Методы анализа лекарственного растительного сырья

 

Из сырья антраценпроизводные извлекают водой или спиртом различной концентрации.

Для получения свободных агликонов, антрагликозиды в растительном сырье подвергают гидролизу, свободные агликоны извлекают диэтиловым эфиром или хлороформом.

Для обнаружения антраценпроизводных в сырье используют качественные реакции и хроматографическое исследование.

Качественные реакции основаны на химических свойствах:

1. Реакция образования антрахинолятов со щелочью. Может быть проведена в трех вариантах:

а) на сухом сырье - при нанесении нескольких капель 5-10 % раствора натрия гидроксида на сырье появляется вишнево-красное пятно.

Положительный результат наблюдается, если антраценпроизводные присутствуют в окисленной форме. Рекомендована ГФ XI для подтверждения подлинности коры крушины.

б) с водным извлечением (1:10) - при добавлении к водному извлечению из сырья нескольких капель 5-10 % раствора щелочи образуется вишнево-красное окрашивание.

в) реакция Борнтрегера. Позволяет обнаружить эмодины в присутствии других производных антрацена.

Проба основана на способности антрагликозидов подвергаться щелочному гидролизу с образованием свободных агликонов. Одновременно происходит окисление восстановленных форм. После подкисления гидролизата агликоны извлекают эфиром. При встряхивании эфирного слоя с раствором аммиака эмодины переходят в водный слой, окрашивая его в вишнево-красный цвет. Хризофанол остается в органическом слое, окрашивая его в желтый цвет.

Предложена ГФ ХI для подтверждения подлинности коры крушины, листьев сенны, плодов жостера слабительного, корней ревеня, корневищ и корней марены. Содержащиеся в сырье марены производные ализарина окрашивают аммиачный слой в фиолетовый цвет.

2. Реакция микросублимации (микровозгонки).

Основана на способности антраценпроизводных возгоняться при 200 °С с последующей конденсацией на холодной поверхности без изменения основной структуры. Может быть проведена в двух вариантах: в пробирке и на предметном стекле. При нанесении на сублимат раствора натрия гидроксида образуется вишнево-красное (производные хризацина) или фиолетовое (производные ализарина) окрашивание.

Приводится в ГФ ХI для подтверждения подлинности коры крушины.

3. Реакция образования лаков.

Основана на способности антраценпроизводных образовывать со спиртовым раствором магния ацетата окрашенные комплексы.

Хроматографическое исследование.

Для идентификации антраценпроизводных в лекарственном растительном сырье используют бумажную хроматографию и хроматографию в тонком слое сорбента. Обнаруживают производные антрацена по характерной флуоресценции в УФ-свете.

Количественное определение.

Все методы количественного определения антраценпроизводных в сырье основаны на определении свободных агликонов после кислотного гидролиза. Агликоны экстрагируют в органический растворитель и определяют различными методами.

1. Фотоэлектроколориметрический метод.

Основан на способности окрашенных антрахинолятов поглощать монохроматический свет при длине волны 540 нм.

Предложен в 1957 г. Аутергоффом (Германия), модифицирован А.С. Романовой и А.И. Баньковским (НПО «ВИЛАР», 1965 г.).

Аутергофф предложил гидролиз и экстракцию агликонов объединить в одну стадию кипячением навески сырья с кислотой ледяной уксусной и последующей экстракцией диэтиловым эфиром.

Стадии определения:

1. Гидролиз антраценпроизводных и экстракция агликонов из сырья.

2. Получение окрашенных солей.

Эфирное извлечение обрабатывают в делительной воронке отдельными порциями щелочно-аммиачного раствора (5 % раствор натрия гидроксида, содержащий 2 % раствор аммиака). Антраценпроизводные в виде окрашенных антрахинолятов переходят в водную фазу; обрабатывают до тех пор, пока последняя порция щелочно-аммиачного раствора не будет оставаться бесцветной.

3. Окисление восстановленных форм антраценпроизводных.

Для перевода всех форм антраценпроизводных в окисленные, часть щелочно-аммиачного раствора антрахинолятов нагревают на водяной бане в течение 15 мин. Восстановленные формы окисляются кислородом воздуха и вступают в реакцию со щелочно-аммиачным раствором, окраска становится интенсивнее.

4. Измерение оптической плотности окрашенных антрахинолятов с помощью фотоэлектроколориметра (ФЭК) при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр).

Содержание антраценпроизводных в сырье (%) рассчитывают по калибровочному графику, построенному по кобальта хлориду (CoCl₂ · 6H₂O), в пересчете на истизин.

Фотоэлектроколориметрический метод рекомендован ГФ XI для определения содержания антраценпроизводных в сырье крушины, ревеня, марены красильной.

2. Спектрофотометрический метод.

Этим методом определяют содержание антраценпроизводных в листьях сенны. Имеются особенности из-за структуры действующих веществ:

- экстракцию сеннозидов проводят водой при нагревании;

- водное извлечение очищают от смолистых веществ;

- окисление восстановленных форм проводят с помощью железа окисного хлорида (FeCl₃);

- гидролиз гликозидов антрахинонов проводят 50 % раствором кислоты серной;

- оптическую плотность окрашенных антрахинолятов измеряют с помощью спектрофотометра при длине волны 523 нм;

- содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на хризофанол вычисляют по калибровочному графику, построенному по кобальта хлориду.