Универсальные накопительные среды:

Занятие 3 (Полина А.)

Морфология бактерий

3 компартмента бактериальной клетки:

· Поверхностные структуры бактериальной клетки (капсула, жгутики, пили)

· Клеточная оболочка (цитоплазматическая мембрана, клеточная стенка)

· Цитоплазма и включения (нуклеоид, плазмиды, зерна волютина, рибосомы и тд.)

Немного из прошлой темы: Атипичные микроорганизмы (по структуре клеточной стенки) – кислотоустойчивые микроорганизмы (семейство Mycobacteriaceae)

- M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum – все вызывают туберкулез;

- M. Leprae – возбудитель проказы; (все эти патогенные одинаковы по строению, отличие только в выделяемом токсине)

- плюс есть непатогенные виды- сапрофиты

В обычном световом микроскопе заметить различия кислот/некислотоустойчивых невозможно.

Огромное количество липидов и восков в клеточной стенке – 40% сухой массы клет. оболочки (миколовая кислота и тд.) => устойчивость к кислотам, щелочам, спиртам, действию УФ, дезинфектантам и тд. Вызывают сенсибилизацию организма.

Грам «+» тонкие прямые или слегка изогнутые палочки. Неподвижны, спор и капсул не образуют. Возможен переход в фильтрующиеся и L-формы.

ОКРАСКА ПО ЦИЛЮ-НИЛЬСЕНУ (рубиново-красным – кислотоустойчивые, остальные голубые). Помнить, что здесь карболовый фуксин, а не водный (в отличие от метода Грама). Так как карболовая кислота вместе с высокой температурой является протравой. Знать метод Грама, Циля-Нильсена и Романовского-Гимзе наизусть.

 

Цитоплазма

- содержимое клетки, окруженное цитоплазматической мембраны.

Выявление ультраструктуры бактериальной клетки - окраска по Романовскому-Гимзе.

На картинке бациллы, клетки друг за другом, там не несколько нуклеоидов.

Цитозоль – фракция цитоплазмы, консистенция гомогенна. Содержит растворимые=коллоидные белки (обуславливают гелеобразную структуру, т-РНК, м-РНК.

Органеллы:

· Нуклеоид (3% сухой массы клетки). Спиральная кольцевидно замкнутая ДНК. Длина в развернутом состоянии около 1мм, в 1000 раз больше длины клетки. Содержит до 4000 отдельных генов. Нет ядерной оболочки, ядрышка, гистонов, нитей эухроматина, ГАПЛОИДНЫЙ набор генов. «Ложная хромосома» - структура нуклеоида.

ДНК в нуклеоиде бактерий: спиралевидная молекула с водородными связями. Отличие – помимо спиралей есть суперспирализация – доп, перекрутки (как дополнительно изогнутый телефонный шнур). За суперспирализацию отвечают ферменты класса ДНК-гираз (самый известный – топоизомераза 4). Топоизомераза 4 – мишень для антибиотиков группы хиналоны.

· Внехромосомный дополнительный генетический аппарат – плазмиды. Это двунитевые молекулы ДНК, детерминирующие развитие определенного признака (40-50 генов в составе).

По размещению в клетке: внехромосомные (свободно в цитоплазме, полностью автономны) и интегрированные (имеют частичную связь с нуклеоидом).

По типу передачи: конъюгативные (имеют tra-ген (трансферный), обеспечивающий перенос в другие микроорганизмы, обычно крупные малокопийные плазмиды). Механизм переноса – конъюгация (обусловлена наличием пилей; между клеткой, имеющей пили (донором) и неюмеющей пили (реципиентом) выстраивается канал (конъюгативный мостик), по нему плазмида перемещается), процесс идет даже между неродственными микроорганизмами.

ü R - плазмида резистентности к а/б

ü F – фактор фертильности (наличие F-пилей)

ü Col (впервые изучена у кишечной палочки) - плазмида синтеза бактериоцинов (колицины), обсепечивающих высокую антагонистическую активность бактерии. То есть веществ, подавляющих развитие других штаммов того же вида или родственных видов. Способствует выживаемости данного штамма в окружающем биоценозе. + пестицины, стафилоцины и др.

Кишечная палочка не только индигенный штамм (обуславливающий физиологические св-ва организма), но и патогенные штаммы (вызывают энтероколит). Подавление одних штаммов другими происходит за счет синтеза бактериоцинов.

