Исследование окислительного стресса при остром панкреатите

В последнее время роли ОС в патогенезе ОП отводится большое внимание. В связи с этим важное значение приобретает диагностика ОС.

Существует множество методов исследования, позволяющих количественно определить состояние процессов ПО (22). Не будем подробно останавливаться на них, лишь перечислим, какие это методы:

.   Методы исследования СР:

определение концентрации оксида азота

измерение суммарной концентрации нитритов и нитратов в КВВВ

исследование продуктов ПОЛ и окислительной модификации белков

определение содержания ДК

определение содержания МДА

определение карбонильных производных белков

.   Исследование компонентов ферментативной АОС:

определение активности СОД

определение активности каталазы

определение активности ГПО

определение активности ГР

определение активности ГSТ

определение активности Г6ФД

определение активности АХЭ

определение ЦП в плазме крови модифицированным методом Ревина

.   Исследование компонентов неферментативной АОС:

определение содержания ГSH

метод раздельного определения АсК и дегидро-АсК в эритроцитах

.   Исследование функционального состояния эритроцитарной мембраны:

определение осмотической резистентности эритроцитов

.   - определение проницаемости эритроцитарных мембран

 

Собственные исследования

 

Материалы и методы исследования

 

Обследовали 15 человек обоего пола с установленным диагнозом ОП, проходивших лечение в ГКБ №2. Возраст пациентов составлял 23-57 лет. Помимо базисного лечения (антибактериальная, инфузионная, противовоспалительная терапия) они получали препарат Ронколейкин (рекомбинантный ИЛ-2) в дозировке 500 000 МЕ.

Препарат вводился внутривенно капельно в 400 мл 0,9% раствора NaCl с добавлением 4-5 мл 10% раствора альбумина двукратно по 25 000 МЕ с интервалом 2 суток между введениями.

У пациентов до и после лечения в сыворотке крови определяли уровень МДА (стандартным набором реактивов для определения ТБК-активных продуктов (ТБКАП) в сыворотке крови) фирмы Агат-Мед по методу Mihara M. (72, 73).

Принцип метода заключается в том, что в липидных системах в результате процессов ПОЛ образуется МДА, взаимодействие которого с ТБК приводит к образованию хромогена с максимумом поглощения в красной области видимого спектра при длине волны 535 нм (22).

Расчет МДА проводили по формуле:

поджелудочный железа панкреатит пищеварение

С =	D535 - D570	× 16,
	0,156

 

где:

С - содержание ТБК-активных продуктов в опытной пробе, мкмоль/л;

D₅₃₅ - оптическая плотность опытной пробы при 537 нм;

D ₅₇₀ - оптическая плотность опытной пробы при 570 нм;

0,156 - коэффициент молярной экстинкции комплекса МДА-ТБК в л/мкмоль/см;

16 - коэффициент разведения сыворотки.

Согласно этому методу, нормальные величины: 2,2-4,8 мкмоль/л или 0,022-0,047 ед. опт. плотности.

Статистическую обработку результатов проводили методами вариационного анализа и разностными методами: достоверность результатов определяли по критерию Стьюдента (31).

 

Результаты и обсуждение

 

Согласно полученным нами результатам уровень ТБКАП в сыворотке крови пациентов не превышал верхней границы нормы (рис. 7, табл. 3). У пациентов в начале лечения уровень ТБКАП составлял 1,99 ± 0,62, после лечения 3,17 ± 0,91 (рис. 8).

 

Таблица 3. С одержание ТБКАП в сыворотке крови пациентов с ОП (мкмоль/л).

До лечения	После лечения	Разностный метод
n = 5	n = 5	∆x = 2,22
x = 1,99	x = 3,17	∆S = 1,61
σ = 1,39	σ = 0,91	t = 1,38
Sx = 0,62	Sx = 0,91

 

После лечения препаратом ИЛ-2 статистически достоверных различий в уровне конечных продуктов ПОЛ обнаружено не было (p>0,05). Поэтому мы можем только предполагать наличие некоторой тенденции к увеличению уровня МДА у пациентов с ОП на фоне комплексной терапии в комплексе с Ронколейкином. Это позволяет предположить, что у пациентов принимающих Ронколейкин имеется достаточный резерв АОС, в то время как литературные данные (22) показывают, что у больных ОП имеется тенденция к увеличению ПОЛ и истощению ресурсов АОС и, как следствие, развитию ОС.

