Схема ТСХ-скрининга веществ основного характера

Условия исследования:

Пластинки «Сорбфил» - силикагель, закреплённый на полимерной подложке силиказолем. Система растворителей - диоксан:хлороформ:ацетон:25% раствор NH₃ 23,5: 22,5:2,5:1,5. Время насыщения камеры - 20 минут. Высота подъёма фронта растворителей - 8 см.

Реагенты для обнаружения:

10% раствор серной кислоты – обнаружение производных фенотиазина, флуоресценция хинина;

Реактив Марки (прокапывание) - фенотиазины (усиление окраски), димедрол, алкалоиды опия;

Реактив Драгендорфа - общий реагент на азотсодержащие вещества основного характера.

Методика исследования

В зоны А и С точками наносят по 1/2 части аликвоты А_О (методика подготовки пробы аналогична приведенной для веществ кислотного характера). В зону В наносят в точку 1-2 метчика, причём аминазин - обязательно. В зону D наносят полосой аликвоту Б_O. После хроматографирования пластинку подсушивают. Зоны А и В обрабатывают раствором серной кислоты. Наблюдают окраску и флуоресценцию при 366 нм. Затем обрабатывают зоны А и В реактивом Драгендорфа, а зону С прокапывают реактивом Марки. Отмечают окраску, копируют пластинку и определяют значения R_f и R_S (по аминазину). С зоной D поступают также, как и с зоной Е для веществ кислотного характера.

Таблица 2.

Значения R_f и R_S (по аминазину) для веществ основного характера

Соединения	Значения	Результаты проявления
	Rf	RS	H2SO4	УФ 366 нм	р. Марки	KBiI4
Аминазин	0,75	1,00	розовое	^___	инт.розовое	оранжевое
Амидопирин	0,33	0,66	^___	^___	^___	оранжевое
Атропин	0,24	0,40	^___	^___	^___	оранжевое
Димедрол	0,69	0,92	^___	^___	жёлтое	оранжевое
Кодеин	0,38	0,68	^___	^___	фиолетовое	оранжевое
Папаверин	0,76	1,01	^___	^___	кр.-фиолет.	оранжевое
Хинин	0,40	0,53	^___	голуб. флуор.		оранжевое
Дипразин	0,76	1,01	бл.-розов.	^___	инт.розовое	оранжевое

Литература: [4].

ЗАНЯТИЕ №13. Количественное определение лекарственных веществ,выделенных из биоматериала полярными растворителями

Цель занятия: Научиться проводить количественное определение веществ, изолируемых из биоматериала полярными растворителями

ХОД ЗАНЯТИЯ

· Контроль исходного уровня знаний

1. Правила работы на спектрофотометре, фотоэлектроколориметре и флуориметре.

2. Основные требования, предъявляемые к методам количественного определения токсических веществ в биологических жидкостях.

3. Применение физико-химических методов в химико-токсикологическом анализе.

· Лабораторная работа

Методика фотометрического определения папаверина (аминазина)

В биожидкостях

В пенициллиновый флакон с анализируемой пробой прибавляют 10 мл воды очищенной, перемешивают. Фильтруют в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 мл 0,1% раствора поливинилового спирта (ПВС), 1 мл 0,07% раствора эозина, 2 мл 0,01 М раствора серной кислоты и доводят водой до метки. Параллельно готовят раствор сравнения, содержащий все реактивы за исключением определяемых соединений.

Для приготовления раствора стандартного образца в мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 2 мл стандартного раствора папаверина (аминазина) - 10 мкг/мл, прибавляют вышеуказанные реактивы и доводят водой до метки. Измеряют оптическую плотность раствора на ФЭКе при длине волны 540 нм, в кювете с толщиной слоя 2 см относительно раствора сравнения. Концентрацию папаверина (аминазина) в мкг/мл рассчитывают по формуле:

где А_Х – оптическая плотность анализируемого раствора;

где А_СТ – оптическая плотность стандартного раствора.

Методика количественного определения хинина в биожидкостях

В пенициллиновый флакон с анализируемой пробой прибавляют 10 мл 0,01 М раствора серной кислоты, встряхивают 5 минут и фильтруют в пенициллиновый флакон. В качестве стандарта используют раствор хинина с концентрацией 1 мкг/мл. Измеряют интенсивность флуоресценции анализируемого и стандартного растворов. Концентрацию хинина в мкг/мл в анализируемой биожидкости рассчитывают по формуле:

где I_Х – интенсивность флуоресценции анализируемого раствора;

где I_СТ - интенсивность флуоресценции стандартного раствора.

Методика спектрофотометрического определения производных барбитуровой кислоты в биожидкостях

В пенициллиновый флакон с анализируемой пробой прибавляют 10 мл воды очищенной. Встряхивают 5 минут. Фильтруют в пенициллиновый флакон. В кювету спектрофотометра с толщиной слоя 1 см помещают фильтрат и добавляют 3 капли 0,2 М раствора серной кислоты. Перемешивают. Измеряют оптическую плотность раствора при 240 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную. Затем в кювету с анализируемым раствором прибавляют 3 капли 30% спиртового раствора NaOH, перемешивают и измеряют оптическую плотность. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную. Аналогично измеряют оптическую плотность стандартного раствора барбитала с концентрацией 10 мкг/мл. Концентрацию барбитуратов (мкг/мл) в анализируемой биологической жидкости рассчитывают по формуле:

где и - оптические плотности анализируемого раствора в щелочной и кислой средах;

где и - оптические плотности стандартного раствора в щелочной и кислой средах;

Литература: [4].