Такое же явление есть у стафилококков (стафилоцины), у Yersinia Pestis (пестицины) и тд.

ü HLy – продукция гемолизинов – токсинов, обуславливающих лизис эритроцитов.

ü Ent – (есть почти у всех энтеропатогенных микроорганизмов), продукция энтеротоксина (вызывает диарейную реакцию в макроорганизме).

ü Sac и Lac – расщепление сахарозы и лактозы. Обуславливает повышенную устойчивость в среде с соответствующим субстратом.

ü Nif – нитратредуцирующая плазмида, обуславливает связывание азота. Описана у Klebsiella pneumoniae (семейство Enterobacteriaceae) – клебсилезная атипичная пневмония.

И неконъюгативные (обычно мелкие малокопийные плазмиды) переносятся с участием бактериофагов.

· Рибосомы. Хим. Состав: 40%- Рнк, 60% - белки. Общая константа седиметанции = 70S. У большой субъединицы – 50S (состоит из 2х молекул: 5S ррнк и 23S ррнк), у малой – 30S (только одна молекула – 16S ррнк- содержит инфу об эволюции бактерии).

Рибосомы – мишени для действия антибиотиков (бактериостатический механизм): 30s –тетрациклины и аминогликозиды (бактерицидное д-е), 50s – макролиды и линкосамиды.

После нарушения синтеза белка клетка сразу не погибает, она сохраняет свою жизнеспособность долгое время (бактериостатическое действие).

· Включения. Активно функционирующие структуры/ сохраняющиеся внутри клетки продукты клеточного метаболизма/ запасные вещества, отложение которых происходит в условиях избытка питательных веществ/ приспособительные структуры.

Зерна волютина (впервые обнаружены у Spirillum volutans) – обеспечивают выживание (так как у бактерий нет митохондрий, нет энергетических станций). Пример: Corynebacterium diphtheria. => выявление зерен волютина в основе диагностики дифтеритической инфекции.

Выявляются методом Нейссера и методом Лефлера.

Метод Нейссера – метиленовая синь с везувином (краситель в разных тонах от соломенно-желтого до интенсивно-коричневого). Окончания клеток (булавовидные) – зерна волютина – интенсивно-коричневые или темно-синие.

Для того, чтобы заболеть дифтерией, нужно иметь именно тот штамм, который выделяет дифтерийный экзотоксин. У таких зерна волютина располагаются строго ПОЛЯРНО.

У нетоксигенных штаммов зерна волютина не строго полярно/ по центру.

 

 

СПОРЫ

Бактерии могут существовать в форме вегетативной клетки и в форме споры.

Спорообразующие палочки: бациллы (B. Anthracis (сибирская язва) и клостридии (С. Tetani (столбняк), botulinum (ботулизм), gangrenosum (газовая гангрена)).

· Форма покоящихся грамположительных бактерий

· Образуются при неблагоприятных условиях (за 18-20ч) внутри бактерии (эндоспоры); ф-ция – защита от факторов окружающей среды. Длительность существования – до 1000 лет и больше. Очень большой процент утрачивает жизнеспособность.

· Образование спор не является способом размножения, а способствует сохранению вида.

· Способны очень быстро (за 2-3ч) восстанавливать свою жизнедеятельность при попадании в макроорганизм.

· Устойчивы (Многослойная оболочка; Наличие дипиколиновой кислоты, кальция, цистеина; Низкое содержание воды; Замедленный метаболизм; Кислотоустойчивы (окраска по Ожешко – модификация метода Циля-Нильсена); Термоустойчивы.

· Устойчивость к кипячению – от 30 мин до 5 суток

· Устойчивость ко многим химическим антисептикам

· Споры разрушают автоклавированием (паром под давлением), или в сухожаровом шкафу (180° С – 60 мин)

 Bacillus anthracis

Цепочки вегетативных клеток (слева). На микроэлектронной фотографии видны споры, созревающие внутри каждой бактериальной клетки. Зрелая спора (на врезке) снаружи покрыта трехслойной оболочкой, а под ней залегает еще один защитный слой — кортекс (липидные обоблочки).

Сначала непропорционально делится в-во цитоплазмы за счет перегородки. Вокруг нуклеоида начинает наползать дополнительный слой цитоплазматическая мембрана. Благодаря наползанию происходит слияние 2х мембранных компонентов, утолщение этого образования, отложение ионов кальция, дипиколиновой кислоты и формирование кортекса (красноватый цвет). Оставшаяся часть клетки отмирает.

