Среды для культивирования облигатно-анаэробных микроорганизмов –

Среда Вильсона-Блёра, среда Цейсслера, Клостридиум-агар, Кровяной агар бактероидов (КАБ) и другие.

Среда Вильсона-Блёра – универсальная среда

Для получения чистых культур облагитно-анаэробных орагнизмов.

Это железо-сульфитный агар.

На ней можно посмотреть рост бактерий из рода Клостридий, потому что они образуют соединения с железом и серой.

Требования:

Быть питательными

Определенный ПШ

Изотоничные

Стерильность

Определенная влажность, оптимальная консистенция

Определенный окислительно-восстановительный потенциал, потому что большинство бактерий хемотрофные.

Прозрачность.

МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ

Обычно, бактерии, которые приходят в лабораторию, собираются со слизистых оболочек, в которых есть еще и другие бактерии. Они нам не нужны. Поэтому нам нужно уметь выделять чистые культуры бактерий из исследуемого материала.

Методы:

В первую очередь

Механическое разобщение бактериальных клеток:

Метод Дригальского – используется везде. Нужно, чтобы этот метод у нас отскакивал от зубов, как сказал Гуров.

Метод Пастера – последовательное разведение материала в питательной среде, последующий подсчет.

Метод Коха – последовательное разведение в пробирках с МПА, после чего пробирки выливают в чашки, после инкубации подсчитывают.

Оба метода практических не используются.

Метод клональных культур – начинает набирать обороты. Перенос с помощью микроманипулятора ОДНОЙ бактериальной клетки в питательную среду, затем получаем ее потомство. (то есть клоны)

Методы, основанные на использовании биологических свойств бактерий.

Использование селективных питательных сред.

Избирательное подавление размножения сопутствующей микрофлоры, основанное на различной чувствительности к антибактериальным препаратам (ну то есть чета добавили, что не нравится бактериям, они такие ы и умерли)

Создание определенных условий. (температура, концентрация кислорода) во время инкубации посевов.

Методы, основанные на способности некоторых бактерий быстро размножаться в организме чувствительных к ним лабораторных животных.

Биологический метод – заражение лабораторных животных.

Метод Шукевича – использование скошенного агара. Засеяли этот скошенный агар бактериями, они начали расти – ползти (ползучий рост).

Это могут делать бактерии протей.

ТЕХНИКА ПОСЕВА НА ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ:

Взгляни, ты мог бы это делать.

Крышка приподнимается, но не снимается, дальше идет посев, не вспахивая агара.

Зачем? Получение чистой культуры.

Чистая культура – один вид микроорганизмов.

МЕТОД ДРИГАЛЬСКОГО чтоб от зубов

Происходит механическое разобщение микроорганизмов.

Как вообще происходит:

0,1 мл материала вносят в первую чашку, стерильным стеклянным шпателем распределяют по поверхности среды. Затем тем же шпателем без прожигания в пламени горелки делают посев во второй и в третьей чашках.

С каждым посевом уменьшается количество бактерий, ну понятно почему, и при посеве на третью Чашку бактерии распределяются отдельно друг от друга. Через 1-7 дней выдерживания этих чашек в термостате на третьей чашке бактерия дает клон клеток, которые мы переселяем на скошенный агар с целью накопления чистой культуры.

Теперь то, что говорит Гуров словами, а не письменами.

Первый этап Посев происходит на нескольких секторах. Сначала петлей происходит засев на первый сектор – от периферии в центр. Затем, происходит посев во втором, третьем и четвертом, если есть необходимость, секторах.

Затем, через 24 часа все эти дела вынимаются из термостата.

Теперь видим. В третьем секторе мы изучаем культуральные свойства, характер колоний. После этого колония переносится на скошенный агар.

Кстате, колония в центре-это представитель плесневых грибов, так что оставим их в покое. (синяя штучка)

Естественно, каждой колонии предварительно готовится мазок, окрашивается по методике Грама, поэтому кроме культуральных свойств мы видим и морфологические свойства.

Затем идет посев на скошенный агар. (второй этап)

Готовится просто – заливается питательная среда под наклоном, так она и застывает. После этого на нее осуществляется посев методом Шукевича (ползем).

Почему скошенный агар, а не чашка Петри? Ну потому что меняется площадь питательной среды. В скошенной структуре она увеличивается.

Почему в пробирке? Потому что открывая чашку Петри – высока вероятность других микроорганизмов.

Посев осуществляется с помощью! Пламени горелки.

Иногда бывает посев методом укола.

На третьем этапе- происходит контроль, берется петля, делается мазок, по методике Грама мы убеждаемся, что это то, что нам нужно. Если кокки, то одного размера, хорошо прокрашены, без всяких дзидзь. С палочками также.

Затем идет идентификация чистой культуры по:

Морфологическим свойствам

Биохимическим свойствам.

Исходя из всех свойств мы определяем вид микроорганизмов.

Эти три этапа нужно знать наизусть. Святая святых.