Определение групповой принадлежности крови перекрестным методом и

Цель работы: познакомиться с принципами определения групп крови и определить группы крови нескольких доноров.

Ход работы:

I. Поиск неизвестных агглютиногенов с помощью известных моноклональных антител-цоликлонов.

1. Нанести в соответствующие ячейки верхнего ряда гематологического планшета по две капли цоликлона анти-А (розовый раствор) и  цоликлона анти-В (голубой раствор). Пользоваться отдельными пипетками и не смешивать растворы цоликлонов!

2. Добавить в каждую ячейку по капле донорской крови и сразу же тщательно перемешать кровь с цоликлонами с помощью специальных палочек, не смешивая образцы.

 

II. Поиск неизвестных агглютининов с помощью известных агглютиногенов,      присутствующих на поверхности стандартных эритроцитов.

1. Добавить по 3-4 капли донорской плазмы или сыворотки в три ячейки второго ряда планшета.

2. Разными пипетками в каждую ячейку добавить по маленькой капле взвеси стандартных эритроцитов (I(0), II (A), III (B) группы соответственно, отдельно в каждую лунку) и сразу же перемешать специальной палочкой. Стандартные эритроциты не смешивать друг с другом!

 

Подождать, периодически покачивая планшет. Реакция агглютинации наступает через 1-3 мин. При этом капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группа крови устанавливается после выявления наличия или отсутствия:

- в пункте I – неизвестных агглютиногенов;

- в пункте II – неизвестных агглютининов.

 

Результаты занести в таблицы, отметив (+) наличие или (–) отсутствие агглютинации        в каждом случае:

 

I. Проведение исследования с использованием цоликлонов

	Цоликлоны
	Анти-А	Анти-В
Исследуемая кровь

 

При этом, если агглютинация не происходит, то это указывает на отсутствие агглютиногенов, что свойственно для группы 0(I). Если агглютинация происходит с обоими цоликлонами (анти-А и анти-В), то присутствуют и А и В агглютиногены, это характерно для группы крови AB(IV). Если агглютинация выявляется только с моноклональными антителами против агглютиногена А, то это признак A(II) группа крови. Наличие  агглютинации только с цоликлоном анит-В, указывает на B (III) группу крови.

II. Проведение исследования с помощью стандартных эритроцитов

	Стандартные эритроциты
	I(0)	II (A)	III (B)
Исследуемая плазма

 

При этом, если агглютинация  происходит c II (A) и III (B) эритроцитами, то это указывает на присутствие α и β агглютининов, что свойственно для группы 0(I)αβ. Если агглютинация происходит только с III (B), это признак наличия β агглютининов и группы А(I I)β. Наличие склеивания только II (A) стандартных эритроцитов указывает на присутствие в сыворотке α агглютининов, что характерно для группы   III (B)α. Отсутствие агглютинации эритроцитов во всех лунках доказывает отсутствие агглютининов в исследуемой сыворотке, что свойственно I V(АВ) группе. Стандартные эритроциты I(0) группы не должны агглютинировать ни в каком случае.

Окончательный вывод о групповой принадлежности делается только при совпадении результатов методом цоликлонов и методом стандартных эритроцитов по перекрестной методике. В случае несовпадения перекрестной методики врач не имеет права устанавливать групповую принадлежность и в этом случае необходимо найти причину этого несовпадения (некачественные реактивы и пр.).

 

ПРИМЕР:

 

		Цоликлоны
		Анти-А	Анти-В
Исследуемые эритроциты		+	-
	Стандартные эритроциты
	I(0)	II (A)	III (B)
Исследуемая плазма	-	-	+

 

Вывод: Так как произошло совпадение перекрестного метода и у исследуемых эритроцитов выявлен агглютиноген А, а в сыворотке испытуемого обнаружены агглютинины β можно сделать вывод, что это группа   А(II)β.

НА ЗАНЯТИИ:

		Цоликлоны
		Анти-А	Анти-В
Исследуемые эритроциты
	Стандартные эритроциты
	I(0)	II (A)	III (B)
Исследуемая плазма

Вывод: Произошло_________________________ перекрестного метода, следовательно, исследуемая кровь относится к _______________________ группе. Пациенту       с данной группой крови можно перелить компоненты крови ______________________ группы.

 

 Лабораторная работа № 10