (лецитиназная проба) биопроба: реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой

Лечение и профилактика

Лечение направлено на нейтрализацию гангренозных токсинов антитоксином; хирургическое удаление некротизированных тканей. Применяют антитоксические сыворотки, антибактериальную химиотерапию и гипербарическую оксигенацию.

При травмах проводится первичная хирургическая обработка раны, соблюдение правил асептики и антисептики при операциях, предупреждение травматизма.

Специфическая профилактика проводится планово и экстренно. Для создания искусственного активного иммунитета применяют секстанатоксин, в состав которого кроме столбнячного и ботулинического (А, В, Е) анатоксинов, входят анатоксины C.perfringens и C.oedematiens.

Таксономия и классификация

Род Clostridium семейства Bacillaceae отдела Firmicutes включает около 20 видов, которые играют роль в патологии человека: Clostridium perfringens, Clostridium novyi, Clostridium septicum — возбудители газовой анаэробной гангрены, Clostridium tetani — возбудитель столбняка, Clostridium botulinum — возбудитель ботулизма, Clostridium difficile является этиологическим фактором псевдомембранозного колита.

Нозологические формы

Столбняк (tetanus) — инфекционное заболевание, вызываемое C. tetani, характеризующееся поражением нервной системы, приступами тонических и клонических судорог, опосредованное нейротоксическим действием бактериального токсина. Столбняк часто поражает новорожденных при родах в антисанитарных условиях («пупочный столбняк»).

 

Антигенная структура

У C.tetani выявляют О-соматический и Н-жгутиковый антигены. По Н-антигену выделяют 10 сероваров. Все серовары продуцируют идентичные по антигенным свойствам тетаноспазмин и тетанолизин.

Биохимические свойства

Ферментативная активность низкая, отсутствуют цитохромы, цитохромоксидаза, каталаза, пероксидаза. Основные продукты метаболизма — уксусная, масляная, пропионовая кислоты и этанол. Большинство штаммов не обладает сахаролитической активностью, но выделено несколько штаммов, ферментирующих глюкозу. Проявляет слабые протеолитические свойства; медленно расщепляет белки и пептоны до аминокислот, последние разлагаются до угольной кислоты, аммиака, водорода, индола. Для роста необходимы аргинин, гистидин, тирозин, валин, триптофан и др. Образуют желатиназу и рениноподобный фермент, обусловливающий появление затемненных зон вокруг колоний на молочном агаре.

Факторы патогенности

Основные факторы патогенности — тетаноспазмин и тетанолизин.

· Тетаноспазмин — полипептид с дистантным механизмом действия; бактерии редко покидают первичный очаг инфицирования. Токсин фиксируется на поверхности отростков нервных клеток, проникает в них (за счет лигандопосредованного эндоцитоза) и посредством ретроградного аксонного транспорта попадает в ЦНС. Механизм действия связан с подавлением высвобождения тормозных нейромедиаторов в синапсах. Появляется в культурах на 2-е сутки, достигая пика образования к 5-7 дню.

· Тетанолизин (тетаногемолизин) обладает гемолитическим, кардиотоксическим и летальным действием. В патогенезе заболевания имеет менее важную роль. Накапливается в культурах через 20-30 часов

Патогенез

Входные ворота инфекции — бытовые и производственные травмы, причем наиболее часто поверхностные или колотые, когда больной не обращается за медицинс­кой помощью. Столбняк — токсинемическая инфекция, основным патогенетическим фак­тором которой является столбнячный ток­син. Возбудитель остается в ткани на месте входных ворот; продуцирует экзотоксин, ко­торый поступает в кровь и распространяется по организму по кровеносным и лимфатичес­ким сосудам, а также по нервным стволам, и достигает спинного и продолговатого мозга. Токсин фиксируется на поверхности отрос­тков нейронов, проникает в них за счет ли-ганд-опосредованного эндоцитоза и посредс­твом ретроградного аксонного транспорта попадает в ЦНС. Механизм действия токсина связан с подавлением высвобождения тормоз­ных нейромедиаторов, в частности глицина и у-аминомасляной кислоты, в синапсах (ток­син связывается с синаптическими белками синаптобревином и целлюбревином), в ре­зультате чего нарушается проведение импуль­сов по нервным волокнам. Первоначально токсин действует на периферические нервы, вызывая местные тетанические сокращения мышц. При столбняке поражается не только нервная система — в патологический процесс вовлекаются все системы организма.

