Питательные среды для иерсинии»

Реферат

По микробиологии

«Питательные среды для иерсинии»

Студентки 1 курса Медицинского колледжа ВМедА

Кудрявцевой Надежды

Кишечный иерсиниоз.

Кишечный иерсиниоз – острая инфекционная болезнь, с фекально-оральным механизмом передачи инфекции. Поражает желудочно-кишечный тракт, печень, опорно-двигательный аппарат и другие органы. Встречается повсеместно. Возбудитель иерсиния энтероколитика относится к семейству Enterobacteriaceae, роду Yersinia и является грамоотрицательной палочкой или коккобактерией с непостоянным числом жгутиков, не образующей спор и непритязательным к питательным средам и хорошо растущей при низких температурах. Подвижная при температуре 4—28°С, она теряет свою подвижность уже при температуре 30°С.

Возбудитель иерсиниоза проявляет высокую чувствительность к действию физиических и химических факторов, но хорошо переносит низкие температуры и сохраняет способность к размножению. Проявляется чувствительность к стрептомицину, эритромицину,гентамицину, левомицетину и фуразолидону. Устойчивы к новобиомицину, метициклину. Характерной особенностью иерсиний является устойчивость к антибиотикам группы пенициллина.

Иерсинии весьма неприхотливы к питательным веществам и поэтому растут не только на обычных питательных средах , но и на средах с обедненным составом. Растут в кипяченой, водопроводной и стерильной дистиллированной воде. Хранение продуктов в холодильнике не является гарантией безопасности от инфекции, так как иерсинии могут, хотя и гораздо медленнее, размножаться при температуре 4-10°С.

Иерсинии устойчивы к воздействию окружающей среды и способны сохраняться в ней долгое время. Так, в почве они могут существовать до 4-х месяцев и более, в воде открытых водоемов – до 1 месяца, в кипяченой воде - до 1 года. В испражнениях при комнатной температуре выживают до 7 суток, в замороженных фекалиях - до 3-х месяцев.

Достаточно долго иерсинии выживают на различных продуктах питания и даже могут на них размножаться , например на овощах ( морковь, капуста, зеленый и репчатый лук), особенно приготовленных в виде салатов. В молоке иерсинии сохраняются до 18 суток, на хлебе, кондитерских изделиях - от 16 до 24 суток. Иерсинии чувствительны к высокой температуре: при 100 °С погибают в течение нескольких секунд, однако при температуре 50-60°C способны выживать до 20-30 минут, переносят большие (до 10 %) концентрации раствора натрия хлорида, особенно при низких температурах. На эти микробы губительно действует прямая солнечная радиация, чувствительны иерсинии и к высыханию. Во влажной среде и невысокой температуре (14-18° С) выживают длительно. Кислотность среды (при уровнях рН, равном 3,6-4,0) также губительна для иерсиний . В дезинфицирующих растворах в стандартных разведениях микробы Yersinia погибают в течение 5-10 минут. Раствор перманганата калия (марганцовки) в концентрации 0,5-0,3 % вызывает гибель бактерий через 3 минуты. Yersinia чувствительны к перекиси водорода и дезинфектантам, в состав которых она входит.

Инфекция распространена как среди диких грызунов ( полевки, мыши, землеройки-бурозубки, песчанки, суслики), заселяющих окраины населенных пунктов, так и среди городских грызунов (серые и черные крысы), домовых мышей. Возбудители, локализуясь в желудочно-кишечном тракте, выделяются из организма главным образом с фекалиями, что обуславливает обсеменение почвы, мелких непроточных водоемов, кормов и пищевых продуктов, обеспечивая дальнейшее заражение домашних и сельскохозяйственных животных. Заразиться можно и от больных домашних животных (свиньи в первую очередь, коровы, овцы, козы).

Больной кишечным иерсиниозом или носитель при определенных условиях может явиться источником инфекции для окружающих.

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО УЧЕТА ИЕРСИНИЙ И ЛИСТЕРИЙ В ОБЪЕКТАХ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ

Изобретение предназначено для биологического контроля за инфицированностью почв и овощей. Среда содержит питательную основу, минеральные соли и агар. В качестве питательной основы среда содержит продукты растительного происхождения - отвары отрубей ржаных, капусты и моркови. В качестве минеральных солей - соли фосфатного буфера с pH 7,4. Изобретение позволит более полно выявить листерий и иерсиний из объектов внешней среды. 1 табл.

Изобретение относится к микробиологии, а именно к биологическому контролю за инфицированностью почв и овощей.

