Выполните получение сыворотки, плазмы крови без следов гемолиза.

Выполните получение сыворотки, плазмы крови без следов гемолиза.

Для предотвращения гемолиза крови следует учитывать следующее:

•соразмерное сдавление вен при наложении жгута, время наложения жгута — не более 1-2 минуты;

•взятие крови из вен острыми иглами с коротким срезом, достаточно большого диаметра;

•перенесение крови из шприца в пробирку осуществляется сразу после взятия, не допуская вспенивания. При этом необходимо снять иглу со шприца;

•взятие крови осуществляется в химически чистые сухие пробирки без примесей детергентов, моющих средств, воды;

•исключить: сильное нагревание или переохлаждение, задержку транспортировки в лабораторию, длительное встряхивание при транспортировке либо перемешивание.

 

Пастроение калибровочного графика

Построение колибровачной кривой начинается с приготовления арифметического ряда разведений с последующей обработкай стандартных растворов аналогично опытным пробам.

И для каждой рабочей концентрации стандартного вещества нужно сделать 3-5 фотометрических определений. Усредненные (соответствующие отдельным концентрациям)значения оптической плотности(абсорбции,экстинции)наносят на милиметровую(калибровачную)бумагу.На оси обцисс(горизантальной)с соблюдением одинаковых интервалов в равномерно возрастающей концентрации откладывают показатели содержания вещества в стандартном растворе,на оси ординат(вертикальной)-соответствующие им величины абсобции.

Зависимость между двумя сопоставляемые величинами отражается линией,построенной уже по трем точкам замера. Однако строить калибровачный график следует не менее по 5 точкам.Калибровачная кривая прокладывается(тонко отточенным карандашом,желательно с помощью позрачной линейки,таким образом,чтобы по возможности большее числоточек(например 3и5)лежало на линии,а только распологалось близ нее,равномерно отклоняясь в ту и другую стороны.Отдельные точки,значительно смещающиеся от калибровачной кривой и обычно явл яющиемся результатом грубой ошибки в определении,исключается из учёта.Точки принято обозначать крестиками.

Расположение кривой определяют так, чтобы бы она исходила из нулевой метки под углом 45 градусов к осям кординат. Для этого значений концентраций и соответствующих

 

Выполните тимоловую пробу. Укажите нормы.

Принцип метод базируется на образовании глобулин-тимол-липидного комплекса, вызывающего появление мутности при взаимодействии сыворотки с тамоло-вероналовым буфером.

Ход определения,

К 6 мл тимолово-вероналового буфера + 0,1 мл негемолизированной сыворотки, содержимое пробирки перемешивают, оставляют стоять на 30 мин при комнатной температуре (18—25 °С) и затем фотометрируют при 670 нм (630—690 им) против контрольной пробы тимолово-вероналового буфера в кювете 10 мм.

Расчет: C_оп=А_оп * F

Фактор пересчета = 30.

Норма тимоловой пробы 0—4 ед. S-H

 

Выполните определение общего белка в сыворотке крови. Укажите нормы.

Принцип метода. Белки в щелочной среде образуют с ионами меди окрашенные в фиолетовый цвет комплексы (биуретовая реакция).

Анализ сыворотки крови. В пробирки помещают 0,02 мл сыворотки крови и 1,0 мл биуретового реактива, тщательно перемешивают, избегая образования пены. Через 30 мин. измеряют оптическую плотность на фотометре при длине волны 540-560 нм против холостой пробы. Холостую пробу ставят так же как опытную, но вместо сыворотки добавляют 0,05 мл физиологического раствора. Расчет: С_оп = А_оп * F. Фактор = 180.

Нормальные величины:

Взрослые и дети 65-85 г/л, дети до 3 лет - 54-87 г/л, новорожденные - 52-91 г/л

 

Выполните определение альбумина в сыворотке крови. укажите нормы.

Принцип метода. При взаимодействии альбумина с бромкрезоловым зеленым в слабокислой среде в присутствии детергента образуется окрашенный комплекс сине - зеленого цвета. Чем ярче сине-зелёный цвет тем больше концентрация.

