Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Определение фаготипа (при стафилококковых инфекциях).↑ ⇐ ПредыдущаяСтр 2 из 2 Содержание книги
Поиск на нашем сайте
Определение фаготипа проводится с помощью специальных наборов типовых фагов и является одним из методов внутривидовой дифференциации бактерий. Цели фаготипиривания: 1. Помощь эпидемиологу в выявлении источников и путей циркуляции инфекции при внутрибольничном заражении; 2. Для идентификации микроба. Определение фаготипа стафилококка проводят при помощи фагов, разведенных до тест- разведения, обозначенного на этикетке. Каплю 4-х часовой бульонной культуры распределяют на поверхности подсушенного агара в чашке Петри. Дно чашки расчерчивают на 22 квадрата по числу фагов, затем капают фаги по одному в каждый квадрат. Посев инкубируют в термостате 18 часов при температуре 37оС. На 2-й день проводят учёт результатов; фаготип культуры соответствует тому фагу, который в тест-разведении вызывает её полный лизис. В зависимости от чувствительности культуры к фагу наблюдается разная степень лизиса: + + + + - сплошной лизис + + + - сливной лизис с вторичным ростом + + - более 50 негативных колоний (стерильных пятен) + - единичные негативные колонии (стерильные пятна) - лизиса нет Также проводится фаготипирование брюшнотифозных (44 типа) и паратифозных бактерий (15 типов), энтеропатогенных эшерихий (24 типа).
Реакция фаголизиса. Реакция фаголизиса ставится для идентификации возбудителя дизентерии. Постановка реакции: 1) чистая культура шигелл на скошенном агаре; 2) 2 пробирки с МПБ – «опыт» и «контроль»; 3) дизентерийный бактериофаг На I этапе: 1) Проверка культуры шигелл на чистоту (окраска по Граму); 2) Посев в 2 пробирки с МПБ 3) В пробирку «опыт» добавить 2 капли (0,1 мл) дизентерийного бактериофага; 4) Посевы инкубировать в термостате 18-20 часов при темпратуре 37оС На II этапе: 1) Регистрация результатов посева В пробирке «контроль» имеется равномерное помутнение МПБ, т.к. культура шигелл оказалась жизнеспособной. В пробирке «опыт» МПБ прозрачный, т.е. дизентерийный бактериофаг вызвал лизис одноименной культуры бактерий. Иммуноферментный анализ (ИФА) При ИФА в качестве метки применяют ферменты. Используется в диагностике СПИДа и вирусных гепатитов. Иммуноферментная система «Гепа Стрип» предназначена для выявления поверхностного HbsAg антигена вируса гепатита В. Компоненты: 1. Полистироловый планшет; 2. Антитела к HbsAg; 3. Конъюгат – мышиные моноклониальные антитела, меченые пероксидазой; 4. Контрольные сыворотки; 5. Фосфатно-солевой буфер; 6. Ортофенилдиамин (ОФД). Реакция протекает в две фазы. HbsAg связывается с гомологичными антителами, меченными пероксидазой. Затем ставят цветную реакцию с использованием ОФД, происходит желтое окрашивание. Учет ИФА – по оптической плотности с помощью фотометра, при этом степень оптической плотности будет обратно пропорциональна концентрации HbsAg антигена вируса гепатита В.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) Полимеразная цепная реакция имитирует естественную репликацию ДНК и позволяет обнаружить единственную молекулу ДНК в присутствии других молекул. Суть метода заключается в размножении в пробирке определенных участков ДНК в процессе повторяющихся температурных циклов. На каждом цикле вновь синтезированные молекулы копируются ДНК-полимеразой. Благодаря этому происходит многократное удвоение специфических фрагментов ДНК. Термостабильная ДНК-полимераза, полученная из термофильных бактерий, служит катализатором ПЦР. В ПЦР участвуют праймеры – две искусственно синтезированные молекулы ДНК, которые комплементарны последовательностям ДНК на левой и правой границах специфического фрагмента. Синтез протекает только между праймерами, и количество копий фрагмента удваивается. Этапы цикла амплификации: 1. Денатурация ДНК при t=95оС 1 мин. 2. Отжиг (присоединение) праймеров, t=50-65оС 1-2 мин. 3. Синтез фрагмента ДНК, t=72оС 1-3 мин. Продукты синтеза первого цикла амплификации служат матрицей для второго цикла, а продукты синтеза второго цикла – матрицей для третьего цикла амплификации. Цикл амплификации проводится в термо-циклере или амплификаторе. За 30 циклов амплификации образуется 10 копий специфического фрагмента. Достоинства ПЦР: 1) высокая чувствительность и специфичность; 2) быстрота; 3) возможность диагностики внутриклеточных паразитов и персистирующих микроорганизмов; 4) использование клинического материала, взятого от больного.