Контроль качества дезинфекции спецодежды

5.1. Качество дезинфекции спецодежды, мешкотары и прочих изделий из тканевых материалов, подвергаемых обеззараживанию в камерах, методом замачивания в дезинфицирующем растворе, кипячением или по режимам одновременной стирки и дезинфекции, контролируют по выделению тест-культур микроорганизмов из тест-объектов, закладываемых в подлежащий обеззараживанию материал.

5.2. При контроле качества дезинфекции в очагах бактериальных (кроме туберкулеза) и вирусных инфекций в качестве тест-культуры используют музейные штаммы кишечной палочки, в очагах туберкулеза и малоизученных вирусных инфекций - золотистого стафилококка, в очагах споровых инфекций - Bac. cereus.

5.3. В качестве тест-объектов используют кусочки батистовой ткани, импрегнированные соответствующей тест-культурой (п. 7 Приложения 3).

5.4. Тест-объекты (по 2 шт.) закладывают в стерильные мешочки размером 5 х 8 см, изготовленные в виде конверта из той же ткани, что и подлежащие обеззараживанию изделия. Мешочки с вложенными в них тест-объектами помещают в карман спецодежды или пришивают нитками к подлежащим обеззараживанию изделиям.

При дезинфекции (методом замачивания в дезинфицирующих растворах или кипячением) изделия с заложенными в них тест-объектами размещают послойно в низу, в середине и в верхней части емкости, а при обеззараживании в камере - в разных местах ее.

5.5. По истечении экспозиции дезинфекции или цикла стирка - отполаскивание - отжим при использовании метода одновременного обеззараживания и стирки мешочки с тест-объектами помещают в стерильные чашки Петри и доставляют в лабораторию для исследования.

В лаборатории после извлечения из мешочка каждый тест-объект промывают 5 мин. в растворе соответствующего нейтрализатора (п. 2.4 Приложения 3) и стерильной водопроводной воде (или дважды в воде, если нейтрализатор неизвестен) и помещают в пробирку с соответствующей питательной средой. Если дезинфекцию проводили методом кипячения без добавления кальцинированной соды, дополнительного промывания тест-объектов не требуется.

5.6. При контроле качества дезинфекции по выделению кишечной палочки посев проводят в модифицированную среду Хейфеца или КОДА, для выделения стафилококка - в солевой МПБ, для выделения Bac. cereus - в МПБ (пп. 3.1.2 - 3.1.4 Приложения 3).

5.7. Качество дезинфекции признают удовлетворительным при отсутствии роста тест-культуры во всех пробах.

6. Методы определения содержания действующего вещества в дезинфицирующих средствах и их растворах

6.1. Определение массовой доли натра едкого в препарате и его растворах.

6.1.1. Аппаратура, реактивы и растворы.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-88 с наибольшим пределом взвешивания 500 г, третьего класса точности.

Колба (ГОСТ 1770-74) исполнения 1 или 3 вместимостью 500 куб. см.

Пипетки (ГОСТ 29169-91) вместимостью 20 и 25 куб. см.

Бюретка (ГОСТ 20292-74) вместимостью 50 куб. см, ценой деления 0,1 куб. см.

Кислота соляная (ГОСТ 3118-77), химически чистая (х.ч.) или чистая для анализа (ч.д.а.), раствор концентрации 1 моль/куб. дм.

Барий хлористый (ГОСТ 4108-72), х.ч. или ч.д.а., 10%-ный раствор, предварительно нейтрализованный по фенолфталеину.

Фенолфталеин (ГФХ, стр. 830), 1%-ный спиртовый раствор.

Вода дистиллированная, не содержащая CO (ГОСТ 6709-72).

6.1.2. Подготовка к анализу.

6.1.2.1. Приготовление анализируемого раствора твердого препарата.

Перед взятием навески с пробы препарата удаляют верхний выветрившийся слой. В стаканчик для взвешивания быстро отбирают около 20 г препарата и взвешивают. Навеску переносят в мерную колбу, приливают 300 - 400 куб. см воды, растворяют, охлаждают, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор А).

6.1.2.2. Приготовление анализируемого раствора жидкого препарата.

25 куб. см препарата отбирают в предварительно взвешенный стакан вместимостью 100 куб. см, взвешивают, количественно переносят в мерную колбу, разбавляют водой до метки и перемешивают (раствор Б).

Растворы А и Б готовят из двух параллельных навесок.

6.1.3. Проведение анализа.

