Оценка и культивирование зародышей

Оценка качества эмбрионов

Морула (6 день); Ранняя бластоциста (7 день), бластоциста (8-9 дней).

В лаборатории или отдельном помещении ветеринарного пункта температура в пределах 20-25 ̊С. За 3 часа до работы помещение обрабатывают при помощи УФ ламп (1Вт на 1 м³).

После промывания каждого из рогов матки цилиндры тс эмбрионами переносят в стерильный бокс. Осаждение эмбрионов в течение 20 минут. Работу проводят в термостате при температуре 37 ̊С. Верхнюю часть жидкости из сосуда удаляют шприцом, оставляют 60-100 мл. Оставшуюся жидкость с эмбрионами переносят в 2-3 чашки Петри.

Каждый отдельный эмбрион с помощью специального микрошприца переносят в часовое стекло (миниатюрная чашка Петри), для кратковременного хранения используют 1 мл питательной жидкости.

Чтобы оценить целостность морфологических структур, используют микроскоп с увеличением 160-180 или увеличительное стекло. Обращают внимание на форму зиготы (морула, ранняя или поздняя бластоциста), состояние зоны пеллюцида, число блатомеров, равномерность их дробления, выраженность эмбриобласта и трофобласта. Полноценные: шарообразная форма, неповрежденная прозрачная оболочка (зона пеллюцида), одинаковыебластомеры с четкой плазматической оболочкой, светлая гомогенная цитоплазма. Экспресс-метод определения жизнеспособности.

Классификация эмбрионов

Отличные – идеально соответствуют стадиям развития. Округлая форма. Нет видимых нарушений морфологии. зародышевые клетки однородные по цвету.

Хорошие – незначительные отклонения. Неравномерное увеличение 2-3 бластомеров, до 5 клеток мертвые, форма яйцевидная.

Посредственные (сомнительные) – используют, когда возникает дефицит отличных и хороших. Степень их приживаемости не больше 10-12%. Эмбрионы подвержены дегенеративным изменениям, отстают в своем развитии. В зародышевых клетках имеет место просветление зародышевой массы. 20 и более мертвых клеток. Разрастание отдельных бластомеров в 3 и более раз.

Плохие – приживаемость не более 1-3 %. Отстают в развитии, дробление бластомеров заторможено, 50% клеток дегенерировано.

Метод флуоресцентных красителей

Основан на различной степени проницаемости красок через прозрачную оболочку живых и мертвых эмбрионов.

Эмбрион помещают на предметное стекло, добавляют какой-то из красителей (синька Эванса, акридин-оранж, краска FDA, ДАР). Требуется не более 1,5 минут.

Метод культивирования (биологический метод оценки). Основывается на тех изменениях биологических процессов, которые возникают в структурах эмбрионов. Для культивирования применяют различные питательные среды. Самый простой: культивирование в пробирках или соломинках. Эмбрион переносят в пробирку с 1 мл питательной среды + 2-3 мл вазелинового масла (среда Дюльбекко с добавлением 20% фетальной сыворотки теленка).

0,25 мл переносят в соломинку или пробирку, ставят в термостат при температуре 37 ºС в шприце. Эмбрионы в культуре продолжают развитие в 90% случаев. Стельность более 50% на разных стадиях. При работе с эмбрионами шприцы инсулиновые.

Найденных зародышей при помощи пастеровской пипетки переносят в среду для кратковременного хранения (среда Дюльбекко с добавлением 20% фетальной сыворотки теленка). После оценки зародышей их культивируют при 37 градусах до момента пересадки или оставляют для хранения.

Способы пересадки эмбрионов

В настоящее время пересадка эмбрионов реципиентам производится хирургическим и нехирургическим способами. При пересадке нужно точно знать местонахождение эмбриона в половых путях коровы. Это связано с переходом предимплантационного периода, в котором находится эмбрион до пересадки, в новый период эмбрионального развития – имплантационный.

При естественном течении эмбрионального периода зародыш на стадии морулы или бластоцисты находится в верхнем отделе рога матки, поэтому и наиболее благоприятным местом для его аппликации является верхняя часть рога матки реципиента. Установлено, что пересадка эмбрионов глубоко в рог матки реципиента лучше всего обеспечивается хирургическим способом. При нехирургической же пересадке, которая происходит в период диэструса, место аппликации эмбриона в роге матки контролируется менее точно. Эффективность хирургического способа пересадки эмбриона составляет 60–70%, а число телят – 3–4 на донора. Хирургический способ использовали в основном до середины 70-х годов. Однако он требует больших затрат средств. Кроме того, широкое применение хирургического метода сдерживается сложностью проведения операций в производственных условиях, получением травм вследствие резекции мышц, и невозможностью многократного использования реципиента. Поэтому последние 10–15 лет пересадку эмбрионов в основном осуществляют нехирургическим способом. При нехирургической пересадке основным достоинством, кроме простоты и экономичности, является возможность многократного использования реципиента. Разработано несколько способов нехирургической пересадки эмбрионов. Однако все они основаны на одном принципе – введении эмбриона в рог матки через шейку, вследствие чего этот способ назван также цервикальным.

После пересадки эмбрионов проводят наблюдение за реципиентами, обращая особое внимание на возможное проявление у них повторной половой охоты. Для установления стельности у коров-реципиентов используют несколько методов: визуальный; по уровню прогестерона в крови или молоке; клинический, главным образом путем ректальной пальпации.

Профилактика эмбриональной смертности – инъекция прогестерона.

Бесплодие и яловость

Оптимальное состояние воспроизводства стада: 50% коров стельные, 17% в послеродовом периоде, 33% осемененные, но не проверенные на стельность.

Высокая молочная продуктивность не приводит к снижению воспроизводительной способности. выход телят должен составлять порядка 86%.