Наиболее значимый фактор прорастания споры – влажность.

Бациллы- споры строго внутри бактериальной клетки, не выходят за ее пределы.

Клостридии – споры формируют крупные булавовидные утолщения (похожи на зерна волютина, но по размеру больше).

Расплоложение спор в клетке

Терминальное (возбудитель столбняка) – споры в виде барабанных палочек

Субтерминальное (возбудитель ботулизма, газовой гангрены) – споры в виде теннисной ракетки

Центральное (бацилла сибирской язвы).

 

Метод Ожешки – на фоне синих клеток красные споры.

Атипичные микроорганизмы

Treponema: pallidum (сифилис), pertenue (прамбезия – тропическое заболевание)

Borrelia: reccurentis (эпидемический возвратный тиф), persica (клещевой возвратный тиф), burgdorferi (клещевой боррелиоз= болезнь Лайма).

Leptospira: interrogans (лептоспироз – зоонозное заболевание (источник – грызуны/крысы/собаки)).

Морфология спирохет:

- Длинные, тонкие, спирально-изогнутые; Изогнуты т.к. в составе клеточной стенки много эластичных липидных соединений (фосфолипидов), отсутствуют каналы, белки порины (поэтому по Граму невозможно прокрасить)

- протоплазматический цилиндр, поверх клеточная мембрана, поверх клеточная стенка (аналогична Гр «-«микроорганизмам, но вместо липополисахаридов и жк – фосфолипиды)

- Протоплазматический цилиндр образует первичные завитки;

- Изгибы всего тела образуют вторичные завитки;

 

- структура пружины, которая способна сокращаться благодаря наличию аналогов жгутикового аппарата (из фибриллярных тяжей из миофибрилл из флагеллина). Эти миофибриллы обвивают клетку со всех сторон. На концах протоплазматического цилиндра – блефоробласты – цементирущие компоненты для фиксации жгутиков. (у бледной трипонемы эти тяжи движутся с разных концов навстречу друг другу и перекрещиваются примерно на середине).

Спирохеты опережают по своей активности даже холерный вибрион (чемпион по активности среди жгутиковых).

Виды их движения: скольжение, маятникообразное движение, сгибание, вкручивание (по типу штопора, так развивается сифилис)

1) Спирохеты способны распадаться на зерна (при недостаточной концентрации антибиотика частично разрушается пептидогликан => микроорганизм распадается и продолжает жизнедеятельность.)

2) Могут формировать цисты – клубки, покрытые муциновой оболочки (предотвращение фагоцитарной реакции).

3) Могут формировать L- формы.

Метод дифференцировки – метод Романовского – Гимзы.

Борелии в синий, завитки неправильной формы (от 6 до 8)

Трепонемы в бледно-розовый т.к. больше всего липидов в мембране. Ровные завитки в виде зубьев пилы (от 8 до 12)

Лептоспиры в интенсивно-красный цвет. 20-40 мелких завитков и от 2 до 4 крупных, S – образные структуры.

Доп. Методы окраски: - импрегнация солями серебра (по Морозову)

- метод Бурри (темнопольный) – на темном фоне спиралевидные клетки хорошо видны

БЛЕДНАЯ ТРИПОНЕМА

• Порядок– Spirochaetales

• Семейство – Spirochaetaceae

• Род – Т reponema (от греч. trepo – вращаться, nemo – нить)

• Вид – Т reponema pallidum

-Штопорообразное тело;

-8-12 первичных завитков на равном расстоянии друг от друга;

-От каждого конца – три периплазматических жгутика;

-Плавное движение;

-Спор и капсул не образуют;

-Цисты и L-формы.

 

Занятие 4 (Настя Д.)

РИККЕТСИИ

Риккетсии (0,5 мкм) - мельчайшие бактерии, промежуточная форма между бактериями и вирусами. Облигатные внутриклеточные паразиты!

