Метод полимеразно-цепная реакция

Наиболее точным и быстрым методомв настоящеевремя считается ДНК-диагностика (полимеразная цепная реакция – ПЦР). Точность этого исследования составляетоколо 97%, а результат исследования известен уже через2-3 часа. Для проведения ДНК-диагностики из биологического материала извлекается генетически уникальный кусочек ДНК микроба и исследуется в лаборатории.

В настоящее время ПЦР-технология занимает первое место в клинической лабораторной диагностике и обладает целым рядом существенных преимуществ [13]:

1) высокая чувствительность (98%), которая помогает обнаружить даже единичный патоген;

2) быстрое получение результатов;

3) возможность одновременного выявления нескольких инфекционных возбудителей;

4) прямая и достоверная идентификация ДНК штамма T. vaginalis;

5) высокий порог специфичности (98%), который обусловлен выбором праймеров для каждого отдельно взятого участка генома.

К недостаткам метода ПЦР диагностики можно отнести то, что данный метод предусматривает строгое соблюдение требований по оснащению медицинского, лабораторного помещения, требования по наличию специальных фильтров с высокой степенью очистки, которые позволяют не дать повредить взятый биологический материал, не дать ему загрязниться от иных живых микроорганизмов, очень жесткие требования по подготовке к проведению анализа и соблюдение всех необходимых условий, что создает определенные неудобства при необходимости как можно быстрого прохождения анализа, а также является дорогим методом по сравнению с другими методами [18].

По общей биологической характеристике урогенитального трихомониаза – Trichomonas vaginalis является одним из наиболее распространенных заболеваний мочеполового тракта и занимает первое место среди инфекций, передающихся половым путем.

Каждый метод лабораторной диагностики, используемый для обнаружения T. vaginalis имеет как свои преимущества, так и недостатки. Важно то, что ни один метод не дает 100% гарантии обнаружения трихомонад. Поэтому если есть симптомы трихомоноза, а трихомонады не обнаружены, то это не значит, что трихомонад нет (их могли просто не найти), в таких случаях необходимо многократное обследование различными методами.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

 

Анализ проблемы

Диагностика урогенитального трихомониаза (УГТ) основывается на выявлении клинических признаков заболевания и обнаружении T.vaginalis в исследуемом материале. В «классическом варианте» течения болезни, клинические признаки трихомонадной инфекции включают: гиперемию вульвы и влагалища, желто-зеленые пенистые выделения, зуд, дизурию. Однако только на основании клинической картины диагноз не может быть выставлен, так как указанные клинические симптомы могут быть обусловлены другими инфекционными агентами урогенитального тракта.

Таким образом, поскольку симптомы трихомониаза, как и большинства других инфекций, передающихся половым путем (ИППП), не являются надежными критериями, в обязательном порядке с целью диагностики трихомонадной инфекции необходимо применение лабораторных методов исследования.

Все лабораторные исследования по теме выпускной квалификационной работы проводились совместно с сотрудниками лабораторииГКБ им. С.П. Боткина в период прохождения преддипломной практики с 20.04.2017 г. по 17.05.2017 г.

Материал для исследования

Материалом для исследования на наличие Т. vaginalis служили: отделяемое из влагалища, мочеиспускательного канала (уретры) и цервикального канала(шейки матки). В исследовании анализировали материал, взятый у пациенток разных возрастных групп. Первая группа в возрасте от 20 до 35 лет, вторая группа 36-60 лет и третья группа старше 60 лет. Данные представлены на рисунке 5.

Рисунок 5. Возраст пациенток, исследованных на T. vaginalis.

На диаграмме видно, что больше всего было обследовано лиц с подозрением на урогенитальный трихомониаз в первой возрастной группе (51%), чуть менее во второй возрастной группе (34,9%) и самое наименьшее количество исследований было проведено в третьей возрастной группе 14, 1%.

Клинический материал для ПЦР-исследований собирался одноразовыми стерильными инструментами типа «Cytobrush. Материал переносился с помощью зонда в пробирки типа «эппендорф» с транспортной средой голубого цвета «Проба Рапид», зонд тщательно прополоскивали в транспортной среде, а затем извлекали и удаляли. Пробирки плотно закрывали крышкой и маркировали. Пробирки с исследуемым материалом представлены на рисунке 6.

 

 

Рисунок 6. Пробирки с материалом типа «эппендорф»

Методы исследования

В ГКБ им. С.П. Боткина за период преддипломной практики в период с 20.04.2017 г. по 17.05.2017 г. всего было исследовано 10600 проб, из них гинекологических мазков 10500 и 100 проб изучено методом ПЦР. Молекулярно-биологический метод проводили исключительно в экстренных случаях, в результате срочной госпитализации, таких случаев было 92 и в 8 сомнительных случаях, когда материал было трудно интерпретировать с помощью микроскопического метода исследования, чтобы избежать ложноотрицательных результатов, а также для сравнения чувствительности и специфичности основных методов исследования– это микроскопического и молекулярно-биологического, применяемых для выявления T. vaginalis.