Методы выделения и диагностики патогенов

В качестве материала для исследования используют кровь, мочу, испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка. Основным методом диагностики является бактериологический, завершающийся внутривидовой идентификацией выделенной чистой культуры возбудителя - определением фаговара. Применяют также серологический метод - реакцию агглютинации Видаля. РИФ (реакция иммунофлуоресценции) применяют для обнаружения антигена возбудителя в биологических жидкостях. Серологический метод обнаружения О- и Н - антител необходим широкий набор диагностических О- и Н-сывороток. Бактерионосителей выявляют по обнаружению Vi-антител в сыворотке крови с помощью РПГА (реакции пассивной гемагглютинации) и положительному результату бактериологического выделения возбудителя. Для внутривидовой идентификации применяют фаготипирование [1, 4, 19, 22].

Брюшной тиф вызывают бактерии Salmonella typhi, паратифы - S. paratyphi А и S. schottmuelleri. Бактериологическую и серологическую диагностику проводят в зависимости от периода заболевания. В 1-7-й дни болезни и до конца лихорадочного периода наблюдается бактериемия и чистую культуру можно выделить из крови (гемокультура). Для этого у больного из локтевой вены берут 5-10 мл крови и сразу же засевают в колбу с 50 мл среды Рапопорт, содержащей желчь, глюкозу и индикатор. После инкубации 18-20 ч при 37°С наблюдают изменение среды. В случае диффузного помутнения и изменения цвета среды за счет ферментации глюкозы делают предварительный вывод о наличии возбудителей брюшного тифа; при наличии, кроме этих признаков, газообразования в поплавке - возбудителей паратифов [22].

Со среды Рапопорт культуру пересевают на среды Эндо и Рассела для выделения чистой культуры; на 3-й день отмечают ферментацию глюкозы на среде Рассела [19, 21, 22].

Серологическая идентификация сальмонелл (определение серовара) начинается с постановки с выделенной культурой реакции агглютинации на стекле с поливалентной адсорбированной О-сывороткой к сальмонеллам групп А, В, С, Д, Е, дающей возможность определить принадлежность культуры к роду Salmonella. Затем для допределения серовара культуру испытывают с монореценторными Н-сыворотками [21, 22].

В целях более полной идентификации сальмонелл определяют наличие лизиса выделенной культуры поливалентным брюшнотифозным фагом и при необходимости фаговаром. В настоящее время при определении фаговара S. typhi, находящейся в Vi-форме, используют сокращенное число фагов (45), фаговара S. paratyphi А - 6 специфических фагов, фаговара S. schottmuelleri-11 фагов [19, 21, 22].

К началу второй недели заболевания в крови больных появляются антитела, которые выявляют реакцией агглютинации Видаля. В качестве антигенов используют О- и Н-брюшнотифозные и ОН-паратифозные диагностикумы, при этом известно, что при брюшном тифе О-антитела накапливаются в разгар заболевания, а к концу болезни их количество снижается. Н-антитела, наоборот, обнаруживаются в конце заболевания и сохраняются длительное время после его перенесения. Титр антител агглютининов нарастает в процессе болезни и это отличает так называемый «инфекционный Видаль» от «прививочного и поствакцинального Видаля», так как в последнем случае после перенесенного заболевания и вакцинатитр реакции Видаля равен 1:100 [22].

Возбудители брюшного тифа и паратифов появляются в испражнениях к концу заболевания, после заболевания может наблюдаться носительство возбудителя инфекции. С целью выделения сальмонелл из испражнений (выделение копрокультуры) делают посев испражнений в виде суспензии в изотоническом растворе хлорида натрия на среду Эндо и элективную среду Мюллера; через 24 ч инкубации бесцветные колонии со среды Эндо пересевают на среду Рассела. Дальнейший ход идентификации культуры такой же, как при получении гемокультуры [22].

Возбудители пищевых токсикоинфекций - обычно бактерии рода Salmonella. Клиническое проявление токсикоинфекций связано с попаданием в желудочно-кишечный тракт большого количества бактерий с инфицированными пищевыми продуктами. Разрушение бактериальных клеток и выход эндотоксинов сопровождается поражением слизистой оболочки кишечника и общей интоксикацией. Большое значение имеет микробиологическое обнаружение сальмонелл не только у больного (в целях диагностики), но и в пищевых продуктах (мясе, яйцах и т.д.) для предотвращения дальнейшего распространения заболевания. Схема микробиологических исследований аналогична таковым при выделении копрокультуры при брюшном тифе. Решающее значение при идентификации сальмонелл до вида имеет определение антигенов в реакциях агглютинации и биохимической активности на средах с углеводами. Применяют также пероральное заражение белых мышей и отмечают их гибель [22, 19].