Известно, что листерии и иерсинии относятся к возбудителям сапрозоонозов и способны обитать как в объекте окружающей среды, так и в теплокровном организме человека и животных. Для индикации возбудителей из материала от теплокровных животных и человека традиционно используются среды на основе мясных и рыбных гидролизатов. Для выделения иерсиний и листерий из объектов окружающей среды, т.е. внеорганизменной популяции бактерий, предпочтительно применять предлагаемые среды на основе растительного сырья, особенно овощей, т.к. известно, что именно овощи являются одним из основных факторов передачи этих возбудителей.

Известна питательная среда, которая является основой для культивирования иерсиний и листерий - среда Хоттингера (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под редакцией Биргера М.О., Москва, 1967, с. 53-54). Среду готовят из мяса, которое варят, затем к нему добавляют либо свежую перемолотую поджелудочную железу, либо сухой панкреатин, перемешивают, доводят до pH 7,8 - 8,0. Добавляют хлороформ и оставляют смесь для переваривания на 7-16 дней.

Недостатками этой среды являются: - использование дорогостоящих пищевых продуктов;

- трудоемкость и длительность изготовления питательной среды;

- неполное выявление и учет внеорганизменных популяций из объектов окружающей среды, в частности смывов с овощей.

Наиболее близким к заявляемому техническому решению является питательная среда СО (Актуальные вопросы разработки препаратов медицинской биотехнологии. Тех. конф. 4.1. Махачкала, 1988, с. 108-109), применяемая для культивирования иерсиний, в частности Y. pestis. Питательная среда содержит автолизат селезенки, гидролизат белка пшеничных отрубей, натрий хлористый, натрий сернокислый, агар японский пластинчатый или корсаковский, воду дистиллированную.

Недостатком этой среды является неадаптированность к росту внеорганизменных популяций бактерий из смывов с овощей, хотя в качестве питательной основы здесь используют продукт растительного происхождения - отруби пшеничные, однако их применяют в виде гидролизата и в сочетании с продуктами животного происхождения - автолизата селезенки. В результате этого среда является трудоемкой, дорогостоящей и не приспособленной для роста внеорганизменных популяций бактерий, так как длительно существующие в окружающей среде патогенные бактерии могут подвергаться изменчивости, плохо формировать колонии на средах, содержащих продукты животного происхождения.

Задача, решаемая изобретением, - получение эффективной питательной среды для более полного выявления внеорганизменных популяций бактерий, в частности листерий и иерсиний, обсеменяющих овощи, за счет применения продуктов растительного происхождения, а также расширение сырьевой базы и удешевление среды.

Достигается это тем, что в качестве питательной основы используют продукты растительного происхождения - отвары отрубей ржаных, капусты и моркови, в качестве минеральных веществ - соли фосфатного буфера.

Компоненты среды взяты в следующем соотношения с содержанием сухих веществ, г/л:

отвар отрубей ржаных - 0,065 - 0,26

отвар моркови - 0,08 - 0,32

отвар капусты - 0,14 - 0,42

агар микробиологический - 10 - 15

буфер фосфатный рН 7,4 - до 1 л

Существенными признаками предложения следует считать качественный и количественный состав питательных сред, позволяющий получить среду для более полного выявления внеорганизменных популяций бактерий листерий и иерсиний. Выход за пределы заявленных значений компонентов приводит либо к перерасходу продукции, либо к снижению ростовых свойств среды.

Применение отваров отрубей ржаных, капусты и моркови обеспечивает питательной среде органическое, минеральное питание, определенный набор витаминов. Кроме того, морковь обладает антиоксидантными свойствами в отношении вредных метаболитов культивируемых бактерий.

Применение фосфатного буфера в данном количестве и составе позволяет получить бактериям необходимое минеральное питание, особенно фосфор, а также буфер фосфатный стабилизирует растительную среду, поддерживая значение pH постоянным 7,4.

Применение агара микробиологического обеспечивает плотную основу для формирования колоний.

Для приготовления 1 л питательной среды сначала готовят маточные отвары из отрубей ржаных, капусты и моркови. Для этого берут по 30 г моркови и капусты, измельчают. В отдельных емкостях по 30 г отрубей ржаных, моркови и капусты заливают 100 г кипяченой воды, кипятят в течение 3-5 мин, отвары фильтруют, стерилизуют текучим паром дважды при 100^oC по 30 мин. Отвары можно готовить впрок, хранить в холодильнике, использовать по мере необходимости. Готовят буфер фосфатный на основе стерильной воды pH 7,4. Для приготовления фосфатного буфера берут натрий фосфорнокислый двузамещенный - 8,7 г/л, калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,7 г/л, до 1 л - дистиллированная вода, устанавливают pH 7,4, стерилизуют 0,5 атм 30 мин.