Ведущие проявления — судорожный синдром, включающий болезненные сокращения мышц (тетанус) и длительное напряжение мыщц. К характерным признакам столбняка относят опистотонус — тетанический спазм, когда позвоночник и конечности согнуты, больно лежит на спине и опираеся на затылок и пятки и risus sardonicus (risus caninus) — подобие оскала, вызванного спазмом лицевых мышц.

Иммунитет

Естественный иммуни­тет у человека к столбняку отсутствует. Постинфекционный иммунитет, как прави­ло, не формируется, поскольку токсигенная доза столбнячного токсина во много раз ниже дозы иммуногенной и отмечаются повторные случаи заболевания.

Таблица 7. Схема бактериологического метода диагностики столбняка

1 день	1. Ориентировочная бактериоскопия (грам+ крупные палочки с терминально расположенной спорой «барабанные палочки») 2. Посев исследуемого материала на среду Китта-Тароцци (среду накопления), инкубация 3-4 суток (придонный рост бактерий)
3-4 день	1. Посев на чашку Петри с сахарным кровяным агаром и пробирку с высоким столбиком сахарного МПА. 2. Инкубация в анаэробных условиях при 37°С
4-5 день	1. Изучение культуральных свойств Сахарно-кровяный агар: нежные прозрачные колонии, окруженные малозаметной зоной гемолиза   Высокий столбик сахарного МПА: формирует колонии в виде «чечевичек» (R-формы) или «пушинок» с плотным коричневым центром (S-формы), возможны разрывы среды из-за газообразования 2. Пересев на среду Китта-Тароцци с целью выделения чистой культуры
5-7 день	Идентификация чистой культуры по: морфологическим и тинкториальным свойствам (крупные грам+ палочки с терминально расположенной спорой «барабанные палочки») культуральным (строгие анаэробы, на сахарно-кровяном агаре нежные прозрачные колонии, окруженные малозаметной зоной гемолиза) биохимической активности (сахаролитическая активность отсутствует, протеолитическая активность слабая (образование индола) определение токсигенности (реакция преципитации в геле, ИФА) биопроба: реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой с учетом на белых мышах

Биопроба проводится с целью выявления столбнячного токсина. Для этого материал измельчают, добавляют двойной объем физиологического раствора для экстракции токсина и фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат смешивают с антитоксической сывороткой и инкубируют в течение 40 минут. Затем одной группе животных (белые мыши) вводят полученный фильтрат, а другой группе смесь фильтрата с антитоксической сывороткой. При наличии в исследуемом материале C.tetani у животных первой группы развиваются симптомы столбняка (ригидность мышц хвоста и задних конечностей). В настоящее время биопроба практически не применяется.

Лечение и профилактика

Для специфической терапии с целью нейтрализации токсина используют иммуноглобулин противостолбнячный человека (курс 2-3 инъекции в зависимости от тяжести). Введение начинают при появлении первых симптомов и продолжают до исчезновения судорог. Одновременно проводят антибиотикотерапию:

· I Пенициллины (бензилпенициллин), цефалоспорины

· II Тетрациклины (доксициклин), аминогликозиды, макролиды, фторхинолоны

· III Метронидазол

В комлексной терапии используют седативные препараты, миорелаксанты, гипероксигенацию тканей.

Плановая иммунизация. Начинают с 3-5 месячного возраста столбнячным анатоксином, чаще всего в комбинации с другими микробными антигенами в составе АКДС-вакцины (столбнячный и дифтерийный анатоксины и коклюшные палочки). Вакцинацию проводят по стандартной схеме, а затем проводят ревакцинацию каждые 5-10 лет.

