Мероприятия, обеспечивающие асептические условия при посевах

Требования к помещению для посева на стерильность.

Посев исследуемого материала желательно проводить в настольных боксах с ламинарным потоком воздуха. Эти боксы размещают в отдельных помещениях бактериологической лаборатории.

При отсутствии боксов с ламинарным потоком воздуха, контроль стерильности проводят в боксированных помещениях. Общая площадь бокса должна быть не менее 3 м².

В боксированном помещении стены должны быть окрашены масляной краской и выложены кафельной плиткой, не должны иметь выступов, карнизов, трещин; пол в боксе и рабочий стол должны быть покрыты линолеумом, стенки и ножки стола покрашены масляной краской.

Боксы оборудуют приточно-вытяжной вентиляцией, в них подаётся стерильный воздух, проходящий через бактериальные фильтры с материалом Петрянова.

В боксе и предбокснике устанавливают настольные (БОН) и потолочные (ОБП) ультрафиолетовые облучатели из расчёта вт. удельной мощности ламп, создающих прямое излучение на 1 м² помещения. Облучатели размещают на высоте 2-2,5 м от пола.

Для тушения пожара в боксированном помещении должны быть в наличии противопожарные средства, углекислотные огнетушители типа ОУ-2 из расчёта один огнетушитель на предбоксник и бокс.

Подготовка бокса, инструментов и персонала к работе.

Ежедневно до проведения работы помещения бокса и предбоксника подвергают тщательной обработке. Стены, пол, поверхности инвентаря протирают раствором, содержащим 3% перекиси водорода и 0,5% моющего средства. В случае обнаружения в воздухе грибов или споровых форм микроорганизмов, влажную уборку проводят 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства.

Внутреннюю поверхность настольного бокса обрабатывают также, как и помещение бокса. Через 45-60 минут после обработки в бокс вносят все необходимые для работы инструменты и материалы кроме образцов продукции.

Перед внесением материалов в настольном боксе включают вентиляцию на время, достаточное для обеспечения полного обмена воздуха в нём.

За 1,5-2 часа до начала работы в боксе включают бактерицидные лампы.

Инструменту, посуду и спецодежду, используемые в работе, предварительно стерилизуют, а тканевые изделия обрабатывают при следующем режиме: температура 132˚С±2˚С. время стерилизационной выдержки – 20мин., изделия из резины (перчатки и т.д.) – при температуре 120˚С±2˚С в течении 45 минут.

В процессе работы вспомогательный инструмент –2-3 раза заменяют новым стерильным комплектом.

Перед входом в бокс работники лаборатории тщательно моют руки тёплой водой с мылом и щёткой, вытирают стерильным полотенцем, одевают в предбокснике на ноги бахилы, стерильные халаты, 4-х слойные маски, шапочки, стерильные перчатки.

В процессе посева в боксе регулярно проверяют обсеменённость воздуха. Для этого на рабочий стол ставят 2 чашки с МПА, открывая их на 15 минут, затем чашки помещают в термостат при температуре 37˚С на 48 часов. Допускается рост на более трёх колоний неспорообразующих сапрофитов.

В случае роста на чашках более трёх колоний проведение дальнейших работ в данном боксе запрещается. В боксе дополнительно проводят тщательную уборку 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства.

Контроль стерильности изделий проводят путём погружения в питательные среды. В исключительных случаях, когда необходимо проверить стерильность инструмента больших размеров, пробы забирают методом смыва, стерильной марлевой салфеткой размером 5х5 см2, предварительно увлажнённой стерильным физиологическим раствором или стерильной водой.

Перед посевом исследуемый материал вносят в предбоксник, предварительно снимая наружную мягкую упаковку. В пребокснике пакеты, биксы протирают снаружи с помощью стерильного пинцета стерильной салфеткой, обильно смоченной 65 раствором перекиси водорода, перекладывают на стерильный лоток и оставляют на 30 минут. При поступлении изделий в мягкой упаковке, первый слой снимают в предбокснике и изделия во внутренней упаковке сразу переносят в бокс.

Посевы на стерильность проводят бактериолог с помощью лаборанта.