Таким образом, у обследуемых больных не наблюдали повышения уровня ТБКАП (конечных продуктов ПОЛ, в частности, МДА) в сыворотке крови как в начале, так и по окончании лечения.

Важно отметить, что рассасывание очага воспаления и регенерация некротизированных участков ткани ПЖ не сопровождается при данном комплексе терапевтических воздействий массивным выходом в кровь продуктов СРО, которые могут привести к активации ЦИК, повреждению эритроцитов, гиперактивации циркулирующих в крови лейкоцитов, повреждению эндотелия сосудов, окислению липопротеидов, нарушению микроциркуляции, вторичному повреждению других органов и формированию синдрома эндогенной интоксикации, которая является частым осложнением ОП (22).

 

 

Рисунок 7. Уровень ТБКАП пациентов с ОП, принимавших Ронколейкин (мкмоль/л).

Рисунок 8. Содержание ТБКАП у пациентов с ОП, принимавших Ронколейкин (рассчитанное с применением различных статистических методов).

 

Выводы

У пациентов, получавших комплексную терапию ИЛ-2, не было отмечено накопления в сыворотке ТБКАП, выходящего за пределы нормы для среднестатистической популяции.

.Ронколейкин может применяться как иммуномодулятор, регулирующий ПОЛ и поддерживающий АОС, однако необходимы дальнейшие исследования в области прменения ИЛ-2.

.Метод определения ТБКАП может использоваться для оценки состояния больных ОП, как один из основных показателей состояния АОС и процессов ПОЛ.

 

Литература

 

1. Алферов В.А. Пути оптимизации диагностики и лечения острого панкреатита: автореф. дис. … к.м.н. - Челябинск, 1993. - 18с.

2. Альперович Б.И., Казанцев Н.И., Мерзликин Н.В. Причины летальности при остром панкреатите и пути ее снижения. // Сов. медицина. - 1991. - №8. - С.61-63.

3. Андреев А.А. Патогенетические факторы нарушения перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы и антиоксидантная терапия пострадавших с сочетанной травмой: автореф. дис. … к.м.н. - М., 1999. - 23с.

4. Арчаков А.И., Мохосеев И.М. Модификация белков активным кислородом и их распад. // Биохимия. - 1989. - №2. - С.179-185.

5. Атанов Ю.П. Клиническая оценка некоторых синдромов панкреонекроза. // Хирургия. - 1993. - №10. - С.64-70.

6. Балалыкин Д.А., Кочетков И.Ю. Биомикроскопическое исследование микрососудов в поджелудочной железе при экспериментальной дегидратации у крыс. // Сб. науч. трудов "Микроциркуляторное русло тканей и органов при воздействии эстремальных факторов". - М., 1991. - С.45-49.

7. Белоусов С.С., Суслова Е.В., Трунова Е.М. Влияние ПОЛ и антиоксидантной терапии на фосфолипидную структуру мембран и бетаадренорецепторы у больных ИБС. // Перекисное окисление липидов и антиоксидантная терапия: сб. науч. трудов. - Н. Новгород, 1998. - С.5-14.

8. Бояринов Г.А., Соколов В.В. Озонированное искусственное кровообращение (экспериментальное обоснование и результаты применения). - Н. Новгород: Покровка, 1999. - 318с.

9. Бурневич С.З., Гельфанд Б.Р., Орлов Б.Б. Деструктивный панкреатит - современное состояние проблемы. // Вестн. хир. им. Грекова. - 2000. - №2. - С.116-123.

10.Васильев И.Т., Марков И.Н., Колесова О.Е. Озонотерапия больных с разлитыми формами перитонита. // Матер. 1-ой Всеросс. науч.-практ. конф. "Озон в биологии и медицине". - Н. Новгород. - 1992. - С.42-43.

11.Вашетко Р.В., Толстой А.Д., Курыгин А.А. Острый панкреатит и травмы поджелудочной железы. - СПб.: Питер, 2000. - С.18-33.

