Практическая значимость и реализация результатов исследования.

Полученные в данной работе результаты расширяют знания о путях и механизмах миграции тяжелых металлов, фитогормонов и микобиоты в трофической цепи питания медоносных пчел. Разработанный метод определения уровня содержания фитогормонов в лабораторных условиях может быть использован для оценки достоверности происхождения мёда, а также должен применяться при использовании синтетических фитогормонов в качестве стимуляторов развития пчелиных семей. Прослежены пути распространения спор гриба Ascosphaera apis от больной пчелиной семьи к здоровой семье, что важно при проведении ветеринарных мероприятий по профилактике аскосфероза. По результатам исследований разработаны методические рекомендации «Использование изоферментных генетических маркеров для оценки состояния бурзянской популяции среднерусской породы медоносной пчелы», «Твердофазный иммуноферментный анализ содержания фитогормонов в нектаре, пыльце и меде» (Утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН, протокол № 3/2 от 8 июня 2010 г.). Материалы диссертационной работы используются в ФГБОУ ВПО Башкирский ГАУ при проведении лекционных и лабораторно-практических занятий.

Апробация работы. Основные положения работы были представлены на на международная конференция «инновации в АПК»… Бгау, Российской агропромышленной выставке «Золотая осень – 2011» (диплом, золотая медаль входные данные; на научно-практической конференции в рамках экологического форума и специализированной выставки «Уралэкология. Промышленная безопасность – 2011» (Уфа, 2011); на Международной научной конференции аспирантов и молодых ученых «Развитие АПК в свете инновационных идей молодых ученых» (Санкт-Петербург, 2012); на первой Международной научно-практической заочной конференции «Современные проблемы и перспективы сохранения медоносных пчел и некоторые аспекты развития и внедрения школьного пчеловодства» (Уфа, 2013).

Связь работы с плановыми исследованиями и научными программами. Исследования проводились в рамках планов НИР кафедры разведения животных и пчеловодства ФГБОУ ВПО Башкирский ГАУ «Биотехнологические особенности комплексного использования башкирской породы медоносных пчел на фоне инфекционных и инвазионных заболеваний» гос.рег. №01201059478 и «Выявление в Республике Башкортостан природных зон с оптимальными условиями для производства высококачественных экологически чистых продуктов пчеловодства» № гос.рег.№ 0120.0404877.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 4 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК МОН РФ. Издана монография совместно с коллективом авторов «Методология фундаментальных исследований популяций Apis Mellifera L., 1758.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, включающего?? наименования, в том числе?? на иностранных языках. Работа изложена на?? страницах машинописного текста, содержит?? рисунков и?? таблиц.

Благодарности. Выражаю признательность д.б.н., профессору Фархутдинову Рашит Габдулхаевичу за большое внимание и постоянные консультации, оказанные при выполнении настоящей работы.

Выражаю благодарность за ценные консультации всем сотрудникам кафедры разведения животных и пчеловодства Башкирского ГАУ и лаборатории физиологии растений Института биологии УНЦ РАН. Мне хотелось бы выразить особую признательность за ценные советы д.б.н.. Кудояровой Г.Р. и д.х.н. Егуткину Н.Л. при разработке метода экстракции и определения фитогормонов в продуктах пчеловодства.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве объекта исследования использовали пчелиные семьи и отдельные особи медоносной пчелы (Apis millifera millifera L). Семьи содержали по технологиям, принятым в пчеловодстве, в типовых ульях.

Определение видового состава меда

Для приготовления препаратов из меда использовалась методика А. Маурицио и Ж. Луво (A.Mauricio et J. Louveax, 1965). 10 г меда заливали 20 мл холодной дистиллированной воды и ставили в водяную баню с температурой до +45 °С до полного растворения меда. Затем раствор центрифугировали в центрифуге ОЛМЦ в течение 15 мин со скоростью 2400 об/мин. После этого жидкость сливали, а осадок переносили на предметное стекло. После незначительного подсыхания капли пыльцу фиксировали 96%-ным спиртом, окрашенным фуксином.