Экстренная иммунизация. Проводят при ранениях, травмах. В зависимости от предшествующей вакцинации проводится либо пассивная иммунизация (однократное введение 3000 МЕ антитоксической сыворотки) либо активно-пассивная иммунизация (вводят столбнячный анатоксин и через 30 минут в другое место вводят 3000 МЕ антисыворотки или 950 МЕ иммуноглобулина).

Таксономия и классификация

Clostridium botulinum — возбудитель ботулизма относится к роду Clostridium семейства Bacillaceae отдела Firmicute

Нозологические формы

Ботулизм (от лат. botulus, колбаса) — острая пищевая токсикоинфекция, протекающая с преимущественным поражением центральной и вегетативной нервной системы.

Возбудитель вызывает заболевание ботулизм (классическая пищевая токсикоинфекция), раневой ботулизм (возникает при загрязнении некротизированных тканей почвой), ботулизм новорожденных (развивается у детей от 3 до 20 нед при заглатывании спор с последующим их прорастанием), неопределенно классифицируемый (у детей старше 1 года и взрослых, не связанных с пищей и ранами).

Антигенная структура

У C.botulinum выявляют О-типоспецифический соматический и Н-группоспецифический жгутиковый антигены. Серологическая идентификация C.botulinum основана на выявлении токсинов. В зависимости от структуры выделяют 8 сероваров: A, B, C_1(α), C_2(β), D, E, F и G.

Биохимические свойства

В зависимости от биохимических свойств выделяют четыре группы бактерий (табл.8).

Группа	Биохимические свойства
Бактерии I группы	проявляют выраженные протеолитические свойства, гидролизуют желатин и эскулин, ферментируют глюкозу и мальтозу; проявляют липазную активность на яичном агаре
Бактерии II группы	проявляют сахаролитическую активность (глюкоза, мальтоза и др.), но лишены протеолитической активности
Бактерии III группы	проявляют липазную активность и гидролизуют желатин
Бактерии IV группы	гидролизуют желатин, но не проявляют сахаролитических свойств

Факторы патогенности

Патогенность обус­ловлена сильным экзотоксином, чувстви­тельность к которому различна у человека и животных. Человек наиболее чувствителен к токсинам типов А, В, Е. Ботулотоксин — белок, про­являющий нейротоксическое действие, молекуляр­ная масса может варьировать от 60 до 150 кДа. Ботулотоксин является самым сильным ядом, известным человеку. По расчетным данным, 1 г кристаллического токсина содержит 10¹² смертель­ных для человека доз токсина. Токсины всех типов проявляют гемолизирующее действие. Оптимальная температура для токсинообразования вариабельна: для бактерий типов А, В, С и D — 35 °С, для бактерий типов Е и F — 28-30 °С. Токсины сорбируются на клетках слизистой оболочки кишечника, проникают в кровь (где их можно выявить серологически) и в периферические нервные окончания. Экзотоксины — Zn²⁺-зависимые эндопептидазы, оказывающие нейротоксическое действие. При протеолизе молекула токсина разлагается на две связанных дисульфидной связью фрагмента (L-и H-цепи). Токсин разрушается при кипячении; легко кристаллизуется в белый порошок. Токсины всех типов также обладают гемолизирующим действием. Между собой токсины различаются антигенной структурой и молекулярной массе.

Патогенез

Ботулизм — токсинемическая инфекция; основным патогенетическим фак­тором является токсин, который поступает в кровь и распространяется по организму по кровеносным сосудам. Фармакокинетическая активность токсинов различных типов прак­тически одинакова, они сорбируются на клет­ках слизистой оболочки кишечника, прони­кают в кровь и в периферические нервные окончания. Действие токсина включает свя­зывание Н-цепи с мембраной, поглощение токсина и формирование пор в синаптических пузырьках (каждую пору формируют 4 моле­кулы токсина), что приводит к блокированию слияния синаптических пузырьков с мембра­ной, высвобождению ацетилхолина и развитюе вялых параличей (мишень для действия — интегральные синаптические белки). В частности, токсины серотипов В, D, F расщепляют синаптобревин, А и Е — SNAP-25, С — синтаксин, D и F — целлюбревин. Избирательно поражают α -моторные нейроны передних рогов спин­ного мозга, что обусловливает характерные параличи мышц.