Для приготовления 1 л питательной среды берут: 5-20 мл отвара отрубей ржаных, что соответствует 0,065 - 0,26 г сухого вещества, 5-20 мл отвара моркови, что соответствует 0,08 - 0,32 г сухого вещества, 10-30 мл отвара капусты, что соответствует 0,14 - 0,42 г сухого вещества:

- 5-20 мл отвара отрубей ржаных;

- 10-30 мл отвара капусты;

- 5-20 мл отвара моркови;

- 10-15 г агара микробиологического;

- до 1 л буфер фосфатный pH 7,4.

Пример 1.

Питательная среда для культивирования внеорганизменных популяций сапрозоонозов, в частности листерий и иерсиний из внешней среды, в частности, смывов с овощей, включает в себя следующие компоненты с содержанием сухих веществ, г/л:

отвар отрубей ржаных - 0,13

отвар моркови - 0,16

отвар капусты - 0,28

агар микробиологический - 10

буфер фосфатный pH 7,4 - до 1 л

Питательную среду готовят следующим образом. Стерильные отвары овощей берут в следующих соотношениях: 10 мл отвара отрубей ржаных, что соответствует 0,13 г сухого вещества, 10 мл отвара моркови, что соответствует 0,16 г сухого вещества, 20 мл отвара капусты, что соответствует 0,28 г сухого вещества, смешивают, добавляют 10 г агара микробиологического и доводят стерильным буфером фосфатным до 1 л (установл. pH 7,4). На приготовленную среду высевают листерии и иерсинии в физиологическом р-ре в количестве 10² КОЕ/мл.

Полученная питательная среда слегка опалесцирует, желтоватого цвета, не имеет запаха, pH среды 7,4.

За сутки культивирования количество колоний листерий составило 390 49, иерсиний - 480 64.

Пример 2.

Питательная среда для культивирования внеорганизменных популяций сапрозоонозов, в частности листерий и иерсиний, включает в себя следующие компоненты с содержанием сухих веществ, г/л:

отвар отрубей ржаных - 0,26

отвар моркови - 0,42

отвар капусты - 0,32

агар микробиологический - 15

буфер фосфатный pH 7,4 - до 1 л

Питательную среду готовят следующим образом. Стерильные отвары овощей берут в следующих соотношениях: 20 мл отвара отрубей, что соответствует 0,26 г сухого вещества, 30 мл отвара капусты, что соответствует 0,42 г сухого вещества, 20 мл отвара моркови, что соответствует 0,32 г сухого вещества, смешивают, добавляют 15 г агара и остальное фосфатный буфер до 1 л, устанавливают pH 7,4.

Полученная питательная среда слегка опалесцирует, желтоватого цвета, не имеет запаха, pH среды 7,4. За сутки культивирования количество листерий составляет 39 9, иерсиний - 56 10.

Пример 3.

Питательная среда для культивирования возбудителей сапрозоонозов, в частности листерий и иерсиний, включает в себя следующие компоненты с содержанием сухих веществ, г/л:

отвар отрубей ржаных - 0,065

отвар моркови - 0,08

отвар капусты - 0,14

агар микробиологический - 10

буфер фосфатный pH 7,4 - до 1 л

Питательную среду готовили следующим образом.

Стерильные отвары овощей берут в следующих соотношения - 5 мл отвара отрубей, что соответствует 0,065 г сухого вещества, 5 мл отвара моркови, что соответствует 0,08 г сухого вещества, 10 мл отвара капусты, что соответствует 0,14 г сухого вещества. Смешивают, добавляют 10 г агара и остальное - фосфатный буфер до 1 л, устанавливают pH 7,4.

Полученная питательная среда слегка опалесцирует, желтоватого цвета, не имеет запаха, pH среды 7,4. За сутки культивирования количество листерий составило 300 29, иерсиний - 245 38.

Данные по всем примерам представлены в таблице. В контроле питательной средой для культивирования листерий и иерсиний, в частности, служили среды Хоттингера и СО.

Приведенные примеры показывают преимущества предлагаемой среды перед известной, выраженные в возможности использования недорогих растительных продуктов в качестве питательной основы, при этом ростовые свойства среды в отношении листерий и иерсиний не уступают контрольным средам, а технология приготовления значительно проще. Это позволяет расширить сырьевую базу и удешевить получаемую питательную среду.

Кроме того, как видно из таблицы, предлагаемые пределы содержания являются оптимальными и обуславливают относительную сбалансированность среды по питательному составу, что способствует наиболее полному выявлению и более точному учету иерсиний и листерий из объектов внешней среды, в частности смывов с овощей.

