Количественное определение белка в моче по методу

Количественное определение белка в моче по методу

Робертса-Стольникова-Брандберга.

Принцип метода: в основе метода лежит проба Геллера – денатурация

белка азотной кислотой. Экспериментально установлено, что при наслаивании

на азотную кислоту раствор, содержащий 0,0033 % белка, дает белое колечко в

промежутке между второй и третьей минутами после наслаивания. Если

колечко появляется непосредственно после наслаивания раствора, содержащего

белок, на азотную кислоту, то путем последовательного разведения

исследуемого материала достигают такого максимального разведения, при

котором появляется кольцо между второй и третьей минутами. Умножая

разведение на 0,0033 %, получают процентное содержание белка в моче.

Оборудование: штатив с пробирками, пипетки на 1 или 2 мл.

Исследуемый материал: моча.

Реактивы:

1. Азотная кислота, концентрированная.

Ход работы: приготовить 2 ряда пробирок (по 8 в каждом). Во все

пробирки первого ряда прилить по 1 мл концентрированной азотной кислоты.

В пробирках второго ряда развести исследуемую мочу методом кратных

разведений. Для этого в первую и во вторую пробирку второго ряда налить по

1 мл исследуемой мочи, во вторую и все последующие - по 1 мл

дистиллированной воды.

После перемешивания из второй пробирки перенести 1мл жидкости в

третью, затем после перемешивания такой же объем из третей пробирки

перенести в четвертую и т.д. до конца ряда. Из последней пробирки 1мл

жидкости вылить. Таким образом, получается следующий ряд разведений

исследуемой мочи: в первой пробирке моча исходной концентрации, во 2-ой –

разведена в 2 раза, в 3-ей – в 4 раза, в 4-ой – в 8 раз, в 5-ой - в 16, в 6-ой - в 32, в

7-ой – в 64, в 8-ой – в 128.

После разведения мочи произвести поочередное наслаивание

содержимого каждой пробирки на концентрированную азотную кислоту. По

секундомеру отметить, в какой пробирке белое кольцо образовалось между

2-ой - 3-ей минутами после начала опыта.

Расчет. Между 2-ой и 3-ей минутами белое кольцо образовалось в 5-ой

пробирке, где разведение мочи 1:16.

Следовательно, концентрация белка в исходной порции мочи равна:

0.0033 % × 16 = 0,05 %

Клинико-диагностическое значение. Моча здоровых людей содержит

небольшое количество белка (20-30 мг в суточном количестве мочи), не выявляемые обычными методами исследования. Физиологическая

протеинурия встречается при беременности, после физических нагрузок.

При ряде заболеваний количество белка в моче увеличивается

(протеинурия), поэтому его определение имеет большое клиническое значение.

Протеинурия наблюдается при заболеваниях почек, сопровождающихся

структурно-функциональными нарушениями гломерулярных мембран

(нефриты, нефрозы, преэклампсии, системные заболевания соединительной

ткани, нефротическом синдроме, диабетической и гипертензивной

нефропатии).