Вакцины. Классификация, получение и очищение

Вакцины — это иммунобиологические препараты, приготовленные из живых или убитых микробных клеток, их токсинов или протективных антигенов, которые применяются для профилактики, лечения и диагностики инфекционных заболеваний. Формируется искусственный активный иммунитет. В качестве Аг в вакцинных препаратах выступают: цельные микробные тела (живые или убитые); отдельные Аг микроорганизмов (наиболее часто протективные Аг); токсины микроорганизмов; •искусственно созданные Аг микроорганизмов; Аг, полученные методами генной инженерии.

Живые вакцины – препараты в которых в качестве действующего начала используются:аттенуированные, т.е. ослабленные (потерявшие свою патогенность) штаммы  микроорганизмов; так называемые дивергентные штаммы непатогенных микроорганизмов, имеющих родственные антигены с антигенами патогенных микроорганизмов; рекомбинантные штаммы микроорганизмов, полученные генно-инженерным способом (векторные вакцины).

Инактивированные вакцины – приготовлены из убитых микробных тел либо метаболитов, а также отдельных антигенов, полученных биосинтетическим или химическим путем. Эти вакцины проявляют меньшую (по сравнению с живыми) иммуногенность, что ведет к необходимости многократной иммунизации, однако они лишены балластных веществ, что уменьшает частоту побочных эффектов.

Генно-инженерные вакцины содержат антигены возбудителей, полученные с использованием методов генной инженерии, и включают только высокоиммуногенные компоненты, способствующие формированию иммунного ответа.

Пути создания генно-инженерных вакцин: 1. Внесение генов вирулентности в авирулентные или слабовирулентные микроорганизмы (см. векторные вакцины).2. Внесение генов вирулентности в неродственные микроорганизмы с последующим выделением антигенов и их использованием в качестве иммуногена. 3. Искусственное удаление генов вирулентности и использование модифицированных организмов в виде корпускулярных вакцин.

Молекулярные вакцины – это препараты, в которых антиген представлен метаболитами патогенных микроорганизмов, чаще всего молекулярных бактериальных экзотоксинов – анатоксинов. Анатоксины – токсины, обезвреженные формальдегидом (0,4%) при 37-40 ºС в течение 4 нед., полностью утратившие токсичность, но сохранившие антигенность и иммуногенность токсинов и используемые для профилактики токсинемических инфекций (дифтерии, столбняка, ботулизма, газовой гангрены, стафилококковых инфекций и др.).

Ассоциированные препараты – для одномоментного создания множественной невосприимчивости, в этих препаратах совмещаются антигены нескольких микроорганизмов (как правило убитых). Наиболее часто применяются: адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС-вакцина), тетравакцина (вакцина против брюшного тифа, паратифов А и В, столбнячный анатоксин), АДС-вакцина (дифтерийно-столбнячный анатоксин).

Требования: иммуногенность, низкая реактогенность (аллергенность), не вызывать онкозаболевания, генетическая стабильность штаммов, из которых изготовлена вакцина, длительный срок хранения, технологичность производства, простота и удобство в применении.

 

 

 

31.

Аллергические пробы - биологические реакции для диагностики ряда заболеваний, основанные на повышенной чувствительности организма, вызванной аллергеном.

При многих инфекционных заболеваниях за счет активации кле­точного иммунитета развивается повышенная чувствительность организма к возбудителям и продуктам их жизнедеятельности. На этом основаны аллергические пробы, используемые для диагно­стики бактериальных, вирусных, протозойных инфекций, мико­зов и гельминтозов. Аллергические пробы обладают специфично­стью, но нередко они бывают положительными у переболевших и привитых.

Все аллергические пробы подразделяют на две группы — про­бы in vivo и in vitro.

К первой группе {in vivo) относятся кожные пробы, осуществ­ляемые непосредственно на пациенте и выявляющие аллергию немедленного (через 20 мин) и замедленного (через 24 — 48 ч) типов.

Аллергические пробы in vitro основаны на выявлении сенсиби­лизации вне организма больного. Их применяют тогда, когда по тем или иным причинам нельзя произвести кожные пробы, либо в тех случаях, когда кожные реакции дают неясные результаты.

