Фитопатологическая экспертиза семян древесных пород.

Задачей фитоэкспертизы является определение видового состава паразитических и сапрофитных микроорганизмов. Установление заражённости семян даёт возможность выбрать наиболее эффективный фунгицид для снижения инфекционного фона.

При определении заражённости семян необходимо установить внешнюю и внутреннюю инфекцию. Внешняя инфекция определяется макроскопическим методом путём визуального осмотра семян. Внутренняя инфекция устанавливается методом влажной камеры (ГОСТ 13056.5-76).

 

Порядок работы

 

1. Из исходного образца семян выделяют один средний образец и из разных мест среднего образца для определения внешней заражённости семян отбирают не менее 500 семян. Из них на анализ выделяют по 100 семян для всех видов клёна, ясеня, ильмовых, бука и по 200 семян для остальных пород.

2. При анализе семян лиственных пород (берёза, дуб, ольха, тополь и др.) и хвойных (ель, сосна, пихта, кедр, лиственница) определяют внешние признаки поражения семян болезнями (деформация, мумификация, ржавчина, плесень).

3. Заражённые семена взвешивают и учитывают в процентах от массы навески.

4. Для определения внутренней заражённости семян из разных мест среднего образца берут не менее 200 семян и из них выделяют 100 семян.

5. Отобранные семена дезинфицируют в растворе 2%-ного марганцево-кислого калия в течение 1-5 минут, затем многократно промывают дистиллированной водой. Семена можно также стерилизовать этиловым спиртом путём погружения семян в спирт на одну минуту.

6. Простерилизованные семена раскладывают в чашки Петри в микробиологическом боксе или на лабораторном столе с предварительной дезинфекцией поверхности стола спиртом. В каждую чашку Петри стерильным пинцетом, слегка приоткрыв чашку, раскладывают 100 семян на расстоянии друг от друга не менее 0.5-1 см (крупные семена - от 10 до 50 шт.). Фильтровальную бумагу в чашках Петри увлажняют дистиллированной водой (не менее 1 мм.)

7. На верхней стороне чашки карандашом по стеклу указывают номер образца и дату раскладки семян. Подготовленные чашки помещают на 7-10 дней в термостат с температурой 25-26°С.

8. Через неделю просматривают каждую чашку Петри. Для идентификации объекта необходимо приготовить временные препараты. На хорошо вымытое и высушенное предметное стекло наносят каплю дистиллированной воды и помещают в неё спороношение возбудителя с помощью препаровальной иглы. Препарат накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом сначала при малом, а затем при большом увеличении.

9.  Диагностика факультативных паразитов базируется на окраске мицелия, строении конидиеносцев, форме конидий (приложение).

10. Учёт заражённости семян каждым патогеном проводят отдельно в процентах от количества разложенных семян. Заражённость сапрофитными грибами учитывают по степени встречаемости:                      единичная – до 5% заражённых семян, слабая – до 25%, средняя – до 50%,                                                                                                                                                                                                                                                                                               Полученные данные заносят в таблицу, а затем в бланки: «Результат анализа семян №…...», «Удостоверение о кондиционности семян №…». 

 

№ образца	Проанали-зировано семян		Поражено по родам
			Fusarium		Alternaria		Aspergillus		и т.д.
	шт.	%	шт.	%	шт.	%	шт.	%	шт.	%

Fusarium sp. – мицелий от нежно–розового до ярко–малинового или оранжевого цвета, очень тонкий, нежный, пушистый, быстро разрастающийся. Микроконидии одноклеточные, реже- с 1-2-мя перегородками, овальные, яйцевидные или грушевидные. Макроконидии с 3-9 перегородками, разные формы, кривизны и изогнутости.

Alternaria sp. - налёт тёмно–оливковый, состоящий из конидиеносцев и конидий. Конидии оливковые или чёрно–бурые, обратно - булавовидные в цепочках с 3-6 поперечными перегородками и с одной или несколькими продольными перегородками, форма цилиндрическая или овальные.

Aspergillus sp. – на семенах образуются тёмный мицелий в виде колоний, на которых в лупу или под микроскопом можно увидеть маленькие тёмные, порошащие головки. Конидиеносцы с ножкой, почти бесцветной, но чаще жёлтой, с шаровидным, толстостенным вздутием, несущим на своей поверхности радиально расположенные стеригмы. Они одноярусные, но чаще двухярусные. Конидии шаровидные, гладкие, коричневые или бурые.

Penicillium sp. – на семенах при повышенной влажности появляется плесневидный налёт зелёно-сизого цвета. Мицелий бесцветный, с возрастом иногда темнеющий. Конидиеносцы бесцветные, септированные, прямостоячие, в верхней части мутовчато-разветвлённые или образуют характерно построенную кисточку, несущую на конечных разветвлениях цепочки конидий. Конидии одноклеточные, круглые или овальные, в массе – большей частью зеленоватого цвета.