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) Использование при диагностике гриппа Реакция относится к серологическим реакциям с участием меченых антигенов или антител. Проводится прямым и непрямым методами. При прямом методе обнаруживают антиген в материале от больного. Используется диагностическая флюоресцирующая сыворотка, которая содержит иммуноглобулины, выделенные из иммунных сывороток и меченные флюорохромами. Специфический антиген обнаруживается в виде ярко-зеленых люминесцирующих конгломератов, а фон препарата окрашивается в оранжево-красный цвет. Компоненты реакции прямой иммунофлюоресценции: Для поиска антигена при экспресс-диагностике: 1) исследуемый материал; 2) специфическая люминесцентная сыворотка; 3) люминесцентный микроскоп. При диагностике гриппа проводят дифференциацию от возбудителей парагриппа и аденовирусной инфекции. Носоглоточный мазок обрабатывают флюоресцирующей гриппозной сывороткой или гриппозным иммуноглобулином. «+» результат в виде зеленого свечения получают через 3 часа. При непрямом методе проводят обнаружение и титрование специфических антител. Титром сыворотки называется ее максимальное разведение, при котором отмечается флюоресценция на «+ +». Компоненты реакции непрямой иммунофлюоресценции Для поиска антигена при экспресс-диагностике: 1) исследуемый материал (антиген); 2) специфическая сыворотка; 3) антиглобулиновая люминесцентная сыворотка 4) люминесцентный микроскоп. I фаза специфическая Сывороточные антитела адсорбируются на антигене. II фаза неспецифическая Используется антиглобулиновая сыворотка с антителами, меченными флюорохромами. Образуется комплекс антиген+антитело (I) + антиглобулиновая сыворотка (II), который светится.
32. РПГА для определения напряженности противодифтерийного поствакцинального иммунитета Антитоксический противодифтерийный иммунитет проверяют с помощью РПГА с дифтерийным эритроцитарным диагностикумом (анатоксином). Неимунными считаются лица с титром антитоксина менее 0,03 МЕ/мг Ингредиенты: 1. Испытуемая сыворотка, адсорбированная бараньими эритроцитами; 2. Эритроцтарный диагностикум; 3. Физиологический раствор; 4. Противодифтерийная контрольная сыворотка активностью 10 МЕ. Постановка реакции: 1) Сыворотку разводят физиологическим раствором в 12 лунках от 1:10 до 1:20480 (1:40-1:5120) 2) В каждую лунку добавляют по 1 капле диагностикума; 3) Противодифтерийную контрольную сыворотку разводят также от 1:10 до 1:20480 и вносят по 1 капле диагностикума; 4) Оставляют на 3 часа при комнатной температуре. 10хА Расчет активности: Х=-----------, где В Х – активность испытуемой сыворотки; 10 – титр контрольной сыворотки; А – максимальное разведение испытуемой сыворотки с положительным результатом; В – максимальное разведение контрольной сыворотки с положительным результатом.
Реакция флокуляции Протекает in vitro (в пробирке) при эквивалентном соотношении антигена и антитела. Сопровождается помутнением и выпадением осадка. Феномен флокуляции используют: - для определения флоккулирующей активности токсинов; - для титрования антитоксических сывороток. Например, при дифтерии используется реакция флокуляции с дифтерийным анатоксином. В пробирке, где количество сыворотки и анатоксина эквивалентно, выпадают нежные хлопья. Количество анатоксина, дающее в смеси 1 АЕ сыворотки инициальную флокуляцию, называется 1 иммуногенной единицей анатоксина (1 ИЕ).
|
||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-08-15; просмотров: 1283; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.225.72.181 (0.007 с.) |