Инкубационный период обычно составляет 24 ч, но может варьировать от 4-6 до 96 ч и более. Проявления зависят от природы продукта, ставшего причиной отравления, количества накопившегося в нем и поступившего в организм токсина, состояния больного. Первые, но непостоянные симптомы — расстройства ЖКТ (тошнота, рвота, боли в животе). Часто больные жалуются на сухость во рту или гиперсаливацию. Одновременно развиваются головная боль и нервно-паралитические явления — нарушение глотания (дисфагия), офтальмоплегический синдром: диплопия (двоение в глазах), птоз (опущение век), анизокория (поражение сфинктера зрачка). Затем возникает парез и паралич мышц шеи, конечностей, дыхательной мускулатуры и сердечной мышцы, в результате чего наступает смерть.

Иммунитет

После перенесенного заболевания в сыворотке крови обнаруживаются антитела к токсину и к бактериям, что свидетельствует о комплексном характере иммунного ответа. Естественный иммунитет после перенесенного заболевания отсутствует, поскольку токсигенная доза ботулотоксина во много раз ниже иммуногенной (6 кг ботулотоксина способны убить все человечество). Чувствительность к ботулиническому токси­ну у различных животных подвержена резким колебаниям. Абсолютно резистентные виды неизвестны, но всеядные животные обладают меньшей чувствительностью.

Таблица 9. Схема бактериологического метода диагностики ботулизма

I этап	1 день	Посев исследуемого материала на среду Китта-Тароцци (среду накопления) или сразу на сахарно-кровяной агар и высокий столбик сахарного МПА, инкубация в анаэробных условиях 37°С
	2 день	1. Изучение культуральных свойств Сахарно-кровяный агар: неправильной формы колонии с отростками или ровными краями, окруженные зоной гемолиза Высокий столбик сахарного МПА: в виде комочков ваты или чечевицы 2. Пересев на среду Китта-Тароцци с целью выделения чистой культуры
II этап	3 день	1. Идентификация чистой культуры по: · морфологическим и тинкториальным свойствам (крупные грам+ палочки с субтерминально расположенной спорой — «теннисные ракетки») · культуральным (строгие анаэробы, на сахарно-кровяном агаре неправильной формы колонии с отростками или ровными краями, окруженные зоной гемолиза; в высоком столбике сахарного МПА колонии в виде комочков ваты или чечевицы · токсигенности и типу токсина (используют биопробу на мышах с поливалентной антитоксической сывороткой и для определения типа токсина с моновалентными сыворотками; ИФА и РПГА для определения типа токсина)

Лечение и профилактика

Наиболее эффективно раннее применение соответствующей антитоксической сыворотки. До установления типа токсина используется поливалентная (А, В, С, Е) лошадиная (гетерологичная) антисыворотка, которую вводят по методу Безредко. После лабораторного определения типа токсина вводят антисыворотку соответствующего типа. Одновременно проводят антибактериальную (пенициллины и др.) и симптоматическую терапию.

Для специфической профилактики используют ботулинический полианатоксин, входящий в состав комплексной вакцины для профилактики анаэробных инфекций. Однако в силу спорадичности данного заболевания иммунопрофилактика ботулизма не нашла широкого применения.

В основе профилактики ботулизма лежит неукоснительное соблюдение санитарно-гигиенических правил при производстве пищевых продуктов. При производстве консервированных продуктов необходимо соблюдать условия стерилизации консервов и их хранения, исключающие накопление токсина, а также использование ингибиторов (нитриты, органические кислоты).

Неспорообразующие анаэробы

Неспорообразующие анаэробные бактерии имеющие отношение к заболеваниям человека представлены грамположительными бактериями родов Peptococcus, Peptostreptococcus, Actinomyces; грамнегативными родов Bacteroides, Porphyromonas, Prevotella, Fusobacterium, Veillonella и др. Некоторые виды потенциально способны вызывать патологические процессы, поэтому они называются условно-патогенными. Инфекции, вызываемые анаэробными бактериями, носят эндогенный характер, и их наиболее часто вызывают ассоциации нескольких видов бактерий. Факторы, предрасполагающие к развитию подобных поражений, включают нарушения целостности кожных покровов и СО, травмы, хирургические вмешательства, нарушение правил проведения внутривенных вливаний и т.п.

