Занятие № 31 тема: гепатотропные вирусы

ЗАНЯТИЕ № 31 ТЕМА: ГЕПАТОТРОПНЫЕ ВИРУСЫ

ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ

1. Вирусные гепатиты A, B, C, D, E, G. Этиология. Сравнительная характеристика основных биологических свойств возбудителей вирусных гепатитов.

2. Вирус гепатита А. Структура и свойства HAV. Пути проникновения и циркуляция в организме. Патогенез, клиника, исход заболевания. Лабораторная диагностика гепатита А. Иммунитет, специфическая профилактика, лечение.

3. Вирус гепатита E. Структура вируса. Эпидемиология, клинические формы, исход заболевания. Вирусологическая и серологическая диагностика.

4. Гепаднавирусы. Морфология, особенности репродукции вируса гепатита В. Структура генома, антигены, полипептидные фрагменты HBs-Ag, подтипы вируса.

5. Гепатит В: эпидемиология, патогенез, клинические формы течения заболевания, исходы. Лабораторная диагностика. Иммунитет, специфическая профилактика, лечение.

6. Гепатит D. Особенности строения вируса. Характеристика заболевания: коинфекция, суперинфекция. Лабораторная диагностика, профилактика.

7. Гепатит С: классификация вируса, ультраструктура, антигены. Общая характеристика заболевания, исходы заболевания. Диагностика гепатита C: скрининговые методы, подтверждающие тесты.

8. Гепатит G: возбудитель, вирусологическая диагностика. Посттрансфузионный гепатит TTV: характеристика вируса, вирусологическая диагностика.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА

Лабораторная диагностика гепатита А (инкубационный период 14-45 дней)

Исследуемый материал: кровь (сыворотка), фекалии, вода и пищевые продукты

Выявление антигена (реакции) ИФА - антиген вируса (HAVAg) выявляют в экстрактах фекалий со 2-й недели и до конца болезни;

Выявление вируса (методы ) Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ), в научных и производственных целях используют заражение обезьян и культур клеток

Выявление антител (классы Ат, сроки, реакции) ИФА, РИА IgM 4-8 недели,IgG с 4 недели, остаются на всю жизнь

Генодиагностика (сроки, реакции) ПЦР - РНК вируса (HAV RNA)

 

Динамика появления серологических маркеров гепатита А

Оценка результатов серологического исследования 1.Антиген HAV обнаруживается в конце инкубационного, весь продромальный период, но при манифестации инфекции с появлением желтухи исчезает (показатель заразности инфекции!). 2.Основным диагностическим критерием текущей или свежеперенесенной инфекции являются антитела класса IgM (показатель заразности инфекции!). 3.Антитела класса IgG появляются на поздних стадиях заболевания, сохраняются в течение длительного времени и свидетельствуют о перенесенном заболевании.

Лабораторная диагностика гепатита В (инкубационный период 2- 6 месяцев)

Исследуемый материал кровь (сыворотка), биоптаты печени

Выявление антигенов (очередность, сроки, длительность) ИФА, РПГА в сыворотке крови определяют поверхностный антиген HВsAg 1-5 месяцев, “антиген инфекционности ” HBеAg 2-3 месяца; HBс Ag в крови не циркулирует в свободном виде, его можно обнаружить только в биоптатах печени- в ядрах гепатоцитов

Выявление антител (классы Ат, сроки, реакции) ИФА, РПГА в сыворотке крови определяют: антитела к поверхностному антигену (анти-HВsAg)- с 6 месяцев; антитела к “антигену инфекционности” анти-HВеAg с 4-5 месяцев). Антитела к сердцевинному антигену (анти-HВсAg IgM и антиHВcAg IgG) служат индикатором вирусемии и могут определяться в гепатоцитах методом РИФ с 2 месяцев;

Генодиагностика. Выявление НК (сроки, реакции) ДНК (HBV DNA вируса в крови и биоптатах печени с момента заражения до выздоровления (в среднем 6 месяцев) методом ПЦР и молекулярной гибридизации.

Маркеры гепатита В

Гепатит B (ГВ) – острое или хроническое заболевание печени, вызываемое вирусом гепатита В (ВГВ), протекающее в различных клинико-морфологических вариантах: от бессимптомных форм до злокачественных (цирроз печени, гепатоцеллюлярная карцинома). Гепатит В встречается гораздо чаще протекает более остро и о заканчивается без осложнений. Но у 10% больных ВГВ переходит в хроническое течение, а в 1 % случаев развивается цирроз и первичный рак печени. На долю ГВ приходится около 15% всех острых гепатитов и не менее 50% хронических. Безжелтушные и субклинические формы инфекции, в основном, остаются нераспознанными (до 95% случаев). Заражение ВГВ происходит от «здоровых» вирусоносителей с нераспознанными хроническими или острыми формами ГВ при переливании крови и ее компонентов, при медицинских манипуляциях и сексуальных контактах. Вирус может передаваться от инфицированной матери к ребенку во время родов при нарушении целостности плаценты. В семьях больных хроническими формами ГВ и носителей HBsAg вследствие реализации гемоконтактов в быту. Вирус гепатита В чрезвычайно устойчив, при комнатной температуре сохраняется в течение 3 мес., в замороженном виде – 15–20 лет.

