Определение способности микроорганизмов продуцировать

b -лактамазу

Тест на уреазу

Аминогликозидные антибиотики, являясь ин- гибиторами синтеза белка, угнетают образование уреазы Proteus mirabilis, используемого в качестве тест-организма. Питательную среду, содержащую мо- чевину, вносят в два ряда пробирок. В один ряд добав- ляют стандартный раствор испытуемого антибиотика в определенных концентрациях, в другой ряд — испы- туемый раствор. Пробирки засевают Р. mirabilis и че- рез 60-75 мин. инкубации измеряют pH с помощью по- тенциометра. Значения pH в пробирках, содержащих стандартный раствор, используют для построения стандартной кривой, которая служит для определения

Enterobacteriaceae

и Acinetobacter spp.

 

 

Pseudomonas spp.

и Acinetobacter spp.

Амикацин, ампициллин, цефазолин, цефалотоксин, цефотаксим, гентамицин, тобрамицин, триметоприм- сульфаметоксазол, норфлоксацин

Амикацин, цефтазидим, гентамицин, мезлоциллин, тобрамицин, триметоприм- сульфаметоксазол, норфлоксацин

количества антибиотика в испытуемом растворе.

Тест на люциферазу

Метод основан на способности аминогликозид- ных антибиотиков угнетать образование АТФ микроб- ными клетками. Люминесцентный метод определения АТФ в присутствии люциферазы отличается высокой

Staphylococcus spp.       Ампициллин, цефалотин, клиндамицин,

эритромицин, гентамицин, оксациллин, бензилпенициллин, ванкомицин, триметоприм-сульфаметоксазол, норфлоксацин

Enterococcus spp.          Бензилпенициллин, ампициллин,

ванкомицин, стрептомицин и гентамицин

(синергидность действия), норфлоксацин

Streptococcus spp.         Бензилпенициллин, цефалотин,

левомицетин, эритромицин, ванкомицин, норфлоксацин

Haemophilus spp.           Ампициллин, цефотаксим, цефуроксим,

левомицетин, триметоприм-сульфаметок-

                                    сазол                                                       

 

Определение способности микроорганизмов продуцировать

b -лактамазу

Устойчивость микроорганизмов к пенициллину может быть связана с их способностью продуцировать фермент β лактамазу, инактивирующий этот антибио- тик.

В чашку Петри вносят 0,5 мл суточной бульонной культуры стандартного штамма Staphyloccus aureus, чувствительного к пенициллину, и 20 мл расплавлен- ного и охлажденного до 45°C питательного агара. Бы- стро перемешивают и оставляют до застывания агара. После этого в центр чашки на поверхность среды по- мещают бумажный диск, содержащий пенициллин. По радиусам к диску петлей подсевают исследуемые культуры. Посевы инкубируют при 37°C 24 часа. О способности бактерий продуцировать β-лактамазу судят по наличию роста стандартного штамма стафи- лококка вокруг исследуемой культуры.

чувствительностью. Бактериальную культуру вносят

в пробирки, содержащие стандартный или испытуе- мый раствор антибиотика, инкубируют 90 мин., после чего определяют количество АТФ в специальном при- боре люминометре.

 

Хроматографические методы

Высокоэффективная жидкостная хроматогра- фия (ВЭЖХ) Испытуемый раствор пропускают через хроматографическую колонку, заполненную носите- лем, представляющим собой мелкодисперсный ги- дрофобизированный сорбент. Гидрофобное покрытие носителя варьируется в зависимости от молекулярной массы разделяемой смеси.

При нанесении микроколичества испытуемого раствора амфифильные вещества сорбируются на по- верхности частиц носителя и вытесняются с нее в гра- диенте апротонного растворителя (система вода — ацетонитрил). Вещества разделяются в соответствии со своим сродством к сорбенту (гидрофобностью).

Эффективность анализа определяется микронны- ми размерами частиц носителя, так что время анализа не превышает 5-10 мин.

Раствор на выходе из колонки анализируется в проточном УФ-детекторе с одновременной записью. Положение пика выходящего вещества является его калибровочной характеристикой. Количество веще- ства в нанесенной пробе определяется автоматиче- ским интегратором.

Преимуществами метода является высокая ско- рость определения, точность, специфичность и чув- ствительность.

Количественное определение тетрациклина ме- тодом ВЭЖХ

Готовят растворы испытуемого образца и стан- дартного препарата тетрациклина и хроматографи- руют их попеременно на жидкостном хроматографе с УФ-детектором, получая не менее 5 хроматограмм каждого раствора в строго определенном режиме тем- пературы и скорости подвижной фазы. Количество те- трациклина в пробе вычисляют по формуле:

X — количество тетрациклина в испытуемом об- разце, в граммах;

ботанного таким же образом, как испытуемый пре- парат.

Содержание ампициллина в препарате в процен- тах (X) рассчитывают по формуле:

D 0 — величина оптической плотности испытуемо- го раствора препарата;

D CT — величина оптической плотности раствора стандартного образца;

а — навеска стандартного образца ампициллина, в граммах;

b — содержание ампициллина в стандартном об-

S обр

— среднее значение площадей пиков тетраци-

разце, в процентах.

клина, вычисленное из хроматограмм раствора испы- туемого препарата;

S СТ — среднее значение площадей пиков тетраци- клина, вычисленное из хроматограмм стандартного образца;

А — содержание тетрациклина в стандартном об- разце, в граммах.