Правила обращения и ухода за микроскопом

1 Микроскоп необходимо содержать в чистоте и предохранять от повреждений.

2 Для сохранения внешнего вида микроскопа, его необходимо периодически протирать мягкой салфеткой, слегка пропитанной бескислотным вазелином, предварительно удалив пыль, а затем вытирать сухой мягкой чистой салфеткой.

3 Металлические детали микроскопа необходимо содержать в чистоте. Для чистки микроскопа следует использовать специальные смазочные некоррозирующие жидкости.

4 Для предохранения оптических деталей визуальной насадки от пыли необходимо оставлять окуляры в окулярных тубусах.

5 Нельзя касаться пальцами поверхностей оптических деталей. В случае если на линзу объектива попала пыль, ее следует удалить пыль при помощи вентилятора или кисточки. В случае если пыль проникла внутрь объектива и на внутренних поверхностях линз образовался мутный налет, необходимо отправить объектив для чистки в оптическую мастерскую.

6 Во избежание нарушения юстировки необходимо предохранять микроскоп от толчков и ударов.

7 Во избежание попадания пыли на внутреннюю поверхность линз микроскоп необходимо хранить под чехлом или в упаковке.

8 Не следует самостоятельно разбирать микроскоп и его составные для устранения неисправностей.

Меры безопасности

При работе с микроскопом источником опасности является электрический ток. Конструкция микроскопа исключает возможность случайного соприкосновения к токоведущим частям, находящимся под напряжением. Не рекомендуется оставлять включенный в сеть микроскоп без присмотра. После окончания работы микроскоп необходимо отключать от сети.

Правила работы с иммерсионным объективом

При работе с масляным иммерсионным объективом следует соблюдать определенные правила. Для проведения исследования при помощи объектива 100х все образцы следует закрывать покровными стеклами. На сухой фиксированный окрашенный препарат наносят каплю иммерсионного масла. Устанавливают объектив 100х и, глядя сбоку, осторожно поднимают предметный столик микроскопа до погружения линзы объектива в масло. Следят за тем, чтобы фронтальная линза объектива не коснулась покровного стекла. Затем, наблюдая в окуляр, макровинтом медленно опускают предметный столик и фокусируют объектив. Тонкую фокусировку осуществляют с помощью микрометрического винта.

По окончании микроскопирования опускают предметный столик, снимают препарат и осторожно протирают фронтальную линзу сначала сухой хлопчатобумажной салфеткой или фильтровальной бумагой, а затем салфеткой, слегка смоченной очищенным бензином. Нельзя оставлять масло на поверхности линзы, так как на нем фокусируется пыль, что может со временем привести к повреждению оптики объектива. Эффективен способ удаления масла как жидкого, так и застывшего, свежеотломленным пенопластом. В отдельных случаях помогает протирка тканью, смоченной дистиллированной водой. Края линз с выступающей оправой очищают с помощью палочки, обернутой тканью.

 

Приемы микроскопирования живых микроорганизмов

Нативные (прижизненные) препараты готовят для исследования живых неокрашенных бактерий. Наиболее распространенными являются методы «висячей капли», «раздавленной капли», «отпечаток», «агаровая пленка», микрокамеры с плотными средами. Препараты живых клеток обычно рассматривают с «сухими» системами микроскопа. Для прижизненного изучения бактерий часто используют фазово-контрастную и темнопольную микроскопию.

Морфологическое разнообразие бактерий можно изучить при приготовлении негативного тушевого препарата, когда окрашивают суспензию тушью. В поле зрения микроскопа на общем темном фоне туши отчетливо видны неокрашенные клетки микроорганизмов различной формы, разных размеров, расположенные в разнообразных сочетаниях.

Препараты, работа с которыми закончена, прежде чем вымыть, выдерживают в дезинфицирующем растворе.

Препарат «раздавленная капля». На предметное стекло наносят каплю стерильной водопроводной воды, помещают в нее небольшое количество клеток изучаемых микроорганизмов, размешивают и накрывают покровным стеклом. Для этого покровное стекло ставят на ребро у края капли и постепенно опускают на нее. Микроорганизмы, выращенные на плотной или в жидкой питательной среде, переносят в каплю воды бактериологической петлей; выращенные в жидкой среде – переносят стерильной пипеткой. В последнем случае каплю воды на предметное стекло можно не наносить. Капля исследуемого материала должна быть настолько мала, чтобы из-под покровного стекла не выступал избыток жидкости. Если он образовался, его необходимо удалить фильтровальной бумагой. Препарат можно микроскопировать с использованием иммерсионной системы.

Препарат «висячая капля». Каплю суспензии микроорганизмов петлей или обычным пером наносят на покровное стекло, которое поворачивают каплей вниз и помещают на специальное предметное стекло с углублением (лункой) в центре. Капля должна свободно висеть, не касаясь краев и дна лунки. Края лунки предварительно смазывают вазелином. Капля оказывается герметизированной во влажной камере, что делает возможным многодневное наблюдение за объектом. При работе с бактериями этот метод используется редко.

Препарат «отпечаток». Из агаризованой среды, на которой растут микроорганизмы, вырезают скальпелем небольшой кубик и переносят на предметное стекло так, чтобы поверхность с микроорганизмами была обращена вверх. Затем к газону или к колонии прикладывают чистое покровное стекло, слегка надавливают на него петлей или пинцетом и тотчас же снимают, стараясь не сдвинуть в сторону. Полученный препарат помещают отпечатком вниз в каплю воды или метиленового синего (1: 40) на предметное стекло. Отпечаток можно получить и на предметном стекле, если касаться поверхности колонии или газона предметным стеклом. Препарат «отпечаток» используют в основном при исследовании спороношения стрептомицетов.