Домен Bacteria

Тип Proteobacteria

Порядок Rickettsiales

Семейство Rickettsiaceae

Краткая сводка:

· Грамотрицательные

· Облигатные внутриклеточные паразиты

· Полиморфны (4 морфологические формы рассмотрены ниже)

· Довольно толстая клет. стенка, из-за этого имеют кислотоустойчивость. МОДИФИКАЦИЯ МЕТОДА ЦИЛЯ-НИЛЬСЕНА - МЕТОДИКА ЗДРОДОВСКОГО, МЕТОД РОМАНВСКОГО-ГИМЗЫ

· В организме человека чаще поражает эндотелий сосудов

· Две формы существования: внутриклеточная и внеклеточная

· Механизм проникновения в клетку организма хозяина: риккетсии имеют ферменты, разрушающие структуру цитоплазматической мембраны, и проникают в цитоплазму (именно в ней происходит размножение)

· Механизм выхода из клетки хозяина сопровождается лизисом

· Заражение происходит трансмиссивным путем через укусы членистоногих

 

Возбудители след. заболеваний:

· Эпидемический сыпной тиф (Rickettsia prowazekii) - “вшиный”

· Эндемический сыпной тиф (Rickettsia typhi) - “крысиный”

· Пятнистая лихорадка Скалистых гор (Rickettsia rickettsii)

· Североазиатский клещевой риккетсиоз (Rickettsia sibirica)

·

4 морфологических формы риккетсий по Здродовскому:

1. Кокковидные - встречаются чаще

2. Палочковидные

3. Бациллярные

4. Нитевидные

 

Жизненный цикл риккетсий

Клинические проявления - статус тифозус (очень-очень плохо):

· Лихорадка, быстрые резкие перепады температуры

· Головная боль

· Сыпь

· Миалгия

· Поражение конъюнктивы

 

Методы изучения:

· Бактериоскопический

· Культуральный (просто на питательной среде расти не будут, поэтому их изучают по аналогии с вирусами: заражают куриные эмбрионы, к примеру)

· Серологический

· Молекулярно-генетический

Интересный факт: Риккетсии получили свое название в честь Х.Т. Риккетса - он впервые описал пятнистую лихорадку Скалистых гор. Но ему, к сожалению, не повезло, заразился сыпным тифом и умер. Однако до конца своих дней вел дневник, где описывал все свои симптомы (почти полностью описал всю симптоматику).

 

ХЛАМИДИИ

Хламидии - облигатные внутриклеточные паразиты

Домен Bacteria

Тип Chlamydiae

Порядок Chlamydiales

Семейство Сhlamydiaceae

Род Chlamydia

Возбудители заболеваний:

· Chlamydia trachomatis - трахома (специфическое поражение конъюнктивы) и урогенитальные инфекции

· Chlamydia pheumoniae - различные формы респираторных инфекций

· Chlamydia psittaci - орнитоз (инфекционное заболевание: трахеобронхит/пневмония, лихорадка)

Краткая сводка биологических характеристик:

· Мелкие грамотрицательные бактерии

· Округлая форма наиболее характерна

· Не образуют спор

· Неподвижны, нет жгутиков

· Облигатные внутриклеточные организмы

· Две формы существования: внеклеточная форма (элементарное тельце) - более мелкие, мелкая структура нуклеоида, более плотная клеточная мембрана и внутриклеточная форма (ретикулярная форма) - более крупные

· Жизненный цикл хламидий - 48-72 часа

Жизненный цикл хламидий:

Цикл развития крайне важен. Многие антибактериальные препараты бесполезны, потому что не все антибиотики способны проникать внутрь клеток макроорганизма. Поэтому при лечении хламидиоза применяют:

· Макролиды

· Тетрациклины

Методы изучения хламидий:

· Микроскопический (окраска по методу Романовского-Гимзы, можно дифференцировать формы)

ЭТ (элементарные тельца) окрашиваются в красный цвет, РТ (ретикулярный тельца) - в голубой

· Культуральный (как и риккетсиями: либо искусственные культуральные клетки, либо заражение куриных эмбрионов)

· Серологический

· Молекулярно-генетический

Отличие риккетсий и хламидий от собственно бактерий:

· Облигатные внутриклеточные паразиты

· Две формы существования

· Уникальные сложные циклы развития

МИКОПЛАЗМЫ

Микоплазмы - прокариоты, у которых ОТСУТСТВУЕТ клеточная стенка и ее предшественники, облигатный мембранный паразит (ВНУТРЬ КЛЕТОК НИКОГДА НЕ ПОПАДАЮТ)

Отсутствует клеточная стенка, но имеется цитоплазматическая мембрана (основной компонент липидов мембраны - холестерин, который микоплазмы черпают из мембран клеток хозяина, поэтому внутрь клеток попросту не стремятся)

Возбудители след. Заболеваний:

· M. pheumoniae - возбудитель атипичной пневмонии, воспаления среднего уха, менингита

· M. genitalium, M. hominis, Ureaplasma urealyticum - возбудители воспалительных процессов урогенитального тракта

Краткая биологическая характеристика:

· Не имеют четкой формы, овоидные очертания (форма груши особенно часто, тк на терминальном конце имеется терминальная органелла - фактор, органелла адгезии)

· Имеют только цитоплазматическую мембрану

· Полиморфны (округлые, нитчатые формы...)

· Имеют достаточно примитивный генетический аппарат (отклоняются от уникального ген кода, присущего для прокариот. Способны вступать в специфическое

 

 

·  взаимодействие с клетками эукариот, вызывая в них генетические изменения)

· С микоплазмами часто связываются респираторные вирусы для внедрения в макроорганизм

· Не можем окрасить микоплазмы по методике Грамма, так как отсутствует клеточная стенка. В настоящее время почти нет методов, с помощью которых можно окрасить микоплазмы.

· Вызывают гемолиз эритроцитов животных и человека

· Распространены довольно широко и эволюционируют достаточно быстро - говорит о том, что микоплазмы очень даже преуспевающие микроорганизмы

Методы исследований:

· Микроскопический (только в контексте электронной и фазово-контрастной микроскопии)

· Бактериологический (только для изучения, в клинической практике неприменимо, т.к. метод долгий. Среда Тимакова)

· Серологический

· Молекулярно-генетический

АКТИНОМИЦЕТЫ

Актиномицеты (ветвящиеся бактерии, лучистые грибки) - прокариоты с типичной ультраструктурой клетки и чувствительностью к антибиотикам, грамположительные.

Промежуточная структура между бактериями и грибами

Отличительная особенность - способность образовывать мицелий на питательных средах. Ветвящиеся клетки - гифы

Порядок Actinomycetales

Семейство Actynomycetaceae

Род Actinomyces

Вид Actinomyces israelii (входит в состав нормальной микрофлоры рта)

   Actinomyces bovis

Семейство Streptomycetaceae

Род Streptomyces

 

Краткая биологическая сводочка:

· Актиномицеты неподвижны

· Ультраструктура клетки типична для прокариот, однако НИТЧАТАЯ ФОРМА. За сходство с грибами ветвящиеся нитчатые клетки получили название гифы

· Имеют клеточную стенку, типичную для грамположительных бактерий

· В нитях актиномицетов могут накапливаться гранулы волютина

· Клетки хорошо окрашиваются основными анилиновыми красителями

· Поражают слизистую оболочку, подслизистую оболочку и могут распространяться дальше в соединительную ткань

· Формируют паталогические очаги - друзы (желтоватые комочки диаметром 1-2 мм, имеющие звездчатую и отросчатую форму), затем творожистый некроз

Центр друзы состоит из растущего или компактного кальцинированного мицелия, концевые отделы - покрыты капсулоподобными эозинофильными чехлами, выполняющими защитную функцию.

· Из многих культур актиномицетов получают антибиотики, это основные продуценты антибиотиков среди бактерий

Методы изучения:

· Микроскопический

· Бактериологический

· Серологический

· Молекулярно-генетический

Разные виды можно различить как по морфологии, так и по культуральным свойствам

 

ГРИБЫ

ГРИБЫ - самостоятельное царство эукариотических свободноживущих или паразитирующих организмов, как микроскопических, так и макроскопических.

Грибы, изучаемые медицинской микологией - отдел Eumycota (патогенные грибочки)

Много классов, но наиболее важное клиническое значение имеют:

1. Зигомицеты

2. Аскомицеты

3. Дейтеромицеты

Есть еще: хитрибиомицеты, базидиомицеты и др

Таксономия

 

 

Семейство Mucoraceae - зигомицеты (низшие грибы, несептированная структура мицелия)

Семейство Aspergillaceae - аскомицеты (имеют “сумки” на поверхности спорообразующих структур, в которых находятся споры: род Aspergillus и род Penicillium

Семейство Debaryomycetaceae - дрожжеподобные грибы, принципиально отличаются от плесневых грибов, образуют псевдомицелий

Методы изучения:

· Микроскопический - основной!!! Позволяет установить структуру мицелия или псевдомицелия и отдифференцировать организмы друг от друга

При микроскопии плесневых грибов используются нативные препараты

· Бактериологический - больше для дрожжеподобных грибов, используется для получения изолированных колоний

 