Род Peptococcus

Морфологические и тинкториальные свойства. В мазках, окрашенных по Граму пептококки выглядят также как стафилококки — неправильные группы грамположительных кокков, напоминающие гроздья винограда; неподвижны, спор, капсул не образуют. Типовой (единственный) вид Peptococcus niger.

Культуральные свойства. Строгие анаэробы, нуждаются в обогащенных питательных средах (5% кровяной Шедлер агар и др.). На кровяном агаре в анаэробных условиях через 48 часов образуют мелкие, выпуклые, блестящие, полупрозрачные или мутные колонии черного цвета. Температурный оптимум роста 37°С.

Антигенные свойства. Изучены недостаточно. Антигенными свойствами обладают пептидогликан и тейхоевые кислоты клеточной стенки.

Биохимические свойства. Инертны по отношению к углеводам, энергию получают расщеплением пептонов. Обычно каталаза-отрицательны, не восстанавливают нитраты, не образуют индол.

Медицинское значение. Вызывают гнойно-воспалительные заболевания различных биотопов организма человека, чаще всего в ассоциации с другими условно-патогенными микроорганизмами. Эти заболевания носят эндогенный характер.

Факторы патогенности. Изучены недостаточно, связаны со способностью к адгезии (адгезины), продукцией гиалуронидазы и коллагеназы.

Микробиологическая диагностика. Основные методы бактериоскопический и бактериологический (см. схему).

Лечение. Использование антибактериальной химиотерапии.

Профилактика. Укрепление местного и общего иммунитета.

Род Peptostreptococcus

Морфологические и тинкториальные свойства. Представлены неподвижными грамположительными кокками или коккобациллами, образующими короткие цепочки. Способны образовывать капсулу. Спор не образуют. Типовой вид Peptostreptococcus anaerobius.

Культуральные свойства. Строгие анаэробы, нуждаются в обогащенных питательных средах (5% кровяной Шедлер агар и др.). На кровяном агаре в анаэробных условиях через 48 часов образуют мелкие, выпуклые, блестящие, полупрозрачные или мутные колонии с зоной α-гемолиза или без него. Температурный оптимум роста 37°С. Колонии P.anaerobius имеют характерный сладковатый запах, бактерии чувствительны к анетолсульфонату натрия, что используется для их дифференциации с помощью дисков.

Антигенные свойства. Изучены недостаточно. Антигенными свойствами обладают пептидогликан и тейхоевые кислоты клеточной стенки.

Биохимические свойства. Хемоорганотрофы, некоторые виды способны ферментировать углеводы, восстанавливать нитраты и образовывать индол. Обычно каталаза-отрицательны.

Медицинское значение. Вызывают гнойно-воспалительные заболевания различных биотопов организма человека (челюстно-лицевой области, кишечника, легких, матки и др.), чаще всего в ассоциации с другими условно-патогенными микроорганизмами. Эти заболевания носят эндогенный характер.

Факторы патогенности. Изучены недостаточно, связаны со способностью к адгезии (адгезины и наличие капсулы), продукцией гемолизинов, гиалуронидазы и коллагеназы.

Микробиологическая диагностика. Основные методы бактериоскопический и бактериологический (см. схему).

Лечение. Использование антибактериальной химиотерапии (препараты выбора — клиндамицин, левомицетин, имипенем и метронидазол).

Профилактика. Укрепление местного и общего иммунитета.

Род Veillonella

Распространенность и устойчивость в окружающей среде. Бактерии являются частью анаэробной микрофлоры слизистых оболочек полости рта, носоглотки и кишечника. При попадании в кислородные условия мгновенно погибают. Чувствительны к действию антисептиков, дезинфектантов и антибактериальных препаратов (клиндамицину и метронидазолу).

Морфологические и тинкториальные свойства. Неподвижные грамотрицательные кокки диаметром 0,3-0,5 мкм. В мазках располагаются парами, беспорядочными скоплениями или короткими цепочками. Типовой вид — Veillonella parvula.