25 куб. см раствора А и Б помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 20 куб. см раствора хлористого бария, перемешивают и закрывают пробкой. Через 5 мин. вводят две-три капли раствора фенолфталеина и титруют раствором соляной кислоты до обесцвечивания индикатора.

6.1.4. Обработка результатов.

Массовую долю натра едкого (Х) в процентах вычисляют по формуле:

 

V х 0,04 х 500 х 100

Х = --------------------,

25m

 

где:

V - объем раствора соляной кислоты, израсходованный на титрование, куб. см;

m - масса навески, взятой для приготовления растворов А и Б, г;

0,04 - масса натра едкого, соответствующая 1 куб. см раствора соляной кислоты, г.

За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не превышают 0,2%.

6.2. Определение содержания формальдегида в формалине техническом, параформе и их растворах.

6.2.1. Реактивы и растворы.

Кислота соляная (ГОСТ 3118-77), ч.д.а., или кислота серная (ГОСТ 4204-77), ч.д.а., растворы концентрации 1 и 0,1 моль/куб. дм.

Натрия гидроокись (ГОСТ 4328-77), ч.д.а., раствор концентрации 0,1 моль/куб. дм.

Натрий сернокислый - сульфит натрия (ГОСТ 195-77 или ГОСТ 429-76), ч.д.а., раствор безводного сульфита натрия 126 г или кристаллического 252 г растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 куб. дм с последующим тщательным перемешиванием.

Тимолфталеин, ГФХ, стр. 828, 0,2%-ный раствор.

Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).

6.2.2. Проведение анализа.

1,5 - 1,8 г формалина или 0,5 - 0,6 г параформа взвешивают в колбе с пробкой, содержащей 10 куб. см дистиллированной воды, результат взвешивания записывают до четвертого десятичного знака. При определении содержания формальдегида в рабочих растворах для исследования берут 5 - 25 куб. см формалина или параформа в зависимости от предполагаемой их концентрации. К полученному раствору прибавляют две капли тимолфталеина и нейтрализуют раствором соляной или серной кислоты концентрации 0,1 моль/куб. дм до исчезновения голубой окраски или раствором гидроокиси натрия до появления бледно-голубой окраски.

Нейтральный раствор сульфита натрия переливают в колбу с навеской, перемешивают в течение 2 мин. и титруют раствором соляной или серной кислоты концентрации 1 моль/куб. дм до исчезновения голубой окраски.

6.2.3. Обработка результатов.

Массовую долю формальдегида (Х) в процентах вычисляют по формуле:

 

V х 0,03003 х 100

Х = -----------------,

m

 

где:

V - объем раствора соляной или серной кислоты концентрации точно 1 моль/куб. дм, израсходованный на титрование, куб. см;

0,03003 - масса формальдегида, соответствующая 1 куб. см раствора соляной или серной кислоты концентрации 1 моль/куб. дм, г;

m - масса анализируемой пробы, г.

За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не превышают 0,2%.

Результат округляют до первого десятичного знака.

6.3. Определение массовой доли углекислого натрия в кальцинированной соде (технической).

6.3.1. Реактивы и растворы.

Кислота серная (ГОСТ 4204-77), раствор в концентрации 1 моль/куб. дм.

Метиловый оранжевый (индикатор), 0,1%-ный водный раствор.

Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).

6.3.2. Проведение анализа.

Взвешивают 2,3 - 2,5 г кальцинированной соды прокаленной при 270 - 300 °С до постоянной массы, помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, растворяют в 20 куб. см и титруют раствором серной кислоты в присутствии метилового оранжевого до изменения окраски раствора из желтой в оранжево-розовую.

6.3.3. Обработка результатов.

Массовую долю углекислого натрия (Х) в процентах вычисляют по формуле:

 

V х 0,05299 х 100

Х = -----------------,

m

 

где:

V - объем раствора серной кислоты концентрации 1 моль/куб. дм, израсходованный на титрование, куб. см;

0,05299 - масса углекислого натрия, соответствующая 1 куб. см раствора серной кислоты концентрации 1 моль/куб. дм;

m - масса навески кальцинированной соды, г.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,2%.

6.4. Определение массовой доли перекиси водорода в препарате и его растворах.

6.4.1. Реактивы и растворы.

Калий марганцево-кислый (ГОСТ 20490-76), х.ч., 0,1 н раствор.

Серная кислота (ГОСТ 4204-77), х.ч., раствор 1:4.

Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).

6.4.2. Проведение анализа.