Mucor sp. – на семенах широко распространяющийся паутинный налёт, на котором невооружённым глазом или в лупу можно заметить отдельные тёмные головки – спорангии гриба. Мицелий бесцветный, состоящий из сильно разветвлённых толстых гиф. Спорангий заключает в себе большое число округлых, угловатых или овальных спор. Споры белые или дымчатые с бесцветной, гладкой оболочкой. 

Rhizopus sp. – мицелий вначале паутинистый, затем- ватообразный, белого или сероватого цвета. Спорангиеносцы коричневые, почти чёрные, расположены группами на узлах столонов, откуда развиваются ризоиды. Спорангии шарообразные, споры угловатые, продольно исчерченные, тёмные, обычно чёрно-серые.

Trichoderma sp. – мицелий бесцветный, распростёртый, быстро растущий. Дерновинки с конидиеносцами подушечковидные, более или менее выпуклые, сначала белые, иногда жёлто-зелёные, позже тёмно-зелёные. Конидиеносцы в виде боковых ответвлений вильчато или тройчато разветвлённые. Стеригмы бутылковдные или конусовидные, расположены мутовочками по две-три или одиночно. Конидии округлые, скученные в головки, в массе жёлто-зелёные. В гифах иногда образуются хламидоспоры.

Trichothecium sp. – на семенах розоватая плесень, гифы стелющиеся, ветвящиеся, септированные. Конидиеносцы удлиненные, не разветвлённые, на вершине немного вздутые. Конидии грушевидные, двуклеточные, нередко с перетяжкой на перегородке, к основанию немного вытянутые, в массе розовые.

Cladosporium sp. – мицелий тёмно-оливковый, дерновинки бархатистые, зеленоватые, оливковые, черноватые, часто сливающиеся. Конидиеносцы обычно простые, бурые или оливковые. Конидии продолговатые, яйцевидные или циллиндрические, большей частью одноклеточные, продолговатые и тогда с 1-4 поперечными перегородками, грязновато-бурые или оливковые.

Cephalosporium sp. – колонии вначале белые, затем розоватые или красноватые. Гифы тонкие, слабосептированные, бесцветные. Конидиеносцы прямостоящие, несептированные, неразветвлённые. Конидии на концах конидиеносцев многочисленные, яйцевидные, эллипсоидальные или продолговатые, почти бесцветные или светло-розовые, собранные в склеенные слизью шаровидные головки.

Helmintosporium sp. – семена покрываются чёрным налётом, состоящим из спороношения гриба. Конидиеносцы одиночные или в пучках по 2-3, бурые, обычно с 5-8 перегородками. Конидии веретенообразные, слегка изогнутые, тёмно-оливковые, с 2-13 перегородками, на концах закруглены, конидии одиночные или, чаще, по 2-3 на конидиеносце. 

Bothrytis sp. – мицелий хорошо развитый, септированный, образует густой сероватый налёт. Конидиеносцы одиночные, древовидноразветвлённые, коричневые или оливковые, иногда собраны в группы. Конидии в виде головок на конце конидиеносцев, одноклеточные, яйцевидные, бесцветные, реже дымчатые.

Verticillium sp. – мицелий хорошо развитый, септированный, вначале белый, затем оливковый. Конидиеносцы мутовчаторазветвлённые с 6-8 заострёнными конечными ветвями. Конидии одноклеточные, эллипсоидальные, бесцветные, затем коричневые.

Помимо вышеуказанных методов, для определения наружной инфекции семян можно использовать метод центрифугирования. Суспензию, полученную при смыве 100 семян, центрифугируют, микроскопируют и определяют споровую нагрузку на одно семя. Для определения внутренней инфекции семена можно высевать на твёрдые питательные среды (кислый картофельный агар, среда Чапека, агаризированное пивное сусло).

 

Для зачёта предъявить преподавателю:

 

1) записи в лабораторной тетради;

2) заражённые семена отдельно по видам возбудителя;

3) запись в карточке анализа семян.

 

Материалы и оборудование

 

1. Стерильные чашки Петри…………………………………..1 шт.

2. Стерильная фильтровальная бумага

3. Предметные стёкла ………………………………………….4 шт.

4. Покровные стёкла……………………………………………4 шт.

5. Препаровальные иглы……………………………………….4 шт.

6. Скальпели…………………………………………………….4 шт.

7. Пинцеты ……………………………………………………..4 шт.

8. Этиловый спирт……………………………………………...10 мл

9.  2%-ный раствор марганцево-кислого калия……………...100 мл

10.  Микроскопы………………………………………………….1 шт.

11.  7^x и 10^x – кратные лупы……………………………………...4 шт.

12. Термостат……………………………………………………..1 шт.

13. Весы……………………………………………………………1 шт.