Проведение анализа. В пробирки помещают 0,01 мл сыворотки крови и 1,0 мл рабочего реактива, тщательно перемешивают, избегая образования пены. Через 5-10 мин. измеряют оптическую плотность на фотометре при длине волны 670-690 нм против холостой пробы. Холостую пробу ставят так же как опытную, но вместо сыворотки добавляют 0,01 мл дистиллированной воды. Окраска стабильна в течение 8 ч.

Расчет: Con = A_on* F, где C_on — концентрация альбумина (г/л), F — усредненный фактор.

Нормальные величины: сыворотка 35 -50 г/л, новорожденные 28—44 г/л.

 

 

Выполните определение СРБ в сыворотке крови. укажите нормы.

Принцип метода. СРВ латекс реагент представляет собой суспензию латексных частиц, 1 на поверхности которых иммобилизированы антитела против С-реактивного белка человека. При смешивании данного реагента с сывороткой, содержащей СРБ в концентрации превышающей 6 мг/л, в результате специфической реакции между антителами к СРБ и С-реактивным белком, развивается агглютинация латексных частиц. Агглютинация определяется визуально, что свидетельствует о положительной реакции пробы. Для полуколичественного определения анализируется последовательные разведения сыворотки. Об уровне СРБ судят по последнему разведению (титр), при котором была выявлена визуально определяемая агглютинация.

1. Качественная реакция определения СРБ.

Внести в лунки тест-пластины по 20 мкл исследуемых образцов и реагентов, используя каждый раз одноразовые наконечники пипеток следующим образом: в лунки №№1-10 - исследуемые образцы сыворотки, в лунку (+) - реагент №2 (положительный контроль), в лунку (-) - реагент №3 (отрицательный контроль).

Рядом с первой каплей во всех лунках поместить по 20 мкл реагента №1 (латекс-суспензия). Смешать содержимое двух капель до гомогенного состояния. Плавно покачивать тест-пластину в течение 2 минут. Развитие процесса агглютинации необходимо наблюдать в промежутке со 2-ой по 3-ю минуту от момента начала покачивания тест-пластины. Сравнить степень агглютинации в лунках с реагентами №2, №3, со степенью агглютинации исследуемых проб

Расчет. Четко видимые агрегаты латексных частиц свидетельствуют о концентрации CPБ>6 мг/л, мелкие агрегаты - о концентрации близкой к 6 мг/л, равномерно гомогенная молочная суспензия указывает на концентрацию СРБ ниже 6 мг/л - результат отрицательный.

Норма: до 6 мг/л

Выполните определение мочевины в сыворотке крови и моче ферментативным методом. Укажите нормы.

Принцип метода. Уреаза гидролизует мочевину с образованием аммиака и углекислого газа. Выделившийся аммиак определяется фотометрически по окрашенному продукту химической реакции.

Методика анализа. Длина волны 590 нм, кювета с толщиной слоя 5 мм. Мочу перед анализом разводят дистиллированной водой в соотношении 1: 100 и результат умножают на коэффициент разведения (100). Опытная проба: 0,02мл проба биожидкости + 0,50 мл раствора 1. Калибровочная проба: 0,02 мл калибровачный раствор + 0,50 раствор1. Холостая проба: раствор1 0,50 мл.

Содержимое пробирок перемешивают и инкубируют 10 мин. при 37 °С. Затем последовательно добавляют раствор 2 и раствор 3 по 1 мл в каждую пробу и повторно инкубируют 5 мин. при 37 °С или 15 мин. при комнатной температуре.

Расчет: С_проб=А_проб*С_калибр/А_калибр

Фактор пересчета = 13.

Нормальные величины: мочевина в сыворотке крови – 2,61 – 8,35 ммоль/л; мочевина в суточном объеме мочи – 333,0 – 582,8 ммоль/л.