0,15 - 0,20 г перекиси водорода или 1 - 2 мл рабочего раствора, взятые с погрешностью не более 0,0002 г (или 0,01 мл), помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см. Вносят 25 куб. см воды, 20 куб. см серной кислоты и титруют раствором марганцево-кислого калия до розовой окраски, не исчезающей в течение 1 мин.

Одновременно проводят контрольный опыт в тех же условиях и с тем же количеством реактивов, но без анализируемого препарата.

6.4.3. Обработка результатов.

Массовую долю перекиси водорода (Х) в процентах вычисляют по формуле:

 

(V - V) х 0,0017

1

Х = ----------------- х 100,

m

где:

V - объем 0,1 н раствора марганцево-кислого калия, израсходованный на

титрование анализируемого раствора, куб. см;

V - объем 0,1 н раствора марганцево-кислого калия, израсходованный на титрование контрольного опыта, куб. см;

0,0017 - масса перекиси водорода, соответствующая 1 куб. см 0,1 н

раствора марганцево-кислого калия, г;

m - масса навески (г) или объем раствора (мл), взятых для анализа.

За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,1%.

6.5. Определение массовой доли глутарового альдегида в препарате и его растворах.

6.5.1. Реактивы и растворы.

Пиросульфит натрия - Na S O (ГОСТ 10575-76).

2 2 2

Йод (ГОСТ 4159-79) 0,1 н раствор.

Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).

Раствор бисульфита натрия (NaHSO) готовят путем растворения в воде

3

пиросульфита натрия из расчета 4 г Na S O на 1 куб. дм воды. Пиросульфит

2 2 2

натрия взвешивают и растворяют в дистиллированной воде при тщательном

перемешивании. Хранят в посуде, плотно закрытой пробкой.

6.5.2. Проведение анализа.

В три конические колбы мерной пипеткой вносят 25 куб. см раствора бисульфита натрия, закрывают их притертыми пробками. Затем в колбы с бисульфитом натрия добавляют пробы анализируемого раствора глутарового альдегида (содержание около 0,025 г глутарового альдегида), взвешенные на аналитических весах с погрешностью не более 0,0002 г. Колбы оставляют при комнатной температуре на 30 мин., после чего непрореагировавший бисульфит натрия оттитровывают 0,1 н раствором йода до появления желтой окраски раствора.

Параллельно с рабочим проводят контрольный опыт, для чего в три конические колбы вносят по 25 куб. см раствора бисульфита натрия и оттитровывают их 0,1 н раствором йода до появления желтого окрашивания. Ввиду большой смачиваемости стенок бюретки раствором йода (во избежание большой ошибки) титрование ведут при одинаковой скорости раствора йода во время рабочего и контрольного определений.

6.5.3. Обработка результатов анализа.

Массовую долю глутарового альдегида определяют по формуле:

 

25 х N х К (V - V) х 100 0,25 х К х (V - V)

и и

Х = ------------------------- = -------------------,

1000 х m m

 

где:

Х - массовая доля глутарового альдегида, %;

m - навеска раствора глутарового альдегида, г;

N - нормальность водного раствора йода;

К - поправочный коэффициент к титру раствора йода;

V - объем раствора йода, пошедшего на титрование 25 куб. см раствора

и

бисульфита натрия (контрольной пробы), куб. см;

V - объем раствора йода, пошедший на титрование рабочей пробы, куб. см.

За результат анализа принимают среднее арифметическое трех определений, расхождение между максимальным и минимальным значениями которых не должно превышать 3%.

6.6. Определение массовой доли активного хлора в препаратах и их растворах.

6.6.1. Реактивы и растворы.

Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).

Калий йодистый (ГОСТ 4232-74), 10%-ный раствор.

Кислота серная (ГОСТ 4204-77), 5%-ный раствор.

Крахмал растворимый (ГОСТ 10163-76), 1%-ный раствор.

Натрий серноватистокислый (тиосульфат натрия) по стандарту СЭВ 223-75, 0,1 н раствор.

6.6.2. Определение массовой доли активного хлора в хлорной извести, кальция гипохлорите нейтральном и в натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты.

1 - 1,5 г натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты (кальция гипохлорита нейтрального) или 2,2 - 2,8 г хлорной извести взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г, переносят в фарфоровую ступку, добавляют 30 - 40 куб. см воды и растирают пестиком до образования однородной массы.