14. Карточки анализа……………………………………………..4 шт.

15.  ГОСТы………………………………………………………..4 шт.

 

 

 

Рекомендуемая литература

1. Медведев А.Н., Бессчетнов В.П., Кентбаев В.Ж. Лесосеменное дело. Учебно-методическое пособие к лабораторным занятиям для студентов очного и заочного отделения по специальности 4702 – Лесное и садовое хозяйство. – Алматы, 1998. – 30 с.

2. Грибков В.В. Методические указания к лабораторным работам по лесосеменному делу. М., 1973.

3. Семена деревьев и кустарников. Правила отбора образцов и методы определения посевных качеств семян. ГОСТ 13056.1 – 67 – ГОСТ 13056.4 – 67, ГОСТ 13056.5 – 76, ГОСТ 13056.6 – 75, ГОСТ 13056.7 – 68, ГОСТ 13056.11 – 68.

4. Справочник по лесосеменному делу /Под общей редакцией Новосельцевой А.И. – Лесная промышленность, 1978.

5. Указания по лесному семеноводству в Российской Федерации. М., 2000.

6. Брановицкий М.Л., Булыгина Р.В., Колпиков Н.М. Лесосеменное дело: Лабораторный практикум по разделу курса «Лесные культуры» для студентов лесохозяйственного факультета (специальность 1512). – Л., 1979.

 

Приложения 1

П А С П О Р Т

Составлен________________________________________20   г. на партию

семян___________________________________________________________

весом___________________________________________________________

1. Данная партия семян заготовлена_________________________________

________________________________________________________________

2. Почтовый адрес хозяйства_______________________________________

3. Телеграфный адрес хозяйства____________________________________

4. Время сбора семян, плодов, шишек_______________________________

5. Место сбора семян, плодов или шишек (лесхоз, лесничество, дача, квартал, лесосека, семенной участок, плантация, парк, аллея и др.)____

________________________________________________________________

6.Таксационная характеристика насаждения, плантации, участка:

состав, бонитет, тип леса___________________________________________

группа возраста_________________________________________________________

селекционная группа______________________________________________

Лесоводственная ценность семян____________________________________

7.Кем и когда проводились предварительные обследования насаждения перед массовой заготовкой семян, шишек или плодов____________________

_________________________________________________________________

8. Каким способом и когда извлекались семена из шишек, тип шишкосушилки, температура_________________________________________

9.Каким способом и с применением, каких механизмов обескрылены и очищены хвойные семена____________________________________________

10. Каким способом извлекались семена из сухих и сочных плодов,___________________________________________________________

каким способом очищались семена___________________________________

11. Когда закончена очистка семян____________________________________

12. Где хранятся семена_____________________________________________

13. В какой таре хранятся семена_____________________________________

14.В счет плана, какого года заготовлены семена________________________

15. Для какой цели заготовлены семена________________________________

 

                          М.П.       Должность и подпись лица, ответственного

                                              за составление паспорта

 

 

Этикетка

 

1. Видовое название породы________________________________________

2. Лесоводственная ценность семян__________________________________

3. Название хозяйства (организация)__________________________________

________________________________________________________________

4. Год и месяц заготовки____________________________________________

5.Номер и дата паспорта____________________________________________

6. Первоначальный вес партии_______________________________________

7. Число мест и вид тары____________________________________________

8. Порядковый номер тары__________________________________________

9. Вес семян в данной таре__________________________________________

10.  Номер удостоверения о кондиционности семян и дата его выдачи____________класс качества семян____________срок действия__________

 

 

                  М.П.                     Должность и подпись лица,

                                                    Ответственного за хранение семян

 

 

АКТ №________

отбора средних образцов для определения качества семян, принадлежащих ___________________________________________________________________________

(название хозяйства, организации)

___________________________________________________________________________

(район, область, республика)

20____г. _____________________________ мною, уполномоченным по отбору образцов

                             (месяц, число)

___________________________________________________________________________

(должность, хозяйство, организация)

___________________________________________________________________________

(фамилия, имя, отчество)

при участии ________________________________________________________________

(фамилия, имя, отчество, должность каждого)

произведён осмотр семян и отбор средних образцов от следующих партий, хранящихся _________________________________________________________________

(место хранения, хозяйство, организация)

 

Номера по порядку	Видовое название пород	Год урожая семян	В счёт плана какого года заготовлены семена	Номер партии семян	Масса партии семян, кг.	Вид тары и номера мест отдельно по каждой партии семян	Номер и дата копии паспорта	Откуда и когда получены семена	Масса среднего образца, г.	Который раз семена подвергают анализу	Номер и дата последнего документа о качестве семян и наименование лесосеменной станции, выдавшей этот документ
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12

 

Образцы семян направлены на __________________________________________

                                                                                   (название лесосеменной станции)

Отбор образцов семян по ГОСТ_____ 13056.1-67________