12.Винник Ю.С. Применение электро-химических методов при остром панкреатите. - М., 2000. - 155с.

13.Винник Ю.С., Черданцев Д.В., Вахрунин А.А. Диагностика микрогемодинамики при остром панкреатите. // Методология флоуметрии: сб. статей. - М., 1997. - С.93-106.

14.Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И., и др. Свободные радикалы в живых системах. // Биофизика. Итоги науки и техники. - М.: ВИНИТИ, 1991. - Т.29. - 252с.

15.Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты. // Вестник РАМН. - 1998. - №8. - С.43-51.

16.Власов А.П., Подеров В.Н., Саушев И.В. Нарушения и коррекция гомеостаза при панкреонекрозе. // 9-й Всеросс. съезд хирургов: материалы съезда, 20-22 сент. - Волгоград, 2000. - С.25.

17.Власов А.П., Подеров В.Н., Тарасова Т.В. Изменения липидного обмена при панкреонекрозе. // Хирургия органов гепатопанкреатобилиарной зоны: материалы межд. конф. хирургов, посвящ. 80-летию проф. В.В. Виноградова. - М., 2000. - С.86-87.

18.Гостищев В.К., Глушко В.А. Основные принципы лечения больных с острым деструктивным панкреатитом. // 9-й Всеросс. съезд хирургов: материалы съезда, 20-22 сент. - Волгоград, 2000. - С.30-31.

19.Гульман М.И., Винник М.С., Черданцев Д.В. Исследование органного кровотока поджелудочной железы при эксперементальном панкреонекрозе. // Применение лазерной допплеровской флоуметрии в медицинской практике. Материалы 1-й Всеросс. симп. - М., 1996. - С.27.

20.Гульман М.И., Винник М.С., Черданцев Д.В. Окислительные методы в лечении панкреонекроза. // 9-й Всеросс. съезд хирургов: материалы съезда, 20-22 сент. - Волгоград, 2000. - С.33.

21.Демин Д.Б. Состояние перекисного окисления липидов при панкреонекрозе и методы антирадикальной коррекции. // Автореф. дис. к.м.н. - Оренбург, 2000. - С.25.

22.Диагностика и лечение окислительного стресса при остром панкреатите / под ред. Черданцева Д.В., Свинник Ю.С. и др. - Красноярск, 2002. - С.4-64,133-136.

23.Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса. // Вопр. мед. химии. - 2001. - №6. - С.561-581.

24.Елисеенко В.И. Патогенетические механизмы лазерной терапии. // Сб. докладов, статей, сообщений и исследований "Лазеры и аэроны в медицине". - Калуга-Обнинск, 1997. - С.21-22.

25.Затевахин И.И., Цициашвили М.Ш., Будурова М.Д. Диагностика и лечение панкреонекроза: решенные и нерешенные вопросы. // 9-й Всеросс. съезд хирургов: материалы съезда, 20-22 сент. - Волгоград, 2000. - С.48.

26.Зборовская И.А., Банникова М.В. Антиоксидантная система организма, ее значение в метаболизме. Клинические аспекты. // Вестн. РАМН. - 1995. - №6. - С.53-59.

27.Зенков Н.К., Меньщикова Е.Б., Шергин С.М. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика. - Новосибирск, 1993. - 181с.

28.Зенков Н.К., Меньщикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах. // Успехи совр. биол. - 1993. - №3. - С.286-296.

29.Иванов В.А., Малярчук В.И., Янковский Л.Г. Значение диагностических методов исследования при остром панкреотите и панкреонекрозе. // Хирургия органов гепатопанкреатобилиарной зоны: мат. межд. конф. хирургов, посвящ. 80-летию проф. В.В. Виноградова. - М., 2000. - С.96-98.

30.Иванов Ю.В., Чудных С.М., Мозгалин А.Г. Эффективность мексидола при ОП. // Клиническая медицина. - 2002. - №9. - С.44-46.

31.Иванов Ю.В., Погорелюк О.Н. Обработка результатов медикобиологических исследований на микрокалькуляторах. - 1988.

32.Исмаилов И.С. Коррекция нарушений гомеостаза в послеоперационном периоде у больных с распространенным гнойным перитонитом. // Хирургия. - 1997. - №5. - С.52-55.

