Схема микробиологической диагностики цитомегаловирусной инфекции

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ:	слюна, моча, кровь (сыворотка, плазма), лейкоциты крови, СМЖ, мокрота, пуповинная кровь, амниотическая жидкость, секционный материал
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ:	ЭКСПРЕСС – ДИАГНОСТИКА, ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЙ, СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ (ОСНОВНОЙ), МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ (ОСНОВНОЙ)

 

Экспресс-метод	Вирусологический метод	Серологический метод	Молекулярно-биологический метод
Световая микроскопия мазков-отпечатков, окрашенных по Романовскому-Гимзе: выявление гигантских цитомегалических клеток (крупные клетки овальной формы, размером 25-40 нм, в ядре включение, окруженное светлым ободком – «совиный глаз»).	I ЭТАП: заражение первичных (культуры клеток фибробластов эмбриона человека) и перевиваемых (Vero) культур. Инкубация 20-30 дней. II ЭТАП: индикация вируса в зараженной культуре: а) в пробирочных культурах - по ЦПД (обнаружение гигантских клеток с внутриядерными включениями), при культивировании на матрасах – по образованию бляшек. III ЭТАП: идентификация выделенного вируса: РИФ (непрямой метод).	РСК; РИФ; ИФА; 4. иммуноблоттинг.    Диагностическим признаком является нарастание титра антител в парных сыворотках в ≥ 4 раза. IgM свидетельствуют об остром периоде болезни; IgA – о реактивации процесса.	ПЦР; ММГ.

 

9. Препараты для специфической терапии и профилактики инфекции: для специфической профилактики разработаны живые вакцины, полученные из аттенуированных штаммов и применяющихся в виде моновакцины или дивакцины в сочетании с вакциной против краснухи.

Лечение ЦМВИ должно быть комплексным и включать специфические противовирусные препараты, иммуномодуляторы, т.к. вирус обладает иммунодепрессивным действием, витаминотерапию.

22. Вирус Эпштейн-Барра:

1. История открытия возбудителя: вирус Эпштейн-Барра выделен английским вирусологом М. Эпстайном и канадским вирусологом И. Барр из биоптатов пациентов с лимфомами Беркитта в 1964 г.

2. Таксономия: семейство: Herpesviridae (от греч. herpes – ползучи), подсемейство: Gammaherpesvirinae, род: Lymphocryptovirus, тип (официальное название): ВГЧ-4, тип (общеупотребляемое название): вирус Эпштейна-Барр.

3. Характеристика возбудителя:

А) Морфология:

· Сферическая форма

· Размеры – 150-200 нм

· Сложная организация:

· ДНК + капсид

· тегумент

· суперкапсид с гликопротеиновыми шипиками

Б) Культуральные свойства: В культурах клеток (первичные культуры клеток почек кроликов и обезьян, ЦМВ – фибробласты эмбриона человека, Эпштейна-Барр, ВГЧ-6, 7 и 8 – Т- и В-лимфоциты)

В) Ферментативная активность:

Г) Тип НК, структура Вириона, методы культивирования:

· Двунитевая линейная ДНК

· Тип симметрии нуклеокапсида – кубический (162 капсомера)

Д) Антигенная структура:

· Мембранный АГ (МА/LYDMA – lymphocyte detected membrane antigen) – ранний

· Ядерный АГ (EBNA – Epstein-Barris nucleic antigen) – комплементсвязывaющий

· АГ вирусного капсида (VCA – virus capsid antigen) – поздний

Ж) Факторы патогенности:

З) Резистентность: 1) Чувствительны к:

· органическим растворителям, детергентам

· низкой рН

· 500С – 30 мин, 1000С – мгновенно

· комнатной t0С – несколько часов

· ультразвуку, УФО

· повторного замораживанию и оттаиванию

2)Устойчивы к:

· низкой t0С

· высушиванию

4. Роль в патологии: вызывают заболевания: инфекционный мононуклеоз, лимфома Беркитта, нозофарингеальная карцинома.

5. Эпидемиология:

· Источник инфекции – больной человек и вирусоноситель.

· Механизм передачи – воздушно-капельный. Восприимчивость у людей низкая. Заражению способствует тесный контакт. Болеют обычно дети и люди молодого возраста.

· Вирус проникает через эпителий слизистых оболочек верхних дыхательных путей.

· Инкубационный период при инфекционном мононуклеозе – 5-12 дней (до 60). Характерно постепенное развитие заболевания: повышение температуры, головная боль, недомогание, потливость, боли в горле.

6. Патогенез, особенности клинических проявлений:

· В отличие от многих других герпесвирусов, вирус Эпштейна-Барр поражает в первую очередь эпителиальные клетки рта, глотки, миндалин и слюнных желез. Здесь он размножается наиболее активно.

· При первичном заражении после активного увеличения количества вирионов в эпителиальной ткани они попадают в кровь и разносятся по всему организму. Большое количество их помимо слюнных желез обнаруживается также в клетках шейки матки, печени и селезёнки. Главной мишенью их становятся В-лимфоциты, клетки иммунной системы.

· Важной отличительной чертой вируса является то, что он не тормозит и не нарушает размножение клеток, а наоборот — стимулирует их клонирование. В результате в острой фазе заражения количество лимфоцитов лавинообразно увеличивается, они заполняют лимфатические узлы, вызывая их набухание и уплотнение.

· Поскольку В-лимфоциты сами по себе являются защитными клетками организма, заражение их вирусом приводит к подрыву иммунитета. Однако сами заражённые лимфоциты достаточно быстро и эффективно уничтожаются клеточными системами защиты — Т-лимфоцитами, Т-супрессорами и NK-лимфоцитами. При этом сами эти типы клеток вирусом Эпштейна-Барр не поражаются, и потому в любом случае играют важную роль в борьбе с вирусом. Однако при иммунодефиците их количество столь мало, что сдержать развитие инфекции они не могут.

· В острой фазе заражения на каждую тысячу здоровых В-лимфоцитов приходится один заражённый. После выздоровления организма носителем вируса является один В-лимфоцит из миллиона.

· В случае ослабленного иммунитета активное увеличение количества заражённых В-лимфоцитов приводит к запуску процессов злокачественной трансформации как самих В-лимфоцитов, так и тех органов, в которых количество вирусных частиц особенно велико. Сам вирус без надёжного иммунного ответа поражает клетки сердца и мозга, и у больных иммунодефицитами может привести к серьёзным нарушениям в работе центральной нервной системы, сердечной мышцы и даже к смерти.

7. Характер иммунитета: Иммунитет после перенесенного заболевания стойкий. Появляются специфические Т-киллеры, мишенью которых является вирусный антиген МА на поверхности В-лимфоцитов. Активируются естественные киллеры, увеличивается активность супрессоров, которые тормозят пролиферацию В-лимфоцитов. При выздоровлении появляются Т-клетки памяти, которые уничтожают зараженные вирусом В-лимфоциты. Синтезируются также вируснейтрализующие АТ. В крови больных появляются сначала IgM, затем IgG-антитела к антигенам вируса.

8. Лабораторная диагностика: