Микробиологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных неспорообразующими анаэробными бактериями

Возбудителями гнойно-воспалительных процессов довольно часто являются неспорообразующие анаэробные бактерии, принадлежащие к родам Bacteroides, Veillonella, Peptococcus, Peptostreptococcus. Они вызывают как моноинфекции, так и смешанные инфекции во всевозможных сочетаниях друг с другом и с аэробными бактериями – Р seudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, E. coli, кокками.

Бактериологическое и бактериоскопическое исследования. Посевы производят в пробирку с предварительно прокипяченной средой Китта-Тароцци и в пробирку с полужидким тиогликолевым агаром и инкубируют при 37 °С в течение 24-48 ч. После просмотра выросшей культуры делают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Бактериоскопия дает возможность установить однородность или неоднородность культуры, а по морфологии клеток и отношению к окраске по Граму ориентировочно отнести ее к определенному роду. Для получения чистой культуры делают пересевы на сахарный кровяной агар в чашки Петри, которые инкубируют в анаэробных условиях 3-4 сут до формирования изолированных колоний. После изучения колоний их пересевают на среду Китта-Тароцци. Идентификацию выделенной чистой культуры производят на основании присущих им дифференциальных признаков, которые определяют в тех же строго анаэробных условиях (табл. 3).

Экспресс методы диагностики. Анаэробные бактерии вырабатывают специфические метаболиты, включая летучие жирные кислоты с короткой цепью и нелетучие органические кислоты. Для их обнаружения в материале используют ГЖХ.

 

Таблица 3. Дифференциальные признаки неспорообразующих и спорообразующих анаэробных бактерий

Признак	Бактерии
	Pepto - coccus	Pepto- streptococcus	Veilonella	Bacteroides	Cl. perfringenes	Cl. novy	Cl. septicum	Cl. sordelli	Cl. histolyticum
Форма и расположение клеток	Одиночные кокки	Цепочки кокков	Короткие цепочки кокков	Мелкие палочки	Крупные палочки	Крупные палочки	Тонкие палочки	Мелкие палочки	Мелкие палочки
Подвижность	-	-	-	- +	-	+	+	+	+
Споры	-	-	-	-	+	+	+	+	+
Окраска по Граму	+	+	-	-	+	+	+	+	+
Ферментация углеводов	с	+	-	+	+	с	+	с	-
Свертывание/ пептонизация молока	-	-	+	+	+	X	-	+	+
Образование H2S	+	-	+	- +	-	-	-	X	X
Образование индола	- +	-	-	- +	-	-	-	-	-
Разжижение желатина	-	-	-	- +	+	+	+	+	+
Восстановление нитратов	- +	-	+	+ -	X	X	X	-	-
Гемолиз эритроцитов	- +	-	-	+ -	X	+	+	+	+
Образование токсина	-	-	-	-	+	+	+	+	+

Условные обозначения: (+) – наличие признака; (-) – отсутствие признака; (X) – непостоянный признак; (- +) – отсутствие признака у большинства штаммов; (+ -) – наличие признака у большинства штаммов; (с) – слабая ферментация.

Микробиологическая диагностика раневой анаэробной клостридиальной инфекции (газовая гангрена)

Возбудителями являются бактерии рода Clо stridium (схема 3). Чаще всего возбудителем газовой гангрены является С l. perfringens. Заражение происходит при попадании в рану почвы или пыли, загрязненной спорами клостридий. В анаэробных условиях (в глубине раны) они прорастают в вегетативные клетки, продуцирующие разнообразные токсины, которые вызывают распад и некротизацию мышечной ткани. В этом процессе могут участвовать стафилококки, синегнойная палочка, протей и другие бактерии, в значительной мере осложняющие течение заболевания. Лабораторную диагностику проводят в двух направлениях с целью обнаружения возбудителя в некротических тканях и экзотоксина в отечной жидкости.

Бактериоскопическое исследование. Проводится путем микроскопии мазков, приготовленных из отечной жидкости или некротизированной ткани. Наличие в препаратах крупных (1-1,5 ´ 3-10 мкм) грамположительных палочек, часть из которых (С l. р erfringens) образуют капсулу, позволяет поставить предварительный диагноз.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал вносят в несколько пробирок со средой Китта-Тароцци, железосульфитным агаром (среда Вильсона-Блера) и молоком. Часть пробирок прогревают при 80 °С в течение 30 мин для уничтожения неспорообразующих бактерий. Посевы инкубируют в обычном термостате при 37 °С. С l. р erfringens растет в глубине среды. В молоке уже через 3-4 ч после посева образуется губкообразный сгусток, содержащий пузырьки газа и отделившуюся прозрачную жидкость. На следующие сутки на среде Китта-Тароцци отмечается помутнение и газообразование, а на железосульфитном агаре несколько позднее появляются черные колонии в глубине агарового столбика. Для получения чистой культуры делают пересевы на сахарный кровяной агар в чашки Петри, которые инкубируют в строго анаэробных условиях при 37 °С в течение 3-4 дней. Выросшие колонии пересевают в пробирки со средой Китта-Тароцци. Идентификацию чистой культуры производят на основании признаков, перечисленных в табл.3.

Экспресс методы диагностики

       Биопроба. Для определения токсигенности исследуемую культуру, выращенную на среде Китта-Тароцци, центрифугируют и надосадочную жидкость вводят морской свинке, которая при положительном результате погибает.

Вследствие того, что токсины разных видов клостридий различаются по своим антигенным свойствам, их серологическую идентификацию проводят в реакции нейтрализации на лабораторных животных. С этой целью смесь исследуемого токсина с антитоксической сывороткой (С l. р erfringens или С l. novy) вводят подкожно морской свинке. В случае нейтрализации токсина животное остается живым; при отрицательной реакции морская свинка погибает через 30 мин – 4 ч после инъекции.

 

Схема 3. Микробиологическое исследование при газовой гангрене

Иммунохимические исследования. Для быстрого обнаружения токсина С l. р erfringens в раневом отделяемом определяют его лецитиназную активность. Положительная реакция на лецитиназу выявляется помутнением жидкости в пробирке. При отрицательной реакции, характеризующейся нейтрализацией фермента соответствующей антисывороткой, жидкость остается прозрачной.