Для проведения аллергических проб используют аллергены — диагностические препараты, предназначенные для выявления специфической сенсибилизации организма. Инфекционные ал­лергены, используемые в диагностике инфекционных заболева­ний, представляют собой очищенные фильтраты бульонных куль­тур, реже взвеси убитых микроорганизмов или АГ, выделенные из них.

Кожные пробы. Инфекционные аллергены вводят, как правило, внутрикожно или накожно, путем втирания в скарифицированные участки кожи. При внутрикожном способе в среднюю треть передней поверхно­сти предплечья специальной тонкой иглой вводят 0,1 мл аллерге­на. Через 28 — 48 ч оценивают результаты реакции ГЗТ, определяя на месте введения размеры папулы.

Неинфекционные аллергены (пыльца растений, бытовая пыль, пищевые продукты, лекарственные и химические препараты) вводят в кожу уколом (прик-тест), накожно путем скарификации и втирания или внутрикожной инъекцией разведенного раствора аллергена. В качестве отрицательного контроля используют ИХН, в качестве положительного — раствор гистамина. Результаты учи­тывают в течение 20 мин (ГНТ) по величине папулы (иногда до 20 мм в диаметре), наличию отека и зуда. Внутрикожные пробы ставят в случае отрицательного или сомнительного результата прик-теста. По сравнению с последним, дозу аллергена уменьшают в 100-5000 раз.

Кожные пробы на наличие ГЗТ широко применяют для выяв­ления инфицированности людей микобактериями туберкулеза (проба Манту), возбудителями бруцеллеза (проба Бюрне), лепры (реакция Митсуды), туляремии, сапа, актиномикоза, дерматомикозов, токсоплазмоза, некоторых гельминтозов и др.

 

Методы микроскопии

Для микроскопических исследований (изучение бактерий под микроскопом) используют несколько типов микроскопов: 1. биологический, 2. люминисцентный, 3. электронный.

С помощью этих исследований определяют: подвижность (метод «висячей капли»), морфологию, наличие капсул и спор (приготовление фиксированных мазков с последующей окраской: по Граму, Цилю-Нильсену, Бурри-Гинсу и др.)

При обычной световой микроскопии наблюдаемый объект рассматривается в проходящем свете. Поскольку микробы малоконтрастны, то для лучшей видимости их окрашивают. С помощью световой микроскопии можно исследовать подвижность микроорганизмов. Для этого применяют метод висячей капли.

Фазово-контрастная микроскопия основана на интерференции света: прозрачные неокрашенные объекты, отличающиеся по показателю преломления от окружающей среды, выглядят либо как темные на светлом фоне (позитивный контраст), либо как светлые на темном фоне (негативный контраст). Фазово-контрастная микроскопия применяется для прижизненного изучения бактерий, грибов, простейших.

Темнопольная микроскопия основана на рассеянии света микроскопическими объектами Объекты при темнопольной микроскопии выглядят ярко светящимися на темном фоне. Применяется темнопольная микроскопия преимущественно для прижизненного изучения спирохет, боррелий, жгутиков бактерий при оценке их подвижности.

В основе люминесцентной микроскопии лежит явление люминесценции, т. е. способности некоторых веществ светиться при облучении их коротковолновой (сине-фиолетовой) частью видимого света либо ультрафиолетовыми лучами с длиной волны, близкой к видимому свету. Среди различных видов люминесцентной микроскопии наиболее распространено прямое флюорохромирование ‒ окрашивание флюорохромами и иммунофлюоресценция, представляющая собой сочетание микроскопичсекого метода с иммунологическим.

Данный метод используется для обнаружения микобактерий, гонококков, возбудителя дифтерии и др.

Поляризационная микроскопия основана на явлении поляризации света и предназначена для выявления объектов, вращающих плоскость поляризации. Применяется в основном для изучения митоза.

В основе ультрафиолетовой микроскопии лежит способность некоторых веществ (ДНК, РНК) поглощать ультрафиолетовые лучи. Она дает возможность наблюдать и количественно устанавливать распределение этих веществ в клетке без специальных методов окраски.

Электронная микроскопия ‒ метод морфологического анализа с помощью потока электронов. Роль оптических линз выполняют электрические и магнитные поля. Использование в качестве источника излучения потока электронов повышает разрешающую способность микроскопа до нм. Такая высокая разрешающая способность позволяет изучать структуру этих объектов на субклеточном и макромолекулярном уровне. Электронная микроскопия применяется для изучения строения вирусов, бактерий, грибов и простейших.