Мутации. Классификация. Мутагены выявление мутантов.

Мутации - это изменения в первичной структуре ДНК, которые выражаются в наследственно закрепленной утрате или изменении какого-либо признака.

КЛАССИФИКАЦИЯ МУТАЦИЙ

По характеру изменения генотипа

§ Генные (точечные)

§ Хромосомные

По характеру изменения фенотипа

§ Летальные

§ Морфологические

§ Физиологические

§ Биохимические

По происхождению

§ Спонтанные

§ Индуцированные

По локализации в клетке

§ Ядерные

§ Цитоплазматические (мутации внеядерных генов)

По фенотипическим последствиям

§ Прямые

§ Обратные

Мутагены:

Определение	Химические вещества или физические факторы, вызывающие предмутационные изменения в ДНК, которые в результате ошибок в работе репарирующих ферментов или в процессе репарации переходят в мутацию
Классификация по механизму действия	1. Аналоги азотистых оснований Þ замена пар оснований 2. Акридиновые красители Þ выпадения или вставки оснований 3. УФ, некоторые продукты микробного метаболизма Þ нарушение работы ДНК-полимеразы Þ образование тиминовых димеров 4. Нитрозосоединения Þ множественный эффект («супермутагены»)

Мутантные штаммы бактерий используются:

1) для получения продуктов биосинтеза бактерий-антибиотиков, аминокислот, ферментов и др.;

2) для получения вакцин;

3) для индикации мутагенности веществ.

►Ауксотрофные мутанты выявляют на минимальном агаре по методу реплик (см. протокол)

Генетические рекомбинации у бактерий. Механизмы и значение. Трансформация. Трансдукция.

Определение рекомбинационной изменчивости у бактерий – изменчивость, происходящая в результате включения в ДНК реципиентной клетки участка ДНК донорской клетки.

Трансдукция - перенос генетического материала от клетки-донора к клетке-реципиенту с помощью умеренного бактериофага. Фаг переносит небольшой фрагмент ДНК бактерии-донора. В результате трансдукции бактерия-реципиент приобретает новые фенотипические признаки: ферментативные свойства, устойчивость к антибиотикам, вредным воздействиям окружающей среды, вирулентность и др. При выходе бактериофага из клетки, фрагмент донорской трансдуцированной ДНК остается в хромосоме клетки-реципиента, а, следовательно, сохраняются и новые фенотипические признаки. Бактериофаг при трансдукции выполняет только транспортную функцию.

Типы трансдукций

1. Неспецифическая трансдукция. В процессе репродукции фага в момент сборки фаговых частиц в их головку вместе с фаговой ДНК может проникнуть какой-либо фрагмент ДНК бактерии-донора. В клетки реципиентного штамма могут быть перенесены любые гены донора. Фаги являются только переносчиком генетического материала от одних бактерий к другим. Фаговая ДНК не участвует в образовании рекомбинантов.

2. Специфическая трансдукция осуществляется фагами, обладающими избирательной локализацией на хромосоме бактерий. Образование трансдуцирующего фага происходит путем выщепления профага из бактериальной хромосомы вместе с генами, расположенными на хромосоме клетки-донора рядом с профагом. При взаимодействии фагов с клетками реципиентного штамма происходит включение гена бактерии-донора вместе с ДНК дефектного фага в хромосому бактерии-реципиента.

3. Абортивная трансдукция. Принесенный фагом фрагмент ДНК донора не включается в хромосому клетки-реципиента, а остается в ее цитоплазме и в таком виде способен поддерживаться и проявляться фенотипически.

Во время деления бактериальной клетки фрагмент ДНК может передаваться только одной из двух дочерних клеток, т.е. наследоваться однолинейно и в конечном итоге утрачиваться в потомстве.

Вариантом специфической трансдукции является Фаговая (лизогенная) конверсия. Это изменения свойств бактерии-реципиента под влиянием генов умеренного фага.

Механизмы фаговой конверсии:

встраивание бактериофага в нуклеоид
ò 1. Активация гена бактериофага ò	ò 2. Внесение гена от бактерии-донора (дефектные фаги при трансдукции) ò	3.Встраивание около повреждённого промотора ò замена его фаговым промотором ò экспрессия «молчащих» генов бактерии-реципиента
появление у бактерии-реципиента нового признака

Трансформация -перенос генетического материала от одного организма к другому, где посредством генетической рекомбинации часть трансформирующей молекулы ДНК может обмениваться с частью хромосомной ДНК донора.

Трансформация бактерий — форма генетической изменчивости, при которой бактерия-реципиент поглощает из внешней среды трофическим путем фрагменты ДНК бактерии-донора. Это приводит к образованию рекомбинантных бактерий, обладающих некоторыми свойствами донорских клеток.

Впервые феномен трансформации был установлен Ф. Гриффитсом в 1928 г. на модели бескапсульного и капсульного пневмококков. Для проведения опыта использовали трех белых мышей. Первую мышь заражали живыми, бескапсульными (невирулентными) пневмококками. Второй мыши вводили убитую культуру капсульных (вирулентных) пневмококков; третьей мыши — смесь живых невирулентных пневмококков и убитых вирулентных пневмококков. В результате опыта в живых оставались первая и вторая мыши; погибала третья мышь, так как живые бескапсульные пневмококки поглощали фрагменты ДНК убитых капсульных и сами превращались в капсульные (вирулентные) пневмококки. Механизм такой трансформации оставался неясным в течение 16 лет. В 1944 г. осуществили трансформацию бескапсульных пневмококков в капсульные in vitro. Они добавили к культуре бескапсульных пневмококков ДНК, выделенную из капсульных пневмококков, в результате чего бескапсульные превратились в капсульные и стали вирулентными для мышей. Опыт доказал, что носителем единиц наследственности (генов) является ДНК.

Процесс трансформации бактерий можно подразделить на несколько фаз:

1) адсорбция ДНК-донора на клетке-реципиенте;

2) проникновение ДНК внутрь клетки-реципиента;

3) соединение ДНК с гомологичным участком хромосомы реципиента с последующей рекомбинацией.

Эффективность трансформации зависит от степени гомологичности ДНК донора и реципиента. Чем выше гомологичность, тем эффективнее спаривание, и тем больше образуется рекомбинантных бактерий. Межвидовая трансформация происходит гораздо реже, чем внутривидовая.