Пыльник помещали на предметное стекло, нанося на него 2-3 капли 96%-ного спирта, после чего добавляли 2-3 капли дистиллированной воды и подогревали стекло до полного исчезновения влаги. Затем препаровальной иглой разрушили оболочку пыльника, а пыльцевые зерна фиксировали на 2-3 капли 96%-ным спирта, слабо окрашенного фуксином.

Пергу, извлеченную из 15 ячеек с разных участков сота, помещали в чашку Петри, заливали дистиллированной водой и выдерживали в течение 3 ч. до её полного размягчения. После размягчения пергу осторожно перемешали стеклянной палочкой. Через 20-30 мин. жидкость сливали, а из осадка делали мазок на обезжиренном предметном стекле.

Процентное соотношение видового состава пыльцы в препаратах из перги и меда определяли под микроскопом Миктрон, подсчитывая не менее 200 пыльцевых зерен и одновременно определяя их видовую принадлежность.Анализ проводился с выполнением требований ГОСТ Р 52940-2008 «Мед. Метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен».

Определение содержания ТМ.

Забор проб на ТМ (почва, растения, пчелы и мёд) производился на 3 кочевых пасеках, располагающихся на полях засеянных гречихой (Fagopyrum esculentum Moenh), примерно через 20 дней после прибытия их на медосбор. Автомагистраль М5 «Урал» Москва – Уфа – Челябинск (проба № 1 Благоварский район РБ) - дорога 1-й категории (интенсивность движения - 12700 ± 2500 автомобилей в сутки). Пасека располагалась примерно в 400 м от автомагистрали. Проба № 2 - пасека в 300 м от автотрассы 3-й категории Стерлитамак – Киргиз-Мияки в Стерлибашевском районе Республики Башкортостан (2200 ± 440 автомобилей в сутки). Контроль (проба 3) пасека в 8 км от автомагистрали Стерлибашево – Федоровка (4 категории, с интенсивностью движения 450 ± 60 автомобилей в сутки).

Отбор проб почвы для анализов проводился в соответствии с требованиями к отбору почв при общих и локальных загрязнениях, изложенными в МУ 2.1.7.730–99 «Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест» и в ГОСТ 17.4.3.01–83 (СТ СЭВ 3847–82) «Охрана природы. Почвы. Общие требования к отбору проб».

У растений гречихи для исследования содержания ТМ брали надземную и корневую часть. Корни промывали проточной водой. Растения сушились в затененном месте до постоянного веса.

От 5-10 пчелосемей отбирали примерно по 100 пчел от каждой, которых помещали в садки и потом замораживали при температуре – 18 °С.

Пробы мёда брали непосредственно из магазинных рамок. Мёд отбирали стеклянной палочкой или чайной ложкой из разных мест сота. В каждой пробе было не менее 100 г меда, который помещали в чистую стеклянную посуду.

Содержание ТМ (свинец, кадмий, железо, цинк, медь, ртуть) в пробах определяли при помощи атомно-адсорбционной спектрометрии на анализаторе ААС-30. Метод основан на минерализации образца в муфельной печи, переведении в солянокислый раствор с последующей атомизацией растворов золы в пламени ацетилен-воздух и определении элемента по величине адсорбции света, испускаемого селективными лампами с полым катодом. Чувствительность определения тяжелых металлов в растворах составляет 0,1%.

Расчет индекса аккумуляции (J_а или ИА), который определяется соотношением количества ТМ в следующих друг за другом звеньях изучаемой цепи (например, растение → почва), проводился по формуле J_а = с_р : с_п, где с_р – концентрация ТМ в растении, с_п – концентрация ТМ в почве (Башмаков, Лукаткин, 2002).

Определение коэффициента перехода вещества (КПВ) ТМ указывает на то, какова доля вещества, имеющегося в почве, достигает конечного продукта (мёда) изучаемой нами трофической цепи. Расчёт проводится путём определения процентной доли вещества почвы достигшей мёда: КПВ = (ТМ_мёда: ТМ_почвы) × 100 %.