Зигомицеты (класс Zygomycetes) - “головчатая плечень”

· Низшие грибы, мицелий несептированный, многоядерный

· Тело гриба - одна, сильно разветвленная клетка

· Особый тип полового процесса - зигогамия (слияние недифференцированных на гаметы клеток). Образуется зигоспора, она покрывается толстой оболочкой и прорастает после периода покоя

· Бесполое размножение - эндоспоры

· Экзоспоры формируются в спорангиях на верхушке спороносцев

 

Аскомицеты (класс Ascomycetes)

Род Aspergillus - “леечная плесень”

· Сумчатые грибы с многоклеточным септированным мицелием. Высшие грибы

· При половом процессе размножаются экзоспорами (споры развиваются в особых сумках - асках, в которых содержится 4 или 8 половых спор) - истинные конидии

· Бесполое размножение осуществляется конидиями (экзоспоры)

Род Penicillium - “кистевая плесень”

· Высшие грибы, многократно септированный мицелий (имеет многоклеточные конидиеносцы, которые вверху заканчиваются стеригмами в виде кисточек)

· От стеригм отшнуровываются конидии (экзоспоры) - бластоконидии

· Строение кисточки индивидуально у разных видов, это положено в основу систематики рода

Deuteromycetes - несовершенные грибы

· Относятся дрожжеподобные грибы рода Candida

· Сходны с истинными дрожжами, отличием служит отсутствие аскоспор и способность к образованию псевдомицелия (в отличие от истинного мицелия не имеет общей оболочки и перегородок)

· Размножаются почкованием

· Окрашиваются анилиновыми красителями

· Грамположительные микроорганизмы

 

Занятие 4 (Полина Н., Ульяна)

Риккетсии -мельчайшие бактерии (0,5мкм), промежуточные формы между бактериями и вирусами. Являются облигатными внутриклеточными паразитами.

Патогенные для человека виды риккетсий входят в состав родов Rickettsia, Rochalimaea и Coxiella, (размножение в эндотелии сосудистой стенки) возбудители следующих заболеваний:

Эпи демического сыпного тифа (Rickettsia prowazekii) самый грозный! Вошь

R. typhi (энде мический сыпной тиф) Крыса

Пятнистой лихорадки Скалистых гор (Rickettsia rickettsii)

Североазиатского клещевого риккетсиоза (Rickettsia sibirica)

Риккетсии названы по имени Х.Т. Риккетса, впервые описавшего возбудителя пятнистой лихорадки Скалистых гор.

Риккетсиозы человека:

· Группа тифов – эпидемический (вшиный) сыпной тиф, эндемический (крысиный) сыпнрй тиф.

· Группа пятнистых лихорадок – пятнистая лихорадка Скалистых гор, средиземноморская прыщевая лихорадка, бразильский сыпной тиф, североазиатский клещевой риккетсиоз.

· Группа лихорадок цуцугамуши – лихорадка цуцугамуши японская, малайский скребковый тиф, суматранский клещевой тиф.

· Смешанная группа – окопная лихорадка, Ку-лихорадка, осповидный риккетсиоз.

 

Морфология риккетсий. Биологические свойства

1. Грамотрицательные полиморфные прокариоты. У них толстая клеточная стенка, они являются кислотоустойчивыми прокариотами. Окрашиваются по методу Циля-Нильсена, Здродовского

2. Могут иметь кокковидную, палочковидную, бациллярную и нитевидную форму

3. Облигатный внутриклеточные паразиты!

4. Жизненный цикл риккетсий включает 2 стадии – вегетативную (внутриклеточную) и покоящуюся (внеклеточная)

5. Риккетсии способны проникать в цитоплазму клеток хозяина, разрушая мембрану фагосом с помощью фосфолипаз

6. В цитоплазме они активно размножаются бинарным делением, потребляя необходимые им вещества

7. Выход из клетки хозяина может осуществляться при её лизисе

8. Покоящаяся форма обладает повышенной резистентностью; клетки округлые, меньших размеров, с утолщенной клеточной стенкой (кислотоустойчивость), уплотненной цитоплазмой.