Культуральные свойства. Строгие анаэробы. Оптимальная температура роста 30-37°С, оптимум рН 6,5-8,0. На молочном агаре образуют звездчатые блестящие колонии диаметром 1-3 мм.

Антигенные свойства. Изучены недостаточно, связаны с липополисахаридом клеточной стенки.

Биохимические свойства. Хемоорганотрофы; расщепляют пируват, лактат, малат, фумарат, оксалоацетат. Каталазоотрицательны, не гидролизуют желатин, не сворачивают молоко, не образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты. При ферментации лактата образуют ацетат, пропионат, углекислый газ и водород.

Медицинское значение. Вызывают гнойно-воспалительные заболевания челюстно-лицевой области, носоглотки, кишечника только в ассоциации с другими условно-патогенными микроорганизмами.

Факторы патогенности. Изучены недостаточно, возможно, патогенность обусловлена наличием эндотоксина.

Микробиологическая диагностика. Основные методы бактериоскопический и бактериологический (см. схему).

Лечение. Использование антибактериальной химиотерапии (препараты выбора — клиндамицин, левомицетин, имипенем и метронидазол).

Профилактика. Укрепление местного и общего иммунитета.

Лечение. Использование антибактериальной химиотерапии (препараты выбора — клиндамицин и метронидазол).

Профилактика. Укрепление местного и общего иммунитета.

Род Bacteroides

Представлен вариабельными по своим размерам грамотрицательными палочками, обладающими высокой степенью полиморфизма.

Распространенность и устойчивость в окружающей среде. Бактероиды являются представителями нормальной микрофлорой толстой кишки. При попадании в кислородные условия мгновенно погибают. Чувствительны к действию антисептиков, дезинфектантов и антибактериальных препаратов (метронидазол, левомицетин и имипенем). Резистентны к пенициллинам и цефалоспоринам I и II поколения.

Морфологические и тинкториальные свойства. В мазках из клинического материала представлены бледными полиморфными палочками с закругленными концами, по Граму окрашиваются неравномерно. Большинство видов неподвижны, спор не образуют. Некоторые виды образуют капсулу. Типовой вид — Bacteroides fragilis.

Культуральные свойства. Облигатные анаэробы; хемоорганотрофы. Оптимальная температура роста 30-37°С. Культивируется на анаэробном кровяном агаре, тиогликолевой среде. Добавление гемина и менадиона (витамин К) стимулирует рост культуры. На кровяном агаре B.fragilis образует серовато-белые, прозрачные или мутноватые мелкие S-формы без зоны гемолиза. Основные признаки бактероидов — способность расти в присутсвии 20% желчных солей, резистентность к канамицину (100 мкг), ванкомицину (5 мкг) и колистину (10 мкг).

Антигенные свойства. Содержат соматический О-антиген, подвижные виды могут иметь Н-жгутиковый и К-капсульный антигены.

Биохимические свойства. Хемоорганотрофы. B.fragilis расщепляет глюкозу, лактозу, сахарозу с образованием кислоты. Гидролиз желатины выражен слабо, не образует индол, образует сероводород, не гидролизует гиппурат (родовой признак); не вызывает гемолиза.

Медицинское значение. Бактероиды редко вызывают моноинфекции, гораздо чаще они обусловливают смешанные поражения, вызванные ассоциациями с анаэробными стрептококками, фузобактериями и др. Основные поражения — абсцессы в основном органов брюшной полости.

Факторы патогенности. Патогенез поражений, вызванных бактероидами, включает адгезию к поверхности эпителия и выделение различных продуктов, повреждающих его. B.fragilis секретирует нейраминидазу, гиалуронидазу и фибринолизин. Микроорганизм снабжен капсулой и способен выделять супероксид дисмутазу, защищающие его от вне-и внутриклеточных микробицидных факторов фагоцитов. Все бактероиды содержат эндотоксин, отличающийся по структуре от ЛПС других грамотрицательных бактерий.

Микробиологическая диагностика. Основные методы бактериоскопический и бактериологический (см. схему).