После отстаивания водный слой декантируют в мерную колбу вместимостью 500 куб. см. К остатку в ступке добавляют около 20 куб. см воды, тщательно растирают и переносят всю массу в ту же колбу. В случае исследования натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты навеску сразу переносят в мерную колбу. Объем жидкости в колбе доводят до метки водой, тщательно перемешивают и, не давая осадку осесть, отбирают пипеткой 50 куб. см раствора в коническую колбу вместимостью 500 куб. см. В эту же колбу вносят 10 куб. см раствора йодистого калия, перемешивают, прибавляют 50 куб. см раствора серной кислоты, закрывают колбу пробкой, снова перемешивают и помещают в темное место. Через 5 мин. выделившийся йод титруют раствором серноватистокислого натрия до соломенно-желтого цвета, добавляя 1 - 2 куб. см раствора крахмала и продолжают титрование до обесцвечивания раствора.

6.6.3. Определение массовой доли активного хлора в растворах вышеуказанных препаратов (п. 6.6.2) и гипохлорита натрия.

10 куб. см раствора отбирают пипеткой и переносят в мерную колбу вместимостью 250 куб. см, доводят объем раствора водой до метки и тщательно перемешивают.

10 куб. см приготовленного раствора переносят пипеткой в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, прибавляют 10 куб. см йодистого калия и 20 куб. см серной кислоты, перемешивают, закрывают колбу пробкой и ставят в темное место.

Через 5 мин. титруют выделившийся йод до обесцвечивания раствора.

6.6.4. Обработка результатов.

Массовую долю активного хлора (Х) в процентах вычисляют по формуле:

 

V х 0,0035453 х А х 100

Х = -----------------------,

m Б

 

где:

V - объем 0,1 н раствора серноватистокислого натрия, израсходованный на титрование анализируемой пробы, куб. см;

0,0035453 - масса активного хлора, соответствующая 1 куб. см 0,1 н раствора серноватистокислого натрия, г;

А - исходный объем приготовленного раствора, куб. см;

m - масса навески препарата, г;

Б - масса раствора, взятого для титрования, куб. см.

За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,3%.

7. Приготовление нейтрализующих растворов

Нейтрализующие растворы готовят в концентрации в 10 раз меньше, чем концентрация использованного дезинфицирующего средства.

Раствор делают на стерильной воде в стерильной посуде и разливают в пробирки или флаконы с соблюдением правил стерильности (растворы уксусной кислоты и бикарбоната натрия можно стерилизовать автоклавированием). Раствор аммиака стерилизации не подлежит. Готовые пробирки (флаконы) можно хранить в течение пяти дней при комнатной температуре.

8. Приготовление тампонов

Ватные или марлевые тампоны для взятия смывов монтируют на алюминиевой проволоке, пропущенной через резиновую пробку. В пробирки разливают по 10 мл физиологического раствора, закрывают резиновыми пробками с вмонтированными тампонами и автоклавируют при 1 атм. в течение 30 мин.

9. Подготовка материалов для исследования методом отпечатков

9.1. Подготовка предметных стекол.

Для исследования используют предметные стекла (размером 2,5 х 7,5 см) или стекла, разрезанные вдоль на две половинки (1,2 х 7,5 см). Стекла предварительно кипятят 10 - 15 мин. в 2 - 5%-ном растворе моющего порошка ("Лотос", "Новость" и т.п.). Затем поверхность предметных стекол с двух сторон натирают с помощью зубной щетки или ерша этим же порошком, слегка увлажненным водой, после чего тщательно промывают в проточной воде, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Подготовленные стекла хранят в банке с притертой крышкой в сухом виде.

9.2. Обработка ванн и пробирок, предназначенных для транспортировки, хранения и инкубирования проб-отпечатков.

При взятии проб на широкие стекла используют пластмассовые ванны для окраски мазков крови на предметном стекле (ТУ 64-1), на узкие - бактериологические пробирки, закрытые резиновыми пробками.

Пластмассовые ванны разбирают и тщательно моют горячим мыльным раствором, после чего ополаскивают вначале водопроводной водой, затем 70%-ным этиловым спиртом или кипящей дистиллированной водой и обрабатывают 2 ч ультрафиолетовыми лучами. На дно подготовленной ванны помешают стерильную фильтровальную бумагу, затем ванны собирают и закрывают крышками.

Бактериологические пробирки и резиновые пробки моют и стерилизуют общепринятым способом. Перед стерилизацией на дно пробирки помещают небольшой ватный тампон.

9.3. Подготовка предметных стекол со средой.