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования и количественного учета листерий и иерсиний в объектах внешней среды, содержащая питательную основу - продукт растительного происхождения, минеральные соли, агар, воду, отличающаяся тем, что в качестве продукта растительного происхождения используют отвары отрубей ржаных, капусты и моркови, в качестве источника минеральных солей - фосфатный буфер с рН = 7,4 при следующем соотношении компонентов с содержанием сухих веществ, г/л:

Отвар отрубей ржаных - 0,065 - 0,26

Отвар моркови - 0,08 - 0,32

Отвар капусты - 0,14 - 0,42

Агар микробиологический - 10 - 15

Буфер фосфатный рН 7,4 - До 1 л

Механизм передачи иерсиниозов реализуется:
- пищевым прямым (с сырыми овощами) или опосредованным (через оборудование, инвентарь или посуду) попаданием возбудителя в готовую пищую. Преобладают вспышки овощного происхождения при салатов, в состав которых входят термически не обработанные растительные продукты, особенно репчатый лук, капуста, морковь.
- накоплением возбудителя в готовых блюдах при нарушении технологии их приготовления и увеличении сроков хранения;
- контактно-бытовым при контакте с домашними животными (кошки, собаки), а также животными, содержащимися в неволе (например, животные зоопарков).

Иерсиниозом чаще болеют дети от 3 до 5 лет, реже — раннего и более старшего возраста. Что касается детских коллективов, то вспышки заболевания здесь чаще обусловлены единым источником питания. Иерсиниоз не отличается сезонностью, повышение заблеваемости отмечается с октября по май.

Механизм развития. Заражение происходит при употреблении инфицированной пищи и воды или контактным путем. Минуя желудок возбудитель локализуется в тонкой кишке, чаще — в месте перехода тонкой кишки в слепую, где и развивается воспалительный процесс, носящий катаральный или язвенно-некротический характер.

Микробы, обладая энтеротоксигенными

Длительно персистируя в лимфатических узлах, микробы могут вызывать повторные заболевания или переход иерсиниоза в хроническую форму.

Для иерсиниоза характерно увеличение печени, селезенки, расширение желчного пузыря. В кишечнике выявляются выраженный отек и инфильтрация с фибриноидными наложениями и кровоизлияниями, возможны некрозы лимфатических узлов, прорыв брыжейки и развитие перитонита. При гистологическом исследовании в печени и селезенке обнаруживаются некротические узелки с наклонностью к центральному некрозу и гнойному расплавлению. Периваскулярные инфильтраты содержат моноциты, лимфоциты, гигантские клетки типа Пирогова—Лангханса, полиморфно-ядерные лейкоциты. В лимфатических узлах выявляется пролиферация макрофагов.

Вследствие грубых изменений сосудов возникают кровоизлияния и некрозы во внутренних органах, которые являются следствием аллергической реакции на циркулирующие антигены и способны привести к склерозу стенки с сужением и деформацией просвета.

Клиническая картина иерсиниоза. Инкубационный период при иерсиниозе составляет от 3 до 20 дней, чаще — 7—10 дней. Иерсиниоз отличается полиморфизмом клинической картины. В большинстве случаев заболевание начинается остро, реже — постепенно. В первые дни (3—10-й день болезни) у больного выявляются симптомы:

1) поражения желудочно-кишечного тракта, он жалуется на боли в животе, которые обычно носят разлитой характер, урчание, особенно при пальпации, живот при этом бывает вздут. Развивается диарея — ведущий симптом иерсиниоза (стул кашицеобразный, с небольшим количеством слизи, с частотой 3—6 раз в сутки). Вследствие поражения желудочно-кишечного тракта у больного отмечается потеря аппетита, нередко дети отказываются от еды совсем, их тошнит, бывает и рвота, чаще однократная, в тяжелых случаях - многократная. Язык больного обложен налетом бело-желтого цвета, в первые дни особенно отмечается сухость слизистой оболочки ротовой полости;

2) головной боли, лихорадки. Высота и длительность температуры зависят от тяжести и характера течения болезни, но обычно она снижается на второй неделе болезни:

3) экзантемы — мелкоточечной сыпи, обычно располагающейся в подмышечных впадинах, на груди, у детей раннего возраста — папуло-пятнистой, кореподобной сыпи, располагающейся вокруг плечевых, локтевых и коленных суставов;

4) увеличения размеров печени к концу первой недели, в некоторых случаях печень болезненна при пальпации.