33.Калуев А.В. К вопросу о регуляторной роли активных форм кислорода в клетке. // Биохимия. - 1998. - №9. - С.86-89.

34.Капитанов А.Б., Пименов А.М. Каротиноиды как антиокислительные модуляторы клеточного метаболизма. // Успехи соврем. биол. - 1996. - №2. - С.179-200.

35.Кашин В.С., Козлов В.И., Авруцкий М.Я. Микроциркуляция при лазерном облучении крови и экстрокорпоральной интоксикации у больных с воспалительными заболеваниями органов брюшной полости. // Применение лазерной допплеровской флуометрии в медицинской практике. Матер. перв. Всеросс. симп. - М., 1996. - С.33-38.

36.Климов П.К., Фокина А.А. Физиология поджелудочной железы. - Л.: Наука, 1987. - С.5-20,36-39,111-128.

37.Козлов В.А., Хоменко В.А., Кондратьев В.П. Реография поджелудочной железы. - Свердловск: Урал. универс., 1990. - 88с.

38.Колесова О.Е., Леонтьева Г.В., Чудных С.М. Новый подход к лечению осрого панкреатита и профилактика его осложнений: метод. рекоменд. - М., 1996. - 12с.

39.Константинов А.А., Поступаев В.В. Избранные лекции по патобиохимии. - Вл-к: ДВУ, 1989. - С.86-97.

40.Кукош М.В., Емельянов Н.В., Гомозов Г.И. Инфицированный панкреонекроз, выбор объема операции. // 9-й Всеросс. съезд хирургов: материалы съезда, 20-22 сент. - Волгоград, 2000. - С.71.

41.Лечение перипанкреатического инфильтрата при остром деструктивном панкреатите. Пособие для врачей / под ред. Толстого А.Д. и др. - СПб, 2001. - С.5-6,26-27.

42.Луковникова Т.Н., Колесниченко Л.С., Нестеров И.В. Изменение концентрации восстановленного глутатиона и активности некоторых ферментов его метаболизма неспецифическим язвенным колитом. // Сибирский журнал. - 1999. - №3. - С.45-47.

43.Максимов В.Л., Куликов А.Г., Зеленцев С.Н. // Микроциркуляция: матер. межд. конф. по микроциркуляции. - М.-Ярославль, 1997. - С.231-239.

44.Малярчук В.И., Русанов В.П., Долгов Д.Л. Предупреждение сердечнососудистых и дыхательных осложнений при выполнении холецистэктомии у больных с повышенным операционным риском. // Хирургия органов гепатопанкреатобилиарной зоны: мат. межд. конф. хирургов, посвящ. 80-летию проф. В.В. Виноградова. - М., 2000. - С.72-73.

45.Марченко Л.Ф., Толстых П.И., Сопромадзе М.А. Липидный и фосфолипидный спектр сыворотки крови и мембран эритроцитов у больных сахарным диабетом с гнойно-некротическими поражениями нижних конечностей. // Военно-мед. ж. - 1995. - №3. - С.7-8.

46.Матюшин Б.Н., Логинов А.С., Ткачев В.Д. Активность антиоксидантных ферментов крови при хроническом поражении печени. // Воп. мед. химии. - 1995. - №4. - С.54-56.

47.Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов. // Успехи соврем. биол. - 1993. - №4. - С.442-445.

48.Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К., Реутов В.П. Оксид азота и NO-синтетазы в организме млекопитающих при различных функциональных состояниях. // Биохимия. - 2000. - №4. - С.485-503.

49.Мумладзе Р.Б., Чудных С.Н., Колесова О.Е. Лечение печеночной недостаточности при остром панкреатите. // Анналы хирургии. - 2000. - №4 - С.12-19.

50.Новиков И.И. Морфофункциональные и компенсаторные механизмы адаптации в системе микроциркуляции при экспериментальных воздействиях на организм. // Сб. научн. трудов "Микроциркуляторное русло тканей и органов при воздействии экстремальных факторов". - М., 1991. - С.3-6.

51.Пасечник И.Н. Механизмы повреждающего действия активированных форм кислорода на биологические структуры у больных в критических состояниях. // Вестн. интенсивной терапии. - 2001. - №4. - С.3-9.