9. Риккетсии содержат большое количество липидов и плохо воспринимают анилиновые красители, для их окраски применяю сложные методы – Романовского - Гимзы и Здродовского

10.  Заражение риккетсиями происходит трансмиссивным путем через укусы членистоногих

11.  В организме человека риккетсии преимущественно поражают клетки эндотелия сосудов

12.  У риккетсий отсутствуют собственные метаболические структуры, но они способны осуществлять окислительное фосфорилирование с помощью ЦТК и дыхательной цепи, а также напрямую получать АТФ из клетки хозяина

 

Окраска риккетсий по Здродовскому

Жизненный цикл риккетсий:

-Адсорбция

- Проникновение в клетку путем эндоцитоза

- Выход в цитоплазму

- Переход в вегетативную форму и размножение

- Превращение в покоящуюся форму и дегенерация клетки хозяина

- Выход риккетсий из погибшей клетки

Клиническая картина:

· Размножение в прилегающих капиллярах -> гематогенная диссеминация -> поражение других сосудов -> васкулиты

· Пораженные клетки содержат риккетсии в виде телец Музера

· Лихорадка, головная боль, сыпь, миалгия, поражение конъюнктивы, энантема мягкого неба

Методы изучения риккетсий:

 

Бактериоскопический (не способны расти на культурных средах)

Культуральный (в куриных эмбрионах)

Серологический (выявление антигенов)

Молекулярно-генетический

 

 

Хламидии – облигатные внутриклеточные паразиты. Получили своё название от Chlamyda – накидка, так как при микроскопии пораженных клеток колонии хламидий как бы «накрывают» ядро клетки  

 

Таксономическое положение хламидий:

Домен Бактерии

Тип Chlamydiae

Порядок Chlamydiales

Семейство Chlamydiaceae

Род Chlamydia

 

Хламидии, патогенные для человека:

Chlamydia trachomatis – возбудитель трахомы (поражение конъюнктивы) и урогенитальных инфекций

Chlamydia pneumonia – вызывает различные формы респираторных заболеваний

Chlamydia psittaci – возбудитель орнитоза

 

Биологические свойства хламидий

· Хламидии – мелкие грамотрицательные прокариоты шаровидной или овоидной формы, не образуют спор, неподвижны, не имеют капсулы.

· В составе клеточной стенки отсутствует пептидогликан, ригидные функции выполняют белки наружной мембраны

· Облигатные внутриклеточные паразиты!

· Хламидии зависят от энергетических ресурсов эукариотической клетки, а также конкурируют с клеткой хозяина за питательные вещества, витамины, кофакторы.

· Главной биологической особенностью хламидий является уникальный внутриклеточный цикл развития (48-72ч), состоящий из чередования двух форм возбудителя:

Элементарные тельца (ЭТ, мелка инвазивная – внеклеточная форма) обеспечивают внеклеточное выживание. Обеспечивает прикрепление к клетке-мишени и проникновение в нее; метаболически мало активны, имеют жесткую клеточную стенку, резистентны к осмотическому шоку, устойчивы практически ко всем известным в настоящее время антибиотикам.

Ретикулярные тельца (РТ, значительно более крупная внутриклеточная форма) обладают высокой метаболической активностью, выраженной чувствительностью к антибиотикам, способны к бинарному делению.

 

Жизненный цикл хламидий

 

Методы изучения хламидий:

Микроскопический (м. Романовского-Гимзы)

Культуральный (культуры клеток, куриный эмбрион)

Серологический

Молекулярно-генетический

 

ЭТ окрашиваются в пурпурный цвет ( в качестве энергии используют глюкоза-6-фосфат)

РТ окрашиваются в голубой цвет ( потребляют АТФ клетки хозяина)

 

Отличие риккетсий и хламидий от собственно бактерий:

-являются облигатными внутриклеточными паразитами

-внутри клетки хозяина они сохраняют свою клеточную структуру и используют только ее энергию-энергетические паразиты

-существуют в 2 формах – внеклеточной и вегетативной внутриклеточной

-имеют сложный цикл развития

Микоплазмы – прокариоты, у которых отсутствует клеточная стенка и ее предшественники! Облигатный мембранный паразитизм! Живут на поверхности клеток

Таксономическое положение:

Тип Tenericutes

Класс Mollicutes (мягкокожие)

Порядок Mycoplasmatales

Семейство Mycoplasmataceae

Род Mycoplasma (более 100 видов)

Род Ureaplasma (3 вида)

 

Патогенные виды микоплазм для человека:

M. pneumoniae – возбудитель атипичной пневмонии, воспаление среднего уха, менингита и др.

M. genitalium, M. hominis, Ureaplasma urealyticum – возбудители воспалительных процессов урогенитального тракта

 

Биологические свойства

 

· Единственной поверхностной оболочкой микоплазм является цитоплазматическая мембрана, в большинстве случаев содержащая экзогенный холестерин эукариотического происхождения

· Для микоплазм характерен значительный полиморфизм с образованием округлых и нитчатых форм, однако наиболее часто встречаются грушевидные и веретеновидные клетки

· Это обуславливается наличием терминальной органеллы – выроста мембраны, укрепленного сложным белковым аппаратом

· Терминальная органелла используется для адгезии, а также для особого вида подвижности – скольжения по различным поверхностям

Микоплазмы.