В некоторых случаях отмечается увеличение селезёнки, при этом она безболезненна при пальпации. Лимфатические узлы увеличиваются у большинства детей. Отмечаются изменения шейных лимфатических узлов с явлениями лимфаденита, воспаление паховых лимфоузлов. В большей части случаев увеличение лимфоузлов незначительное, они безболезненны при пальпации.

В четверти случаев заболевания иерсиниозом у детей, особенно у ослабленных с тяжелой рецидивирующей инфекцией отмечено возникновение артралгии и артритов. При этом поражаются межфаланговые, лучезапястные, локтевые, коленные и голеностопные суставы, нарушаются их подвижность и функции, сопровождаясь болями. Воспалительный процессв суставах обычно длится около 2 недель.

В большинстве случаев болезнь сопровождается рядом симптомов респираторного заболевания: слабой гиперемией дужек мягкого нёба, зернистостью задней стенки глотки; у больного появляется редкий, сухой кашель, насморк не выражен.

В остром периоде болезни со стороны сердечно-сосудистой системы у больного выявляются тахикардия, гипотония, глухость сердечных тонов.

Что касается мочеполовой системы, то при данном заболевании значительные ее поражения не выявляются, но в разгар тяжелых форм болезни отмечаются быстропроходящаяальбиминурия, лейкоцитурия.

Лабораторные исследования красной крови у детей изменений в значительной степени не выявляют: отмечаются лейкоцитоз, нейтрофильный палочкоядерный сдвиг, эозинофилия, ускоренная СОЭ.

Особенности течения иерсиниоза у детей раннего возраста.
У детей до трехлетнего возраста чаще отмечаются желудочно-кишечная и генерализованная формы иерсиниоза. При этом, у них температура тела поднимается до высоких цифр, лихорадка сохраняется более длительное время, симптомы интоксикации более выражены. Больной адинамичен, периодически у него возникает чувство беспокойства, возможны судороги потеря сознания, гемодинамические расстройства. Рвота носит более частый и продолжительный характер, диарея протекает по типу гастроэнтерита, гастроэнтероколита. У детей первого года жизни выявляются симптомы обезвоживания. У них уже с первых дней болезни выявляется увеличение лимфитических узлов, селезенки, респираторный синдром.

Лечение иерсиниоза. Лечение детей с легкой формой иерсиниоза проводится на дому, больных с тяжелыми формами госпитализируют. При желудочно-кишечной, абдоминальной и печеночной формах иерсиниоза назначается соответствующая диета.

Медикаментозная терапия включает назначение фуразолидона. При неэффективности лечения назначают ампициллин, амоксициллин, гентамицин парентерально в возрастных дозах в течение 7—10 дней.

При лечении среднетяжелых и тяжелых форм иерсиниоза одновременно с антибактериальной терапией проводят симптоматическое лечение, включающее проведение дезинтоксикационных и регидратационных мероприятий, назначение антигистаминных средств, витаминов.

При артритах и узловатой эритеме процесс купируют антиревматическими препаратами и кортикостероидными гормонами.

Проявления инфекционного процесса при иерсиниозах характеризуются полиморфностью клинической картины, поэтому их необходимо дифференцировать с широким кругом инфекционных, паразитарных и неинфекционных заболеваний: скарлатиной, корью, краснухой, энтеровирусной инфекцией, лептоспирозом, вирусными гепатитами, трихинеллезом, брюшным тифом, острыми кишечными инфекциями различной этиологии (сальмонеллезом, кампилобактериозом, шигеллезом и т.д.), инфекционным мононуклеозом, бруцеллезом, туляремией, сепсисом, ревматизмом, геморрагическими лихорадками, острым аппендицитом, острыми респираторно-вирусными инфекциями, сепсисом и т.д. Иногда иерсиниозы приходится дифференцировать с менингококковой инфекцией, гриппом, сыпным тифом, ревматизмом, геморрагическим васкулитом.

Профилактика иерсиниоза:

- Тщательно обрабатывайте овощи, предназначенные для приготовления салатов;
- Не храните очищенные овощи в воде, особенно в холодильниках;
- Тщательно мойте фрукты, в т.ч. и цитрусовые;
- Строго соблюдайте правила хранения продуктов в холодильнике.

Дети, посещающие дошкольные организации, детские дома, школы, школы-интернаты, переболевшие кишечным иерсиниозом, подлежат клиническому наблюдению с контролем температуры тела в течение 3-х недель.

Литература
1. Детские инфекционные болезни. Полный справочник. Порд ред. Елисеева Ю.Ю. Москва 2008- 704с

Познавательные статьи:



Где возникла философия и почему?

Относительная высота сжатой зоны бетона

Сущность проекции Гаусса-Крюгера и использование ее в геодезии

Тарифы на перевозку пассажиров