В стерильном боксе на предметные стекла наносят тонкий слой расплавленной питательной среды: для выделения группы бактерий кишечной палочки используют агар Эндо, стафилококков - 8,5%-ный солевой мясопептонный агар (рН 7,2 - 7,4). Количество нанесенной среды должно соответствовать 0,15 мл (четыре капли) для узкого предметного стекла и 0,33 мл (восемь капель) для широкого.

Перед нанесением на стекло среду, находящуюся в пробирках, ставят в водяную баню и расплавляют. Затем в нее погружают стерильную пастеровскую пипетку. Температуру воды в бане поддерживают в пределах 80 - 90 °С.

Прогретые над пламенем горелки предметные стекла (берут корнцангом) раскладывают на ровной, строго горизонтальной поверхности стола. На них пипеткой наносят указанное количество питательной среды, отступив на 2 - 2,5 см от поперечного края стекла. Затем, расположив горизонтально пастеровскую пипетку, питательную среду быстро распределяют по средней трети поверхности стекла и подсушивают при комнатной температуре до появления вокруг питательной среды высушенной полосы шириной 0,5 - 1 мм. Широкие стекла со средой помещают в пластмассовые ванны, узкие - в пробирки.

Ванны и пробирки предварительно увлажняют путем внесения на дно 1 мл, 0,1 мл стерильной водопроводной воды соответственно.

Для удобства транспортировки ванны устанавливают в бюксы, пробирки - в металлические пеналы или в специально приспособленную сумку.

Подготовленные предметные стекла с солевым агаром хранят при температуре 4 °С до десяти суток, со средой Эндо - двое-трое суток (если нет видимого изменения цвета среды).

10. Подготовка стекол для микрокультивирования микобактерий

Предметные стекла разрезают вдоль на узкие полоски размером 1,2 х 7,5 см, моют и помещают на 2 ч в хромпик (40 г двухромовокислого калия высыпают в фарфоровую кружку или эксикатор и растворяют в небольшом количестве воды, затем осторожно добавляют концентрированную серную кислоту до общего объема 1 л).

После хромпика стекла вновь моют дистиллированной водой, протирают чистой льняной тканью, стерилизуют сухим жаром (160 °С) 2 ч и хранят в закрытых сосудах (эксикаторах).

11. Приготовление питательных сред

11.1. Среды для выделения кишечной палочки.

11.1.1. Модифицированная среда Хейфеца.

К 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлорида натрия и 4 г лактозы. Смесь доводят до кипения, затем фильтруют и после остывания определяют рН, который должен быть 7,4 - 7,8. Затем к среде добавляют в качестве индикатора 1 мл 5%-ного спиртового раствора розоловой кислоты и 2,3 мл 0,1%-ного водного раствора метиленовой сини. Среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. 15 мин. Исходный цвет среды - красновато-сиреневый.

11.1.2. Питательная среда КОДА сухая.

Состав и способ приготовления приведены в этикетке на упаковке среды.

11.2. Среды для выделения стафилококка.

11.2.1. Солевой мясопептонный бульон. К обычному МПБ с рН 7,2 - 7,4 добавляют 6,5% натрия хлорида х.ч. или ч.д.а., перемешивают до полного растворения соли, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 1 атм. 20 - 30 мин.

11.2.2. Солевой мясопептонный агар.

К расплавленному МПА добавляют 8,5% натрия хлорида х.ч. или ч.д.а., перемешивают до полного растворения соли, разливают в колбы и стерилизуют при 1 атм. 20 - 30 мин. Перед использованием солевой агар разливают в стерильные бактериологические чашки по 10 - 15 см. После застывания среду подсушивают в термостате 1 ч.

11.3. Дифференциально-диагностическая среда для индикации Bac. anthracis.

11.3.1. Приготовление растворов ингредиентов.

Полимиксина М сульфат во флаконе растворяют в стерильной дистиллированной воде, а затем последовательными разведениями стерильным 0,9%-ным раствором натрия хлорида доводят до концентрации 10000 ЕД/мл.

Невиграмон переносят в стеклянный флакон или пробирку и растворяют в 25%-ном водном растворе аммиака при тщательном перемешивании стеклянной палочкой. Затем последовательно разводят стерильным 0,9%-ным раствором натрия хлорида до концентрации 100 мкг/мл.

Моющее средство "Прогресс" растворяют стерильной дистиллированной водой до 0,1%-ной концентрации.