Достаточно тяжелый характер инфекции. Черпают постоянно холестерин из мембран клеток хозяина, для построения своей собственной мембраны.

Таким образом микоплазмы являются «мембранными паразитами», потому что основное место их локализации вне и внутри клетки связано с мембранами.

Также, все микоплазмы способны вызывать гемолиз эритроцитов у человека и животных.

Главным образом заселяют слизистые дыхательных и урогенитальных путей, но встречаются и на эпителии суставов, в почках, в легких, в селезенке, в костном мозге, тимусе и крови.

Персистенция (длительное нахождение в макроорганизме) – основная форма существования. Микоплазменные инфекции могут являться индикатором дистресса (отрицательного стресса) организма. Например, у человека персистенция микоплазм обычно связана с нарушением микроэкологии

Основное депо – костный мозг.

Из этих факторов ясно, что микоплазмы могут активировать вирусы, вызвать различные аутоиммунные заболевания, иммунодефицит.

Отнесены к условно-патогенным, вызывают латентные инфекции с хронью. Но, если симптомы исчезнут, это не будет означать, что микоплазмы исчезли.

Широкое распространение – преуспевающие микроорганизмы в плане эволюции, и эволюционируют они сравнительно быстро. Предполагают, что эволюция ориентирована на эндосимбиоз.

Из-за отсутствия клеточной стенки невозможно окрасить по методике Грамма.

Есть публикация о том, что усовершенствовали методику Романовского-Гимзе, но это довольно трудно. На практике в обычной лаборатории очень трудно такое применить.

Из-за требования микоплазм большого количества холестерина, практически невозможно их вырастить на поверхности искусственных питательных сред. НО, есть среда Тимакова. Выращивание происходит медленно, примерно 2-4 недели.

Методы изучения:

Микроскопический – в контексте фазово-контрастной микроскопии, в электронной микроскопии.

Бактериологический метод – научные цели. Среда Тимакова.

Серологический – основной метод

Молекулярно-генетический – основной метод.

Из-за невозможности окрашивания анилиновыми красителями, их изучают в нативных препаратах в фазово-контрастном микроскопе.

Для выявления в культуре зараженных клеток используют красители, образующие флуорисцентные комплексы с ДНК. (4’,6’-диамидино-2-фенилиндол (DAPI))

Колонии имеют характерный вид: яичница глазунья, т.е. центральная зона утолщена, идет вглубь агара, периферическая часть тонкая, на поверхности.

Актиномицеты: если хламидии и рикетции – промежуточные формы между бактериями и вирусами, то актиномицеты – промежуточные формы между бактерией и грибом.

Это прокариоты с типичной ультраструктурой клетки, чувствительны к аб, грамположительные палочки.

Называются лучистыми грибами, ветвящимися бактериями, потому что у них структура мицелия – так называемые гифы – образуют мицелий. Гифа это одна сильноветвящаяся клетка (не как у гриба)

В Израиле очень точно их описали.

А еще помимо актиномицетов, входят также стрептомицеты. Имеют большое количество общих свойств. И стрептомицеты имеют вещества, способные избирательно подавлять активность бактериальных клеток. То есть, большое количество а/б основано на свойствах этих микроорганизмов. Началось всё со стрептомицина.

Возбудители, ответственные за внутригоспитальные инфекции типа сепсиса или послеоперационные раневые инфекции, принадлежат родам Nocardia и Actinomadura, но иногда выделяют и другие актиномицеты.

Вот такие ребята, действительно чем-то напоминают грибы

 

 

 по форме напоминают как раз ветвящиеся нити, но типичная структура для прокариот, клеточная стенка типичная для грамположительных бактерий, то есть окрашивание по Граму (на картинке), но отличаются ВНУТРИ ГРУППЫ содержанием разных стереоизомеров ДАПа, но также хорошо окрашив