ВГВ чаще всего поражает печень. однако ДНК и белки вируса обнаруживаются также в почках, селезенке, поджелудочной железе, коже, костном мозге и мононуклеарах периферической крови.

Маркеры ВГВ это ДНК вируса, вирусные антигены HBsAg и HBeAg, а также антитела к ним анти-HBs, анти-HBe, и к ядерному белку HBc -анти-HBc, которые могут бытьобнаружены в организме больного. Комплексное изучение маркёров позволяет правильно установить стадию инфекции ВГВ и прогнозировать ее дальнейшее развитие.

HBsAg -поверхностный антигенВГВ - б елок его внешней оболочки. Это сложный антиген, состоящий из несколько антигенных детерминант, определяющих субтип HBsAg. Известны десять субтипов HBsAg: 7 основных - ауw1, ayw2, ayw3, ayw4, ayr, adr, adw2, adw4, adrq+, adrq–, и 5 редких: awr, adrw, adyr и adywr. На территории РБ преобладает HBsAg субтипа ауw (ayw2 – 57%; ayw3 – 37%)

HBсAg (HBc ore Ag) - внутренний или сердцевинный (ядерный) антиген - белок нуклеокапсида, обеспечивающий репликативную активность ВГВ. HBeAg (HBprecoreAg) окружает ядерный, это конформационно измененный HBcAg. HBeAg обнаруживается исключительно в биоптатах печени в ядрах гепатоцитов, а HBeAg циркулирует в крови инфицированных лиц.

Маркеры гепатита А

Вирус ГА - это пикорнавирус, размером 27 нм, не имеющий наружной оболочки, состоит из белковой капсулы, или капсида, содержащей положительную одноцепочную РНК, являющейся матрицей для выработки вирусных белков внутри клетки. Во всех изолятах собранных в разных частях мира, наблюдается только один серотип ВГА.

Маркеры вируса ГА – РНК ВГА, антиген ВГА – белок нуклеокапсида, антитела (анти-ВГА класса IgМ и анти ВГА IgG), а также РНК ВГА.

Лабораторная диагностика основана на выявлении маркеров вируса ГА с помощью ИФА, РИА и иммуноэлектронной микроскопии. ПЦР диагностика позволяет обнаружить РНК ВГА в концентрации 40 копий/мл.

Маркеры гепатита С

ВГС – сложный флавивирус с однонитчатой положительной РНК, состоящей из 10 000 нуклеотидов, которые кодируют три структурных (капсидных) белка (С, Е1, Е2) и пять функциональных белков (NS2, NS3, NS4, NS5). Особенность ВГС - высокая гетерогенность его генома.

Для диагностики ВГ методом ИФА выявляют маркеры ВГС: антитела к вирусу ГС анти-ВГС: анти-ВГС IgМ, анти-ВГС IgG, и РНК-ВГС методом ПЦР. Антигены вируса из-за его крайне низкой концентрации в крови при ГС не доступны выявлению с помощью современных методов индикации. В качестве антигенов используют капсидные (С22) и функциональные(NS3, NS5), полученные при помощи рекомбинантной технологиии или синтеза. К настоящему времени разработаны 4 поколения тест-систем ИФА, но ИФА первого поколения из-за низкой чувствительности не используют.

РНК-ВГС -самый ранний маркер инфекции, может быть обнаружен методом ПЦР через 1- 2 недели после инфицирования, незадолго до повышения уровня сывороточных трансаминаз. Выявление РНК ВГС считается «золотым» стандартом в диагностике ГС и подтверждением положительных результатов обнаружения анти-ВГС. В настоящее время для индикации РНК ВГС используется ПЦР в качественном и количественном варианте, их чувствительность достигла 10-50 копий РНК в 1 мл крови

Анти-ВГС обнаруживаются ИФА к 5-6 неделе после начала гепатита в 80% случаев и к 12 неделе у 90% лиц. Однако при этом возможны ложноположительные реакции. Для их отличия от истинных, используют – рекомбинантный иммуноблотинг для определение спектра белков анти-ВГС. Диагноз хронического ГС у лиц с наличием анти-ВГС обычно ставится на основании повышенных печеночных проб в течение более 6 месяцев.

ЗАНЯТИЕ № 31 ТЕМА: ГЕПАТОТРОПНЫЕ ВИРУСЫ