52.Патогенез и принципы хирургического лечения распространенных форм панкреонекроза. / под ред. С.А. Шалимова, М.Е. Нечитайло, А.И. Панкова и др. // Клин. хирургия. - 1992. - №11. - С.63-67.

53.Перетягин С.П. Механизмы лечебного действия озона при гипоксии. // Озон в биологии и медицине: матер. 1-й Всеросс. науч. практ. конф. - Н. Новгород, 1992. - С.4-5.

54.Петухов Е.Б., Филимонов М.И., Александрова Н.П. Перекисное окисление липидов и нарушение свойств эритроцитов у больных с механической желтухой. // Хирургия. - 1990. - №1. - С.27-30.

55.Попов В.О. Обоснование комплексного патогенетического подхода к лечению больных острым панкретатитом: автореф. д.м.н. - Красноярск, 1999. - 51с.

56.Рубин Г.В. Острый панкреатит (клинико-лабораторные исследования): автореф. дис. к.м.н. - Саратов, 1999. - 23с.

57.Савельев В.С., Филимонов М.И., Гельфанд Б.Р., Бурневич С.З. Деструктивный панкреатит: алгоритм диагностики и лечения. // Consilium medicum. - 2001. - №6. - С.273.

58.Симоненков А.П., Федоров В.Д. О генезе нарушений микроциркуляции при тканевой гипоксии, шоке и диссеминированном внутрисосудистом свертывании крови. // Анест. и реан. - 1998. - №3 - С.32-35.

59.Скулачев В.П. Возможная роль активных форм кислорода в защите от вирусных инфекций. // Биохимия. - 1998. - №12. - С.1691-1694.

60.Скулачев В.П. Кислород в живой клетке: добро и зло. // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол. и колопроктол. - 1999. - №1. - С.12-18.

61.Скулачев В.П. Феноптоз: запрограммированная смерть организма. // Биохимия. - 1999. - №12. - С.1679-1688.

62.Суханова Г.А. Патохимия клетки. - Томск. - 1990. - 147с.

63.Сынкова Н.В., Зайцев К.Т. Транспорт белка через стенки обменных микрососудов брызжейки и тонкой кишки при воспалении. // Сб. научн. трудов "Микроциркуляторное русло тканей и органов при воздействии экстремальных факторов". - М., 1991. - С.21-28.

64.Тарасенко В.С., Смолягин А.И., Кубышкин В.А. Особенности иммунного статуса при остром панкреатите. // Хирургия. - 2000. - №8. - С.51-55.

65.Тиунов Л.А. Механизмы естественной детоксикации и антиоксидантной защиты. // Вестн. РАМН. - 1995. - №3. - С.9-13.

66.Тихвинская Е.Д., Банин В.В. Влияние эндотоксемии на эндотелий микрососудов. // Сб. научн. трудов "Микроциркуляторное русло тканей и органов при воздействии экстремальных факторов". - М., 1991. - С.6-16.

67.Толстой А.Д., Краснорогов В.Б., Гольцов В.Р., и др. Концепция "обрыва" панкреонекроза - ключ к решению проблемы деструктивного панкреатита. // Вестн. хир. им. И.И. Грекова. - 2001. - № 6. - С.26-30.

68.Уч-к по гистологии / под ред. Афанасьевой Ю.И., Юриной Н.А. - М.: Медицина, 2001. - С.609-615.

69.Филин В.И., Костюченко А.Л. Неатложная панкреатология. - СПб: Питер. - 1994. - 416с.

70.Шурыгина Е.П. Клиническое использование структурно-оптических параметров биожидкостей для улучшения диагностики и исходов острого панкреатита: автореф. дис. к.м.н. - Свердловск, 1990. - 22с.

71.Koolman J., Klaus-Heinrich Röhm. - New York: George Thieme Verlag Stuttgart. - 1998. /Пер. С англ. Козлова Л.В., Левина Е.С. и др. - М: Мир, 2000. - С.262-265.

72.Michara M., Uchiyama M. et al. Biochem., Med. - 1980. - v.23. - p.302.

73.Uchiyama M., Mihara M. Analyt. Biochem. - 1978. - v.86. - p.271.