Гризеофульвин (в таблетках) тщательно растирают в ступке, затем растворяют в стерильной дистиллированной воде до содержания 100 мкг препарата в 1 мл.

Фенолфталеинфосфат натрия (заводской 10%-ный раствор) стерилизуют 30 мин. на водяной бане при 56 °С.

11.3.2. Приготовление дифференциально-диагностической среды.

100 мл питательного агара (в колбах) расплавляют в кипящей водяной бане и охлаждают до температуры 45 - 50 °С. Затем в агар добавляют 0,5 мл полимиксина М сульфата, столько же невиграмона, гризеофульвина <*>, такое же количество моющего средства "Прогресс" и 0,1 мл фенолфталеинфосфата натрия.

<*> Гризеофульвин добавляют в среду при подозрении на загрязнение материала грибами.

 

После перемешивания среду разливают в чашки Петри (крышки открыты) и подсушивают 1,5 - 2 ч. Дифференциально-диагностическую среду после разлива можно хранить в холодильнике в течение одних-двух суток.

Готовую дифференциально-диагностическую среду выпускает Ставропольская научно-исследовательская ветеринарная станция (355100, г. Ставрополь, ул. Биологическая, 20).

11.4. Среда Сотона для выделения микобактерий.

В 940 мл дистиллированной воды растворяют 4 г аспарагина, 2 - лимонной кислоты, 0,5 - кали фосфорнокислого двузамещенного, 0,5 - сернокислой магнезии и 0,05 г лимоннокислого аммиачного железа. Затем добавляют 60 мл нейтрального глицерина. После полного растворения аспарагина и солей рН среды должен быть 7,4. Среду разливают по 200 мл в колбы вместимостью 250 мл и стерилизуют 30 мин. в автоклаве при 1,5 атм.

Перед использованием в колбу со средой Сотона добавляют 30 мл стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота и разливают в стерильные пробирки по 7 - 8 мл.

12. Приготовление индикаторных пробирок для контроля качества дезинфекции аэрозолями формальдегида

Индикаторные пробирки - это стеклянные трубки диаметром 4 - 8 мм и длиной 40 - 50 мм. В качестве таких пробирок могут быть использованы пробирки Уленгута или отрезки пастеровских пипеток, запаянные с одного конца. Пробирки заливают расплавленной индикаторной средой до уровня обреза пробирок, запечатывают парафином и хранят 1 мес. (со дня изготовления) при температуре 0 - 5 °С.

Для учета результатов без линейки на индикаторные пробирки при их изготовлении можно нанести две риски на расстоянии 18 и 30 мм от среза пробирки.

Для экспресс-метода контроля качества аэрозольной дезинфекции помещений используют среду Эндо, выпускаемую биологической промышленностью в сухом виде; 2%-ную взвесь сухой среды в дистиллированной воде доводят до кипения и пропускают через ватный фильтр, после чего среду заливают в пробирки при помощи пипеток.

13. Подготовка тест-объектов для контроля качества дезинфекции спецодежды

В качестве тест-культур используют музейные штаммы кишечной палочки (E. coli - штамм 1257), золотистого стафилококка (St. aureus - штамм 209-F) и Bac. cereus - штамм 96.

Музейные культуры (после лиофильной сушки) хранят при температуре минус 4 °С не более двух лет, в виде посевов на МПА (посев уколом) под слоем стерильного вазелинового масла (толщина слоя 1,5 - 3 мм) не более шести месяцев.

Батистовую ткань стирают, гладят, нарезают на кусочки размером 5 х 10 мм, которые раскладывают по 50 шт. в чашки Петри. Чашки завертывают в плотную бумагу и стерилизуют 30 мин. в автоклаве при температуре 110 °С (0,5 атм.).

Стерильные тест-объекты в той же чашке Петри заливают смесью 2 млрд. взвеси тест-культуры и инактивированной сыворотки крови (или 40 - 50%-ной эмульсии кала животных), взятых в соотношении 1:1 (из расчета 1 мл на 1 тест-объект). Чашку Петри закрывают крышкой и оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Затем тест-объекты переносят в другую чашку Петри на поверхность стерильной фильтровальной бумаги, положенной в два слоя на дно чашки, покрывают сверху листом стерильной фильтровальной бумаги, чашку закрывают крышкой. Через 10 мин. тест-объекты переносят на поверхность листа стерильной фильтровальной бумаги в чашке Петри, подсушивают 20 - 30 мин. в термостате при 37 °С.

 

Приложение 4