ТЕМА 21. Реакция преципитации: кольцепреципитации (21.1), диск-преципитации (21.2), диффузионной преципитации (21.3)

Сущность реакции состоит в осаждении (преципитации) антигена, находящегося в высокодисперсном состоянии, под воздействием специфических антител в растворе электролита. Растворимый антиген, участвующий в реакции, называется преципитиногеном.

Антитела, реагирующие с растворенным антигеном, обеспечивающие выпадение мелкодисперсионного осадка комплекса антиген-антитело в среде электролита, называются преципитинами.

Реакция является высокочувствительным тестом. Посредством ее можно выявить специфический антиген в разведении 1:100 тыс. и даже 1:300 тыс., т.е. в столь малых количествах, в которых он не обнаруживается химическим путем.

Реакция преципитации применяется для диагностики инфекционных болезней, вызываемых как бактериями, так и вирусами.

В ветеринарии реакции преципитации широко используют для исследования кожевенного и мехового сырья, шерсти, мяса, загнившего патологического материала на сибирскую язву. Это особенно важно, когда не представляется возможным выделение самого возбудителя.

Бактериальные антигены, используемые для реакции преципитации, обладают устойчивостью к высокой температуре. Так, сибиреязвенный, чумной, туляремийный и другие антигены не разрушаются при кипячении в течение 45 минут, они сохраняются в гниющих субстратах.

Реакция преципитации применяется также в судебной медицине и ветеринарии для определения видовой принадлежности белка крови и в санитарной практике — для выявления фальсификации продуктов. В санитарной практике применяется для выявления фальсификации мясных, рыбных, мучных продуктов. Посредством этой реакции можно определить, из какого мяса (свиного, говяжьего, конины и др.) приготовлен тот или иной продукт.

Для ее проведения разработаны методы: кольцепреципитации, диффузной преципитации, диск-преципитации.

Реакция кольцепреципитации

Этот метод был разработан Асколи (1910) в основном для исследования кожевенного сырья на сибирскую язву. Эта реакция получила и другое название – асколизация кожевенного сырья.

Для ее проведения необходимы следующие компоненты:

1. Экстракт из исследуемого сырья. Исследуемые пробы кожи, нанизанные на проволоку, стерилизуют в автоклаве при 1,5 атм 30 минут. Пробы охлаждают, измельчают, помещают в баночки и заливают карболизированным физиологическим раствором (на 1 г сырья 10 мл экстрагента). Продолжительность экстрагирования от 16-20 ч (холодный способ).

Пробы от свиных шкур и мяса экстрагируют горячим способом в водяной бане в течение 30 минут.

Полученные пробы фильтруют через асбестовую вату. Экстракт из исследуемого сырья должен быть прозрачным.

В экстракте, полученном из кожсырья больных животных, содержится сибиреязвенный антиген.

2. Сибиреязвенную преципитирующую сыворотку получают путем гипериммунизации лошадей на биофабриках.

Для этого лошадям-продуцентам внутривенно вводят многократно (16-17 раз) возбудитель сибирской язвы (антиген) с интервалом в три дня в нарастающих дозах с 5 до 70 мл. Предварительно до гипериммунизации лошадей вакцинируют для создания грунд-иммунитета.

Через 9-10 дн. после последнего введения антигена у лошадей берут кровь в количестве 5-6 литров и из нее получают преципитирующую сыворотку, которая содержит сибиреязвенные антитела. Эту полученную специфическую сыворотку консервируют 0,5%-ным раствором фенола и отстаивают в течение двух месяцев, фильтруют через стерилизующие пластины и расфасовывают в стерильные флаконы.

Для контроля используют следующие компоненты:

1. Специфический сибиреязвенный антиген биофабричного изготовления, который представляет собой обезвреженный экстракт, полученный из возбудителя сибирской язвы.

2. Нормальную сыворотку, полученную от здоровых животных, фабричного изготовления.