 

 

Билирубин

Принцип метода. В основу метода положена реакция взаимодействия диазотированной сульфаниловой кислоты со связанным билирубином сыворотки. По интенсивности окраски судят о концентрации прямого билирубина. При добавлении к сыворотке кофеинового реактива, несвязанный билирубин переходит в растворимое состояние, благодаря чему он также дает окраску раствора со смесью диазотиреактивов. По интенсивности этой окраски фотометрически определяют концентрацию общего билирубина. По разнице между общим и связанным находят содержание несвязанного билирубина.

Методика анализа. Перед работой смешивают 10 мл диазореактива 1 и диазореактива 2 и получают диазосмесь. В три пробирки (для определения общего, прямого и постановки контрольной пробы реакции на цвет сыворотки) вводят компоненты набора:

Общий билирубин: сыворотка 0,5 + кофеиновый реактив 1,75 + диазосмесь 0,25.

Связанный билирубин: сыворотка 0,5 + физраствор 1,75 + диазосмесь 0,25.

Контрольная проба: сыворотка 0,5 + кофеиновый раствор 1,75 + физраствор 0,25.

При определении общего билирубина пробу для развития окраски оставляют стоять 20 мин. при дальнейшем стоянии пробы окраска не изменяется. Для исследования связанного фотометрирование осуществляется спустя 5-10 мин после добавления диазосмеси, т.к. при длительном стоянии пробы в реакцию вступает свободный билирубин. Контрольную пробу на мутность сыворотки ставят для каждой опятной пробы. Измерение проводят при длине волны 500-560нм. Расчет – по калибровочному графику. Находят содержание общего и связанного билирубина в мкмоль/л, разница между ними составляет величину несвязанного.

Норма: Общий билирубин 8,55-20,52 мкмоль/л

Связанный 2,1-5,1 мкмоль/л

Несвязанный 6,45-15,42 мкмоль/л

Выполните расчет коэффициента атерогенности (КА).

В клиническую практику введено правило расчёта отношения всех липопротеинов к антиатерогенным. Отражением этого является КА (соотношение между ХС, входящим в состав всех липопротеинов, кроме ЛПВП). Отсюда и формула коэффициента по А. Н. Климову: КА = ОХС – ХС ЛПВП /ХС ЛПВП. где ОХС - это общий ХС, т.е. весь ХС, содержащийся в плазме крови, во всех липопротеинах, а ХС ЛПВП - это ХС, входящий в состав единственного антиатерогенного класса липопротеинов, т.е. "хороший ХС". А разница между общим ХС и "хорошим ХС" и есть весь "плохой ХС". Т.е. коэффициент атерогенности - это есть по сути отношение всего плохого ХС ко всему хорошему ХС. Значит: чем выше значения коэффициента, тем больше плохого ХС и меньше хорошего, и тем выше риск атероклероза. Этот показатель должен быть в пределах 3—3,5. В норме у здор мужчин в возрасте 40—60 лет без клинич признаков атеросклероза он колеблется от 3 до 3,5. У лиц с ИБС он обычно более 4. При КА 3-4 имеется умеренная вероятность развития атеросклероза, при величине более 4-х - высокая вероятность. У лиц с сильно выраженным атеросклерозом этот коэффициент может достигать 7 единиц и более. При высоких значениях КА часто требуется лечение холестерин понижающими препаратами, диета. Многое зависит и от других параметров.

 

Выполните получение сыворотки, плазмы крови без следов гемолиза.

Для предотвращения гемолиза крови следует учитывать следующее:

•соразмерное сдавление вен при наложении жгута, время наложения жгута — не более 1-2 минуты;

•взятие крови из вен острыми иглами с коротким срезом, достаточно большого диаметра;

•перенесение крови из шприца в пробирку осуществляется сразу после взятия, не допуская вспенивания. При этом необходимо снять иглу со шприца;

•взятие крови осуществляется в химически чистые сухие пробирки без примесей детергентов, моющих средств, воды;

•исключить: сильное нагревание или переохлаждение, задержку транспортировки в лабораторию, длительное встряхивание при транспортировке либо перемешивание.