Препарат «микрокультура» ( или «агаровая пленка»). На тонкое, простерилизованное и нагретое предметное стекло наносят стерильной нагретой пипеткой 0,2–0,3 мл горячей агаризованной питательной среды и распределяют ее по всей поверхности стекла. После застывания среды удаляют петлей лишний агар, оставляя два тонких участка пленки величиной с покровное стекло каждый. В центр квадратов бактериальной петлей или пипеткой наносят каплю жидкой культуры или суспензии клеток микроорганизма. Стекло помещают во влажную камеру (чашка Петри со слоем мокрой фильтровальной бумаги), которую ставят в термостат. Перед микроскопированием на пленку с выросшей микрокультурой наносят каплю красителя или каплю воды в случае подсыхания пленки, и затем осторожно накрывают покровным стеклом.

Выращивание микроорганизмов непосредственно на предметном стекле позволяет вести микроскопическое наблюдение за процессами их роста и развития, изучать цикл развития, способ размножения (деление-почкование), влияние на эти процессы каких-либо агентов. На препаратах не нарушается естественное расположение клеток в растущей микроколонии. Выращивание микроколонии можно проводить в аэробных или анаэробных (под покровным стеклом, загерметизированном лаком) условиях.

Агаровую пленку можно нанести на покровное стекло и приготовить препарат «висячая капля». На таком препарате можно наблюдать движение бактерий по типу скольжения. Движение бактерий за счет жгутиков можно наблюдать во влажных препаратах, применяя в большинстве случаев светлопольный микроскоп. Наиболее эффективно наблюдение за подвижностью в темнопольном микроскопе.

 

Вопросы для самоконтроля

 

1 Перечислите основные задачи микроскопии.

2 Охарактеризуйте следующие виды микроскопии: светлопольная, фазово-контрастная, темнопольная, люминесцентная, электронная, сканирующая, компъютерная интерференционная.

3 Каково устройство светлопольного микроскопа?

4 В чем сущность иммерсионного метода микроскопирования?

5 Охарактеризуйте способы приготовления препаратов живых клеток микроорганизмов.

 

Практическое занятие 2

Цель: ознакомление с особенностями разных видов микроскопии, изучениеустройства светлопольного микроскопа; овладение методом иммерсионного микроскопирования; ознакомление с приемами микроскопирования живых клеток микроорганизмов.

 

Материалы и оборудование: микроскопы биологические, предметные и покровные стекла, спиртовки, спички, бактериальные петли, иммерсионное масло, стерильные медицинские пипетки, пинцеты, палочки ватные гигиенические, фильтровальная бумага, пенициллиновые бутылочки со стерильной водопроводной водой, ванночки, мостики, немытые фрукты или овощи, суспензия гороха (либо настои мяса, рыбы, овощей и др.).

 

Ход работы

 

1 Ознакомиться с основными задачами микроскопии.

2 Используя материал, представленный в п. 2 данного руководства, ознакомиться с различными видами микроскопии. Выяснить их особенности по схеме таблицы 2.1, записать в рабочую тетрадь.

 

Таблица 2.1 – Особенности различных видов микроскопии

 

Виды микроскопии	Источник света, принцип получения изображения	Максимальная(ое)	Область применения
разрешающая способ-ность	увели-чение микро-скопа
1 Светлопольная
2 Темнопольная
3 Фазово-контрастная
4Люминесцентная
5 Электронная
6 Сканирующая световая
7 Сканирующая электронная
8 Компъютерная интерференционная
9 Лазерная конфокальная

 

3 Изучить устройство светлопольного микроскопа, используя описание в п. 3 методического руководства и рассматривая микроскоп.

4 Ознакомиться с сущностью иммерсионного метода микроскопирования, его преимуществом при работе с микроорганизмами, правилами пользования иммерсионным объективом.

5 Охарактеризовать светлопольный микроскоп по схеме таблицы 2.2. Записать в рабочую тетрадь.

 

Таблица 2.2 – Устройство микроскопа биологического

Параметры, свойства	Характеристика микроскопа
Микроскоп биологический состоит из следующих двух частей:
Увеличение окуляров
Увеличение объективов
Увеличение микроскопа: а) минимальное; б) максимальное
Оформление оправы иммерсионного масляного объектива
Увеличение иммерсионного объектива
Сущность иммерсионного метода микроскопирования
Правила ухода за иммерсионным объективом

 

6 Ознакомиться с различными приемами микроскопирования живых микроорганизмов.

7 Приготовить препараты по методу «раздавленная капля» из различных объектов: смыва фруктов, стола, рук, различных настоев, пользуясь описанием методики, изложенной в п. 5 данного руководства.

8 Препараты микроскопировать с объективами 10х и 100х. Определить форму и сочетание клеток, подвижность.

9 Все наблюдения и рисунки отметить в таблице 2.3. Под рисунком указать увеличение микроскопа.

10 Указать в выводах степень наблюдаемого разнообразия прокариот; преимущества и недостатки использования в работе прижизненных препаратов.

 

Таблица 2.3 – Особенности морфологии клеток микроорганизмов

Параметры	Характеристика
Состав среды, объект исследования
Возраст культуры
Форма клеток
Сочетание клеток
Подвижность
Рисунок клеток
Выводы:

Занятие 3